35305 дкс: 35305 | Лоток перфорированный 300х80, L=3000, 0.8мм

Перфорированный лоток, 300х80х3000 DKC 35305 – цена, отзывы, характеристики, фото

Перфорированный лоток, 300х80х3000 DKC 35305 обеспечивает постоянный доступ воздуха к проводам, что, в свою очередь, предотвращает их перегрев. Ширина изделия – 300 мм, высота – 80 мм, что позволяет расположить кабельные линии большого объема. Материал сталь оцинкованная Способ цинкования по методу сендзимира Толщина металла, мм 0.8 Высота, мм 80 Длина, мм 3000 org/PropertyValue”> Ширина, мм 300 Тип лотка лоток перфорированный Тип лоток Параметры упакованного товара Единица товара: Штука Вес, кг: 7,31 Длина, мм: 3000 Ширина, мм: 295 Высота, мм: 80 Произведено Россия — родина бренда Россия — страна производства* Информация о производителе * Производитель оставляет за собой право без уведомления дилера менять характеристики, внешний вид, комплектацию товара и место его производства. Указанная информация не является публичной офертой Отзывы о лотке DKC 300х80 L3000 дл.3м 35305 Оставить свой отзыв На данный момент для этого товара нет расходных материалов Способы получения товара в Москве Доставка Вес брутто товара: 7. 31 кг Габариты в упаковке, мм: 3000 x 295 x 80 В каком городе вы хотите получить товар? выберите городАбаканАксайАктауАлександровАлыкельАльметьевскАнадырьАнгарскАрзамасАрмавирАрсеньевАртемАрхангельскАстраханьАхтубинскАчинскБалаковоБалашовБалезиноБарнаулБатайскБелгородБелогорскБерезникиБийскБиробиджанБлаговещенскБодайбоБокситогорскБорБорисоглебскБратскБрянскБугульмаБугурусланБуденновскБузулукВеликие ЛукиВеликий НовгородВеликий УстюгВельскВитебскВладивостокВладикавказВладимирВолгоградВолгодонскВолжскВолжскийВологдаВолховВольскВоркутаВоронежВоскресенскВыборгВыксаВышний ВолочекВязьмаВятские ПоляныГеоргиевскГлазовГорно-АлтайскГрозныйГубкинскийГусь-ХрустальныйДальнегорскДедовскДербентДзержинскДимитровградДмитровДонецкДудинкаЕвпаторияЕгорьевскЕкатеринбургЕлецЕссентукиЗаводоуковскЗеленодольскЗлатоустЗубовоИвановоИгнатовоИжевскИзбербашИнтаИркутскИшимЙошкар-ОлаКазаньКалининградКалугаКаменск-УральскийКаменск-ШахтинскийКамень-на-ОбиКанашКанскКарагандаКарасукКаргопольКемеровоКерчьКинешмаКиришиКировКиселевскКисловодскКлинКлинцыКоломнаКолпашевоКомсомольск-на-АмуреКоролевКостромаКотласКраснодарКрасноярскКропоткинКудьмаКузнецкКуйбышевКумертауКунгурКурганКурскКызылЛабинскЛабытнангиЛаговскоеЛангепасЛенинск-КузнецкийЛесосибирскЛипецкЛискиЛуневоЛюдиновоМагаданМагнитогорскМайкопМалые КабаныМахачкалаМеждуреченскМиассМинскМихайловкаМичуринскМоскваМуравленкоМурманскМуромНабережные ЧелныНадеждаНадымНазраньНальчикНаро-ФоминскНарьян-МарНаходкаНевинномысскНерюнгриНефтекамскНефтеюганскНижневартовскНижнекамскНижний НовгородНижний ТагилНовая ЧараНовозыбковНовокузнецкНовороссийскНовосибирскНовочебоксарскНовочеркасскНовый УренгойНогинскНорильскНоябрьскНурлатНяганьОбнинскОдинцовоОзерскОктябрьскийОмскОнегаОрелОренбургОрехово-ЗуевоОрскПавлодарПангодыПензаПермьПетрозаводскПетропавловскПетропавловск-КамчатскийПикалевоПлесецкПолярныйПригородноеПрокопьевскПсковПятигорскРеутовРоссошьРостов-на-ДонуРубцовскРыбинскРязаньСалаватСалехардСамараСанкт-ПетербургСаранскСарапулСаратовСаянскСвободныйСевастопольСеверныйСеверобайкальскСеверодвинскСеверскСерпуховСимферопольСлавянск-на-КубаниСмоленскСоликамскСочиСтавропольСтарый ОсколСтерлитамакСургутСызраньСыктывкарТаганрогТаксимоТамбовТаштаголТверьТихвинТихорецкТобольскТольяттиТомскТуапсеТулаТуркестанТюменьУдомляУлан-УдэУльяновскУрайУральскУрюпинскУсинскУсолье-СибирскоеУссурийскУсть-ИлимскУсть-КутУсть-ЛабинскУфаУхтаФеодосияХабаровскХанты-МансийскХасавюртЧайковскийЧебоксарыЧелябинскЧеремховоЧереповецЧеркесскЧитаЧусовойШарьяШахтыЭлектростальЭлистаЭнгельсЮгорскЮжно-СахалинскЯкутскЯлтаЯлуторовскЯрославль Самовывоз: бесплатно м. Василеостровская, г. Санкт-Петербург, Малый проспект В.О., д. 52 По предзаказу на 1 мая, после 12:00 В корзину м.Выборгская, г. Санкт-Петербург, Лесной проспект, д. 32 По предзаказу на 1 мая, после 12:00 В корзину м.Девяткино, г. Санкт-Петербург, п. Мурино, ул. Тихая, д. 14 По предзаказу на 1 мая, после 12:00 В корзину м.Звездная, г. Санкт-Петербург, Дунайский проспект, д. 27к1Б По предзаказу на 1 мая, после 12:00 В корзину м.Кировский завод, г. Санкт-Петербург, пр-т Стачек, д. 32 По предзаказу на 1 мая, после 12:00 В корзину м.Комендантский проспект, г. Санкт-Петербург, пр-т Испытателей, д. 33 По предзаказу на 1 мая, после 12:00 В корзину м. Купчино, г. Санкт-Петербург, ул. Будапештская, д. 102 По предзаказу на 1 мая, после 12:00 В корзину м.Ладожская, г. Санкт-Петербург, Заневский проспект, д. 38 По предзаказу на 1 мая, после 12:00 В корзину м.Ленинский проспект, г. Санкт-Петербург, Ленинский проспект, д. 114 По предзаказу на 1 мая, после 12:00 В корзину м.Лиговский проспект, г. Санкт-Петербург, ул. Боровая, д. 8 По предзаказу на 1 мая, после 12:00 В корзину м.Международная, г. Санкт-Петербург, ул. Бухарестская, д. 72к1 По предзаказу на 1 мая, после 12:00 В корзину м.Московская, г. Санкт-Петербург, ул. Типанова, д. 21 По предзаказу на 1 мая, после 12:00 В корзину м. Парнас, г. Санкт-Петербург, ул. Михаила Дудина, д. 6к1 По предзаказу на 1 мая, после 12:00 В корзину м.Площадь Мужества, г. Санкт-Петербург, 2-й Муринский проспект, д. 38 По предзаказу на 1 мая, после 12:00 В корзину м.Рыбацкое, г. Санкт-Петербург, Шлиссельбургский проспект, д. 17Б По предзаказу на 1 мая, после 12:00 В корзину м.Черная речка, г. Санкт-Петербург, ул. Савушкина, д. 11 По предзаказу на 1 мая, после 12:00 В корзину м.Электросила, г. Санкт-Петербург, ул. Благодатная, д. 12 По предзаказу на 1 мая, после 12:00 В корзину г. Всеволожск, проспект Всеволожский, д. 61 По предзаказу на 1 мая, после 12:00 В корзину г. Гатчина, пр-т 25 Октября, д. 42 По предзаказу на 1 мая, после 12:00 В корзину г. Колпино, проспект Ленина, д. 79 По предзаказу на 1 мая, после 12:00 В корзину г. Кронштадт, проспект Ленина, д. 13 По предзаказу на 1 мая, после 12:00 В корзину п. Шушары, Московское шоссе, д. 70к4В По предзаказу на 1 мая, после 09:00 В корзину п. Шушары, пр-т Новгородский, д. 10 По предзаказу на 1 мая, после 12:00 В корзину г. Санкт-Петербург, пр-т Ударников, д. 28/32 По предзаказу на 1 мая, после 12:00 В корзину м.проспект Просвещения, г. Санкт-Петербург, проспект Просвещения, д. 54 По предзаказу на 1 мая, после 12:00 В корзину г. Санкт-Петербург, ул. Адмирала Трибуца, д. 7 По предзаказу на 1 мая, после 12:00 В корзину м.Василеостровская, г. Санкт-Петербург, Малый проспект В.О., д. 52 пн.  –  вс.: 10:00 – 20:00 В корзину м.Выборгская, г. Санкт-Петербург, Лесной проспект, д. 32 пн.  –  вс.: 10:00 – 20:00 В корзину м. Девяткино, г. Санкт-Петербург, п. Мурино, ул. Тихая, д. 14 пн.  –  вс.: 10:00 – 21:00 В корзину м.Звездная, г. Санкт-Петербург, Дунайский проспект, д. 27к1Б пн.  –  вс.: 9:00 – 20:00 В корзину м.Кировский завод, г. Санкт-Петербург, пр-т Стачек, д. 32 пн.  –  вс.: 10:00 – 20:00 В корзину м.Комендантский проспект, г. Санкт-Петербург, пр-т Испытателей, д. 33 пн.  –  вс.: 10:00 – 21:00 В корзину м.Купчино, г. Санкт-Петербург, ул. Будапештская, д. 102 пн.  –  вс.: 10:00 – 20:00 В корзину м.Ладожская, г. Санкт-Петербург, Заневский проспект, д. 38 пн.  –  вс.: 10:00 – 21:00 В корзину м.Ленинский проспект, г. Санкт-Петербург, Ленинский проспект, д. 114 пн.  –  вс.: 9:00 – 20:00 В корзину 921755,30.348472]” data-short-name=”м. Лиговский проспект” data-all-goods-available=”0″> м.Лиговский проспект, г. Санкт-Петербург, ул. Боровая, д. 8 пн.  –  вс.: 10:00 – 20:00 В корзину м.Международная, г. Санкт-Петербург, ул. Бухарестская, д. 72к1 пн.  –  вс.: 10:00 – 20:00 В корзину м.Московская, г. Санкт-Петербург, ул. Типанова, д. 21 пн.  –  вс.: 10:00 – 21:00 В корзину м. Парнас, г. Санкт-Петербург, ул. Михаила Дудина, д. 6к1 пн.  –  вс.: 10:00 – 22:00 В корзину м.Площадь Мужества, г. Санкт-Петербург, 2-й Муринский проспект, д. 38 пн.  –  вс.: 10:00 – 20:00 В корзину м.Рыбацкое, г. Санкт-Петербург, Шлиссельбургский проспект, д. 17Б пн.  –  вс.: 10:00 – 21:00 В корзину м.Черная речка, г. Санкт-Петербург, ул. Савушкина, д. 11 пн.  –  вс.: 10:00 – 20:00 В корзину м.Электросила, г. Санкт-Петербург, ул. Благодатная, д. 12 пн.  –  вс.: 10:00 – 20:00 В корзину г. Всеволожск, проспект Всеволожский, д. 61 пн.  –  вс.: 9:00 – 20:00 В корзину г. Гатчина, пр-т 25 Октября, д. 42 пн.  –  вс.: 10:00 – 20:00 В корзину 750276,30.563235]” data-short-name=”г. Колпино” data-all-goods-available=”0″> г. Колпино, проспект Ленина, д. 79 пн.  –  вс.: 10:00 – 20:00 В корзину г. Кронштадт, проспект Ленина, д. 13 пн.  –  вс.: 10:00 – 21:00 В корзину п. Шушары, Московское шоссе, д. 70к4В пн.  –  пт.: 9:00 – 21:00 сб.  –  вс.: 9:00 – 18:00 В корзину п. Шушары, пр-т Новгородский, д. 10 пн.  –  вс.: 10:00 – 20:00 В корзину г. Санкт-Петербург, пр-т Ударников, д. 28/32 пн.  –  вс.: 10:00 – 21:00 В корзину м.проспект Просвещения, г. Санкт-Петербург, проспект Просвещения, д. 54 пн.  –  вс.: 9:00 – 20:00 В корзину г. Санкт-Петербург, ул. Адмирала Трибуца, д. 7 пн.  –  вс.: 10:00 – 21:00 В корзину Сервис от ВсеИнструменты. ру Мы предлагаем уникальный сервис по обмену, возврату и ремонту товара! Обратиться по обмену, возврату или сдать инструмент в ремонт вы можете в любом магазине или ПВЗ ВсеИнструменты.ру.

Может понадобиться

Лоток перфорированный 300х80 оцинкован по методу Сендзимира, длина 3м, t=0,8мм, ДКС, 35305

1.		Крышка на лоток с заземлением осн. 300 оцинкованная, длина 3м, t=0,6мм, ДКС, 35525	134.62 грн.	134.62 грн. / м.
2.		Угол CPO 45 горизонтальный 45° 300х80, t=0,8мм, ДКС, 36085	292.01 грн.	292.01 грн. / шт.
3.		Угол CPO 90 горизонтальный 90° 300х80, t=0,8мм, ДКС, 36025	272.10 грн.	272.10 грн. / шт.
4.		Ответвитель DPT Т-образный горизонтальный 300х80, t=0,8мм, ДКС, 36145	380.74 грн.	380.74 грн. / шт.
5.		Ответвитель DL 300х80, t=0,8мм, ДКС, 36253	243.65 грн.	243.65 грн. / шт.
6.		Ответвитель DPX крестообразный 300х80, t=0,8мм, ДКС, 36205	506.57 грн.	506.57 грн. / шт.
7.		Угол CS 45 вертикальный внутр. 45° 300/80, t=0,8мм, ДКС, 36745	251.65 грн.	251.65 грн. / шт.
8.		Угол CS 90 вертикальный внутр. 90° 300/80, t=0,8мм, ДКС, 36685	293.10 грн.	293.10 грн. / шт.
9.		Угол CD 45 вертикальный внеш. 45° 300х80, t=0,8мм, ДКС, 36865	230.92 грн.	230.92 грн. / шт.
10.		Угол CD 90 вертикальный внеш. 90° 300/80, t=0,8мм, ДКС, 36805	286.92 грн.	286.92 грн. / шт.
11.		Горизонтальный изменяемый угол CPO 0-44град 300х80, t=0,8мм, ДКС, 36016	514.93 грн.	514.93 грн. / шт.
12.		Угол CDV 90 вертикальный внеш. 300/80, t=0,8мм, ДКС, 37375	804.40 грн.	804.40 грн. / шт.
13.		Угол CDSD 90 вертикальный внеш. переходник прав. осн. 300 H80, t=0,8мм, ДКС, 37005	894.22 грн.	894.22 грн. / шт.
14.		Угол CDSS 90 вертикальный внеш. переходник лев. осн. 300 H80, t=0,8мм, ДКС, 37025	894.22 грн.	894.22 грн. / шт.
15.		Угол CSSD 90 вертикальный внутр. переходник прав. осн. 300 H80, t=0,8мм, ДКС, 37045	1129.50 грн.	1129.50 грн. / шт.
16.		Угол CSSS 90 вертикальный внутр. переходник лев. осн. 300 H80, t=0,8мм, ДКС, 37065	1129.50 грн.	1129.50 грн. / шт.
17.		Т-Ответвитель вверх TS 300/80, t=0,8мм, ДКС, 37205	990.22 грн.	990.22 грн. / шт.
18.		Крышка-ответвитель TS 300/80, t=0,8мм, ДКС, 37245	818. 58 грн.	818.58 грн. / шт.
19.		Т-Ответвитель вверх (плоский) TSS 300/80, t=0,8мм, ДКС, 37225	1225.50 грн.	1225.50 грн. / шт.
20.		Крышка-ответвитель TSS (плоск) 300/80, t=0,8мм, ДКС, 37235	1014.22 грн.	1014.22 грн. / шт.
21.		Ответвитель TD Т-образный вертикальный 300/80, t=0,8мм, ДКС, 37105	833.85 грн.	833.85 грн. / шт.
22.		Ответвитель TDS Т-образный вертикальный ун. осн. 300 H80, t=0,8мм, ДКС, 37165	1047.68 грн.	1047.68 грн. / шт.
23.		Заглушка TC 300×80, t=1мм, ДКС, 37265	105. 10 грн.	105.10 грн. / шт.
24.		Перегородка SEP длина 3м H 80, t=0,8мм, ДКС, 36500	44.88 грн.	44.88 грн. / м.
25.		Пластина крепежная GTO H80, t=1мм, ДКС, 37303	12.00 грн.	12.00 грн. / шт.
26.		Пластина PTSE для заземления, t=1мм, ДКС, 37501	17.46 грн.	17.46 грн. / шт.
27.		Пластина крепежная GSV H80, t=1мм, ДКС, 30014	22.91 грн.	22.91 грн. / шт.
28.		Уголок опорный FR TC/RRC/RRD/RRS на H 80, t=1мм, ДКС, 30189	13.82 грн.	13.82 грн. / шт.
29.		Винт с крестообразным шлицем М6х10 CM010610 ДКС	1.53 грн.	1.53 грн. / шт.
30.		Гайка с насечкой, препятствующей откручиванию М6 CM100600 ДКС	0.62 грн.	0.62 грн. / шт.

Лоток листовой перфорированный 300х80 L3000 сталь 0.8мм DKC 35305

Перфорированные листовые лотки ДКС применяются для прокладки кабеля как в помещении, так и на открытом воздухе. Лотки отличаются высокой несущей способностью – подформовка, производимая при производстве этой продукции, создает дополнительное ребро жесткости, что увеличивает несущую способность системы до 54%. Перфорация сокращает вес конструкции. В лотках имеются отверстия для отвода кабеля диаметром 11 мм, 17 мм, 21 мм. Степень пыле- и влагозащиты перфорированных лотков – IP 10 при использовании крышек, входящих в состав системы. Метод соединения “мама-папа” применяемый для системы, существенно сокращает время монтажа и создает непрерывный контур. Конструктив листовых лотков ДКС предупреждает повреждение кабеля при прокладке. Толщина стали – 0,7 мм, высота лотка – 80 мм, ширина – 300 мм, длина – 3000 мм. Полезное сечение – 23600 мм. Исполнение – “сталь, оцинкованная по методу Сендзимира”.

Технические характеристики

Бренд	DKC
Серия	S5 Combitech
Наименование товара производителя	Лоток перфорированный 300х80 L3000
Артикул производителя	35305
Произведено	Российская Федерация
Исполнение	Без соединительного элемента
Высота	80 мм
Ширина	300 мм
Длина	3000 мм

Лоток перфорированный 300х80 L3000 ДКС 35305, цена

Лоток перфорированный 300х80 L3000 ДКС 35305

Лоток перфорированный 300х80 L3000 ДКС 35305 представляет собой прямой элемент с перфорированной основой. Такие лотки могут устанавливаться как с крышкой, так и без крышки. Перфорированный лоток предназначен для прокладки проводов и кабелей напряжением до 1000В для открытых электропроводок и кабельных линий.
Выполнен из стали, оцинкованной по методу Сендзимира (масса цинкового покрытия 180-200 г/м²). Имеет отштампованные края для быстрого соединения внахлест (“папа-мама”).

Основная функция – правильно удерживать и защищать кабель.

Виды соединений:

Соединение лотков “папа-мама”:                                                                      Соединение лотков в местах однотипных окончаний:

                

Технические характеристики:

Соответствие нормам	ТУ 3449-013-47022248-2004
Высота, мм	80
Ширина, мм	300
Толщина листовой стали, мм	0.8
Длина, мм	3000
Т. И.З., мм2	23600
Перфорация	Есть
Материал	Сталь, оцинкованная по методу Сендзимира
Защитное покрытие поверхности	Непрерывное холодное цинкование
Исполнение	Без разъема

Основные особенности перфорированных лотков ДКС:

• широкий ряд типоразмеров;
• легкий монтаж благодаря боковой перфорации;
• надежность и жесткость конструкции благодаря прямоугольной выштамповке;
• простота монтажа кабельных лотков перфорированных обусловливается фирменным соединением ДКС «папа-мама» (внахлест) и экономит до 60% материалов и времени монтажа;
• благодаря большому выбору аксессуаров из перфорированных лотков можно монтировать конструкции любой сложности и устанавливать их на любую поверхность.

org/ItemList”> org/NameValueStructure”> org/NameValueStructure”>

Характеристики
Бренд	ДКС
Вес брутто	0,1 кг
Высота	80 мм
Длина	3000 мм
Исполнение	Без разъема
Материал	Сталь
Перфорация	Да
Т.И.З.	23600 мм2
Тип лотков и комплектующих	Перфорированные лотки
Толщина стали	0.8 мм
Цвет	Серый
Ширина	300 мм

Эльдорадо: Влияние обязательств по раскрытию информации на вознаграждение руководителей

Эльдорадо – хранилище ТУ Дортмунд
Ресурсы для исследований, преподавания и обучения

:

Авторы:	Дибалла, Катарина Крафт, Корнелиус
Название:	Влияние обязательств по раскрытию информации на компенсацию исполнительного руководства – Оценка политики с использованием квантильных оценок обработки
Реферат:	В данном эмпирическом исследовании анализируются эффекты введения сильно увеличенного требования к раскрытию информации в Германии об уровне вознаграждения руководителей.Один инновационным аспектом является сравнение компаний, добровольно последовавших за рекомендация Кодекса государственного управления Германии до того, как соответствующий закон был реализована и опубликована подробная информация о вознаграждении руководителей с другие фирмы, которые этого не сделали. Условные и безусловные квантильные различия-безразличия модели оцениваются. Компании, отказавшиеся публиковать данные до того, как это стало обязательным, показать снижение уровня компенсации для верхних квантили.Следовательно, обязательное требование публиковать подробную информацию снизили более высокие уровни вознаграждения руководителей, но не повлияли на исполнительные компенсация на более низком или среднем уровне.
Предметные рубрики:	Вознаграждение руководителей квантильный эффект обработки оценка политики регулирование корпоративного управления Обязательства по раскрытию информации
Предметные рубрики (RSWK):	Vorstandsmitglied Vergütung Publizitätscheflicht10	http: // hdl.handle.net/2003/35305 http://dx.doi.org/10.17877/DE290R-17348
Дата выпуска:	2016
В коллекциях:	Sonderforschungsbereich (SFB) 823

Предметы в Эльдорадо защищены авторским правом, все права защищены, если не указано иное.

Wac: новая субъединица Augmin, необходимая для выравнивания хромосом, но не для сборки ацентросомных микротрубочек в женском мейозе | Журнал клеточной биологии

Иммуноокрашивание проводили и исследовали, как описано ранее для клеток S2 (Джинджев и др., 2005; Hughes et al., 2008), ЦНС личинок (Cullen et al., 1999), неактивированные ооциты (Cullen and Ohkura, 2001), активированные ооциты (Cullen et al., 2005) и эмбрионы (Cullen et al., 1999) за исключением того, что для конфокального анализа использовался Axio Imager, присоединенный к возбудителю (LSM5; Carl Zeiss, Inc.). Окрашивание орсеином ЦНС личинок и фазово-контрастная микроскопия сперматид были описаны ранее (Cullen et al., 1999). Частоту анеуплоидии в ЦНС личинок оценивали по окрашиванию орсеином раздавленных ЦНС после инкубации с колхицином (3 мкг / мл в растворе 0.7% NaCl) и гипотонический шок (в 0,5% цитрате натрия). Сдавленные клетки, которые явно имели шесть больших хромосом, считались диплоидами, тогда как клетки с большим или меньшим количеством хромосом считались гиперплоидами или гипоплоидами соответственно. wacΔ и дикий тип показал 0,7 и <0,4% гиперплоидов и 8,2 и 7,7% гипоплоидов ( n > 250), хотя большая часть очевидных гипоплоидов, вероятно, была вызвана раздавливанием мозга (т. Е. Артефактами) . Живые клетки S2 в культуральной среде на покровном стекле, покрытом конканавалином А, исследовали при комнатной температуре под микроскопом (Axiovert; Carl Zeiss, Inc.) прикрепляли к конфокальной головке с вращающимся диском (Yokogawa) с помощью Volocity (PerkinElmer). Иммуноокрашивание идентификатора центромеры показало равную сегрегацию центромер в большинстве веретен с появлением телофазы в Wac-истощенных клетках S2. Мы также видим как настоящие анафазные, так и псевдоанафазные клетки с разбросанными по веретену хромосомами. Интенсивность сигналов GFP-тубулина оценивали путем усреднения интенсивности сигнала в пределах трех квадратов равного размера 0,4 мкм ² и вычитания фонового сигнала.Интенсивности нормализовали по интенсивности сигнала на полюсах в профазе. Сигналы γ- и α-тубулина измеряли в клетках, иммуноокрашенных GTU-88 и YOL1 / 34 (Sigma-Aldrich). Для обоих сигналов средняя интенсивность в веретене (среднее значение трех квадратов 0,16 мкм ² ) была нормализована с использованием средней интенсивности на полюсе после корректировки фона. Значимость анализировали с помощью критерия Вилкоксона. Для FISH в ооцитах ооциты стадии 14, полученные, как описано ранее (Cullen and Ohkura, 2001), постфиксировали 4% формальдегидом и проводили гибридизацию, как описано в Dernburg et al.(1996) с использованием двух 40-мерных олигонуклеотидов, конъюгированных с Alexa Fluor 488, соответствующих 359-п.н. повторам, обнаруженным на центромере Х-хромосомы, в качестве зондов. Цифровые изображения были импортированы в Photoshop (Adobe), и контраст / яркость были изменены равномерно по всему полю.

(PDF) Реагирование на климатические и патогенные угрозы различается в зависимости от биодинамических и обычных виноградных лоз

www.nature.com/scientificreports/

13

НАУЧНЫЕ ОТЧЕТЫ | (2018) 8: 16857 | DOI: 10.1038 / s41598-018-35305-7

24. Баочжун М., Мартелли Г. П., Голино Д. А. и Фукс М. Вирусы виноградной лозы: молекулярная биология, диагностика и управление. Springer

https://doi.org/10.1007/978-3-319-57706-7 (2017).

25. Джонс, Дж. Д. Г. и Дангл, Дж. Л. Иммунная система растений. Nature 444, 323–329, https://doi.org/10.1038/nature05286 (2006).

26. Болонья, Н. Г. и Воиннет, О. Разнообразие, биогенез и активность эндогенного сайленсинга малых НК у Arabidopsis, Annu.

Ред. Завод. Биол. 65, 473–503. https://doi.org/10.1146/annurev-arplant-050213-035728. Epub 2014 26 февраля (2014).

27. Weiberg, A. & Jin, H. Small NAs секретные агенты во взаимодействиях растений и патогенов. Curr. Opin. Plant Biol. 87–94. https: // doi.

орг / 10.1016 / j.pbi.2015.05.033. Epub 2015 26 июня. Обзор. PMID: 26123395 (2015).

28. B oy o, A. et al. Трансгенерационная адаптация Arabidopsis к стрессу требует метилирования ДНК и функции белков Dicer-lie

.PloS One. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0009514 (2010). PMID: 20209086 ;.

29. Wei, W. et al. Роль малых NAs в репарации двухцепочечных разрывов ДНК, Cell 149, 101–112. pmid: 22445173; https: // doi.

org / 10.1016 / j.cell.2012.03.002 (2012).

30. Gao, M. et al. Ago2 способствует рекрутированию «ad51» и репарации двухцепочечных разрывов ДНК путем гомологичной рекомбинации, Cell Res. 24,

532–541. PMID: 24662483; https://doi.org/10.1038/cr.2014.36 (2014).

31.Мартинес-Медина, А. и др. ecognizing Plant Defense Priming, Trends Plant Sci. 21, 818–822 https://doi.org/10.1016/j.

tplants.2016.07.009. Epub 2016 6 августа (2016).

32. Mauch-Mani B. I., Baccelli, I. & Flors, V. Защитная прайминга: адаптивная часть индуцированного сопротивления, Annu. Rev. Plant Biol. 68,

485–512. https://doi.org/10.1146/annurev-arplant-042916-041132. Epub 2017 2 февраля (2017).

33. Braidot, E. et al. Транспорт и накопление флавоноидов в виноградной лозе (Vitis vinifera L.). Сигнал завода. Behav. 3, 626-32.

pmid: 19513253; PMCID: PMC2634543 (2008 г.).

34. Латуш, Г., Беллоу, С., Путаро, А., Мейер, С. и Церович, З. Г. Влияние конститутивных фенольных соединений на реакцию листьев

виноградной лозы (Vitis vinifera L.) на инфекцию пользователя Plasmopara viticola. Planta 237, 351–361. https://doi.org/10.1007/s00425-012-

1776-х; Epub 2012 19 октября; pmid: 23213137 (2013).

35. Fauteux, F., Chain, F., Belzile, F., Menzies, J. G. & Bélanger,. . Защитная роль кремния в патосистеме Arabidopsis и мучнистой росы

, Proc. Natl. Акад. Sci. USA 103, 17554–17559. Epub 2006, 2 ноября. PMID: 17082308 (2006).

36. Van Bochaven, J. De Vleesschauwer, D. & Höe, M. На пути к установлению устойчивости растений к болезням широкого спектра: кремний ведет

в путь, J. Exp. Бот. 64, 1281–93 https://doi.org/10.1093/jxb/ers329. Epub, 2012, 18 декабря. PMID: 23255278 (2013).

37.Марлович, О. и др. Кремний способствует биосинтезу цитоининов и задерживает старение арабидопсиса и сорго, среды растительных клеток.

40, 1189–1196. https://doi.org/10.1111/pce.12913. Epub 2017, апрель 12, PMID: 28102542 (2017.

38. Debona D., odrigues, FA & Datno, LE Silicon’s ole в абиотических и биотических стрессах растений, Annu. Rev. Phytopathol. 55, 85–107.

https://doi.org/10.1146/annurev-phyto-080516-035312. PMID: 28504920.

39. Harsh, P.Б., Вальер, Т. С., Шеннан, А. Дж., Стермитц, Ф. Э. И Виванко, Дж. М. Структурно-зависимая фитотоксичность катехинов и других

Флавоноиды: превращения флавоноидов с помощью бесклеточных белковых экстрактов Centaurea maculosa (пятнистый шиповник) oots. J. Agric. Продукты питания

Chem. 51, 897–901, https://doi.org/10.1021/jf020978a (2003).

40. Hirasawa, M. & Taada,. Множественные эффекты катехина зеленого чая на противогрибковую активность антимикотиков против Candida albicans.

Журнал антимикробной химиотерапии 53, 225–229, https://doi.org/10.1093/jac/dh046 (2004).

41. Цай, Ю. З., Сун, М., Син, Дж., Лу, К. и Корше, Х. Взаимосвязь между структурой и активностью улавливания радикалов фенольных соединений из

традиционных китайских лекарственных растений. Науки о жизни 78, 2872–2888, https://doi.org/10.1016/j.lfs.2005.11.004 (2005).

42. Tabart, J., evers, C., Pincemail, J., Defraigne, J.O. & Dommes, J. Сравнительная антиоксидантная способность фенольных соединений

, измеренная с помощью различных тестов.Пищевая химия 113, 1226–1233, https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2008.08.013 (2009).

43. Huglin, P. Biologie et écologie de la vigne Payot Lausanne (1986).

44. Каллон, М., Ласкум, П. и Барте, Ю. Агир данс неясно. Essai sur la démocratie, Париж, Le Seuil (2001).

45. Анси, В., Авеланж, И., Дедье, Б. Agir en position d’incertitude en Agriculture. egards pluridisciplinaires au Nord et au Sud,

Paris, P.I.E. Питер Ланг Экополис 17, 13–17 (2013).

46. Cerovic, Z. G. et al. Неразрушающий диагностический тест азотного питания виноградной лозы (Vitis vinifera L.) на основе измерений dualex leaf-clip

в поле. J. Agric. Food Chem. 63, 3669–3380. pmid: 25801210; https://doi.org/10.1021/acs.jafc.5b00304 (2015).

47. omon, M. et al. NA сайленсинг устойчив к низким температурам в виноградной лозе. PLoS One. 8 https://doi.org/10.1371/journal.

поне.0082652 (2013).

48. Trouvelot, S. et al. Сульфат бета-1,3-глюкана индуцирует устойчивость виноградной лозы к Plasmopara viticola посредством праймирования защитных реакций

, включая гибель клеток H-lie. Мол. Взаимодействие с растительными микробами. 2, 232–43 https://doi.org/10.1094/MPMI-21-2-0232.

PMID: 18184067 (2008 г.).

49. Chong, J., Le Henan, G., Bertsch, C. & Walter, B. Идентификация, анализ экспрессии и характеристика защитных и сигнальных генов

в Vitis Vinifera.Plant Phys. и биохимия 46, 469–481 (2008).

50. Дюфур, М.С., Фонтейн, С., Монтарри, Дж. И Корио-Костет, М.Ф. Оценка устойчивости к фунгицидам и разнообразия патогенов в некаторе Erysiphe

с использованием количественных анализов PC в реальном времени. Вредитель Манаг. Sci. 67, 60–69. https://doi.org/10.1002/ps.2032. Epub 2010, 14 октября.

51. Pacico, D., Caciagli, P., Palmano, S., Mannini, F. & Marzachì, C. Количественное определение вирусов-1 и -3, связанных со скручиванием листьев виноградной лозы,

Grapevine вирус A, вирус фанлиста виноградной лозы и вирус Grapevine ec в полевых сборах Vitis vinifera L.«Неббиоло» в режиме реального времени

с обратной транскрипцией-ПК ». J. Virol. Методы 172, 1–7. https://doi.org/10.1016/j.jviromet.2010.12.002. Epub 2010 15 декабря (2011).

52. Осман, Ф., Олинца, Т., Ходзич, Э. и Голино, А. Цовани, Сравнительные процедуры обработки проб и количественное определение вирусов виноградной лозы с помощью PC

. J. Virol. Методы 179, 303–310, https://doi.org/10.1016/j.jviromet.2011.11.008 (2012).

53. Ле, С., Джосс, Дж. И Хассон, Ф. Анькаж для многомерного анализа.Журнал статистического программного обеспечения. 25, 1–18. http: //www.jstatso.

org / v25 / i01 / (2008).

Благодарности

Большое спасибо всем участникам LMC и особенно участникам группы Westhalten (GIEE): Boesch M,

Breuzard M, Burgenath M, Bursin A, Dauer E, Diringer S, Hetsch R, Huntzinger B , Isner P, Kaepfer B, Koehler C,

Lallemand JF, Lallemand H., Lassablière R, Miclo Y, Montavon P, Ribeiro S, Rominger C, Rué P, Schäfer P, Schatz G,

Schatz V, Schermesser F , Шлегель Дж.L., Schmitt D, Wisselmann F, Muré T., Cousin F. anks к F. Hammel за советом

по климатическим данным. Благодарит Y Chupeau, H. Vaucheret и S. Malembic-Maher за помощь в редактировании рукописи.

Мы благодарим трех следующих друг за другом президентов и директоров AVA за их поддержку этого долгосрочного проекта. Финансирование:

Этот проект финансировался метапрограммой SmaCH INRA, France Agrimer, Conseil Interprofessionnel

des Vins d’Alsace (CIVA), Agence Eau Rhin Meuse (AERM) и Inter-Reg Agroform.

Вклад авторов

Все авторы внесли свой вклад в зачатие исследования, наблюдали за данными, участвовали в их анализе. D.S. и C.C.

проведен анализ метаболитов. C.T.C. и Д.Д. провести эксперименты с uidigm. Все остальные авторы взяли образцы,

измерений на виноградниках и провели молекулярный анализ. I.S.G., M.L. C.T.C., D.D. В частности,

отвечали за статистику. I.S.G. и J.E.M. участвовал во всех этапах эксперимента и написал статью.Все авторы

рецензировали рукопись.

Содержимое предоставлено Springer Nature, применяются условия использования. Права защищены

Связанная с ожирением активация хемотаксических факторов моноцитов в адипоцитах

Abstract

ЦЕЛЬ – Мы стремились оценить полную картину всех хемотаксических факторов моноцитов, которые потенциально способствуют накоплению макрофагов жировой ткани при ожирении.

Дизайн и методы исследования – Экспрессию и регуляцию членов всего суперсемейства хемокинов оценивали в жировой ткани и изолированных адипоцитах мышей с ожирением в сравнении с худыми мышами.Кинетика инфильтрации макрофагами жировой ткани характеризовалась сортировкой клеток, активируемой флуоресценцией. Было исследовано влияние жирных кислот на стимуляцию экспрессии хемокинов в адипоцитах и ​​лежащие в основе механизмы.

РЕЗУЛЬТАТЫ – Было обнаружено, что шесть моноцитарных хемотаксических факторов имеют преимущественную регуляцию в изолированных адипоцитах по сравнению с клетками стромальных сосудов у мышей с ожирением, впервые, хотя ранее сообщалось, что большинство из них имеют повышенную регуляцию во всей жировой ткани.У мышей с ожирением, вызванным диетой, увеличение жировой ткани, увеличение количества адипоцитов и повышение экспрессии множественных хемокинов предшествуют инициации инфильтрации макрофагами. Обнаружено, что свободные жирные кислоты (СЖК) являются индукторами для активации этих хемокинов в адипоцитах 3T3-L1, и этот эффект можно частично ослабить за счет снижения экспрессии Toll-подобного рецептора 4. СЖК индуцируют экспрессию хемотаксических факторов моноцитов в адипоцитах посредством как транскрипционно-зависимых, так и независимых механизмов.В отличие от сообщаемой роли JNK в качестве эксклюзивного медиатора индуцированной FFA экспрессии хемоаттрактантного протеина-1 (MCP-1) в макрофагах, мы показываем новую роль ингибитора киназы κB-β (IKKβ) в опосредовании индуцированной FFA повышающая регуляция всех шести хемокинов и роль JNK в индуцированной FFA повышающей регуляции MCP-1 и MCP-3.

ВЫВОДЫ – Множественные хемокины, полученные из адипоцитов, могут способствовать связанной с ожирением инфильтрации макрофагов WAT с FFA в качестве потенциальных триггеров и участия как путей IKKβ, так и JNK.

Диабет 2 типа, связанный с ожирением, связан с воспалением низкой интенсивности (1,2). Исследования на людях продемонстрировали повышенные циркулирующие уровни воспалительных маркеров у пациентов с ожирением и диабетом (1,3). Кроме того, мононуклеарные клетки крови (МНК) при ожирении также находятся в провоспалительном состоянии (3). Обнаружение накопления макрофагов в жировой ткани тучных грызунов и людей выявило потенциально важный источник воспалительных молекул при ожирении (4,5). Хорошо известно, что активированные макрофаги секретируют множество воспалительных цитокинов и хемокинов, которые нарушают передачу сигналов инсулина (6,7).Нарушение регуляции липолиза за счет увеличения экспрессии жировых цитокинов является важным фактором, вызывающим системную резистентность к инсулину из-за повышенных уровней циркулирующих свободных жирных кислот (FFA). Также сообщалось, что повышение уровня циркулирующих FFAs вызывает воспаление в MNC (8). Уменьшение инфильтрации жировых макрофагов у мышей с ожирением, вызванным диетой (DIO), с дефицитом моноцитов, хемоаттрактантного белка-1 (MCP-1) и его основного рецептора CCR2, сопровождающееся снижением экспрессии цитокинов в жировой ткани и снижением уровней циркулирующих FFA, было связано с улучшением системного чувствительность к инсулину (9,10).Трансгенные мыши, сверхэкспрессирующие MCP-1 в жировой ткани, с повышенным содержанием жировых макрофагов и повышенными уровнями циркулирующих FFA, являются инсулинорезистентными (10,11). Тем не менее, роль МСР-1 в жировой инфильтрации макрофагов ожирения является спорной, поскольку недавним исследование показало, что МСР-1-дефицитного мышей имеет неизменное содержание жировой ткани макрофагов (12). Уменьшение инфильтрации макрофагов и снижение экспрессии воспалительных генов в жировой ткани также были связаны с потерей веса у лиц с ожирением (13,14).Тиазолидиндионы, класс препаратов, повышающих чувствительность к инсулину, которые в основном улучшают чувствительность к инсулину жировой ткани у пациентов с диабетом 2 типа, также обладают мощным противовоспалительным действием, подавляют экспрессию генов макрофагов жировой ткани in vitro и in vivo и ингибируют провоспалительные МНК (15–22). У мышей DIO, получавших антагонист CCR2, содержание жировых макрофагов снижалось на 28%, а гипергликемия улучшалась (9). Эти результаты показывают, что устранение экстравазации макрофагов в жир при ожирении может быть полезным для улучшения чувствительности к инсулину всего тела.

MCP-1 был спорным кандидатом в хемокин для рекрутирования макрофагов в WAT при ожирении, что указывает на участие других хемокинов. В настоящем исследовании мы исследовали все суперсемейство хемокинов мышей на предмет их экспрессии и регуляции в жировой ткани мышей с ожирением. Было обнаружено, что шесть хемокинов значительно увеличиваются в жировой ткани с ожирением. Мы впервые обнаружили, что повышение уровня хемокинов в жировой ткани с ожирением происходит преимущественно в адипоцитах и ​​что СЖК являются индукторами специфической активации вышеупомянутых шести хемокинов в культивируемых адипоцитах.Хотя было продемонстрировано, что JNK опосредует индуцированную FFA экспрессию MCP-1 в макрофагах (23), ингибитор κB (IκB) киназы-β (IKKβ) является основным медиатором индуцированной FFA позитивной регуляции множества хемокинов в адипоцитах.

РАЗРАБОТКА И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Клетки, реагенты и методы лечения.

клеток 3T3-L1 получали из Американской коллекции типовых культур тканей. Сублины клеток 3T3-L1, стабильно экспрессирующие короткую мешающую шпильку РНК (shRNA) против Toll-подобного рецептора 4 (shTLR4) или scramble shRNA, были созданы, как описано ранее (24).CAR-клетки 3T3-L1, подлиния 3T3-L1, стабильно экспрессирующая усеченный рецептор аденовируса, были предоставлены доктором Дэвидом Орлики (Центр медицинских наук Университета Колорадо, Денвер, Колорадо). CAR-клетки 3T3-L1 значительно повысили эффективность аденовирусной инфекции по сравнению с обычными клетками 3T3-L1 (25). Для дифференциации преадипоциты выращивали до конфлюэнтности и индуцировали модифицированной Дульбекко средой Игла (DMEM) с добавлением 10% космической телячьей сыворотки (CCS), 1 мкг / мл инсулина, 0,5 ммоль / л изобутилметилксантина и 1 мкмоль / л дексаметазона в течение 3 дней. дней.После индукции клетки поддерживали в среде DMEM, содержащей 10% CCS и 1 мкг / мл инсулина, еще в течение 7 дней. Смесь FFA, дексаметазон, актиномицин D и циклогексимид были приобретены у Sigma. Для обработки FFA адипоциты 3T3-L1 обрабатывали смесью 0,5 ммоль / л FFA в присутствии BSA в молярном соотношении 4: 1. NADPH, ядерный фактор-κB (NF-κB) и ингибиторы JNK были приобретены у Calbiochem. Розиглитазон был приобретен в компании BioMol International. MCP-1, MCP-2, MCP-3, моноцитарный воспалительный белок-1α (MIP-1α) и связанный с макрофагами белок (MRP) -1 ELISA-наборы были приобретены у Antigenix America.Набор MRP-2 ELISA был приобретен у R&D Systems. Малая интерферирующая РНК JNK1 (миРНК) была приобретена у Dharmacon. МиРНК JNK2 и IKKβ были приобретены в Santa Cruz Biotechnology. Антитела JNK1 и IKKβ были приобретены в Santa Cruz Biotechnology. Антитело Phospho-JNK было приобретено в Cell Signaling Technology.

Мыши.

Самцы мышей ob / ob и контрольных однопометников были приобретены в лаборатории Джексона. Этих мышей кормили стандартной пищей и забивали в возрасте 9 недель для сбора тканей.Что касается мышей DIO, мышей C57BL / 6J были приобретены в лаборатории Джексона в возрасте 3 недель, признаны в течение недели и питались либо диетой (5% ккал от жира), либо диетой с высоким содержанием жиров (60% ккал от fat; D12492; Research Diets) в течение 20 недель. Для лечения розиглитазоном самцам мышей ob / ob в возрасте 9 недель вводили пероральный зонд один раз в день в дозе 15 мг / кг в течение 28 дней подряд. В конце исследования мышей умерщвляли вдыханием CO ₂ и вырезали эпидидимальные жировые подушечки для экстракции РНК.Эксперименты на животных были одобрены Комитетом по уходу и использованию животных больницы Род-Айленда.

Выделение первичных адипоцитов.

Эпидидимальные белые жировые подушечки у мышей DIO вырезали, взвешивали и промывали в буфере для выделения. Затем жировые подушечки разрезали на мелкие кусочки в буфере для выделения с добавлением 1 мг / мл коллагеназы типа I и расщепляли при 37 ° C на водяной бане со встряхиванием при 100 об / мин в течение 45 минут. Затем переваренные ткани фильтровали через сетку 400 мкмоль / л, чтобы получить суспензию отдельных клеток.Клетки дважды промывали буфером для выделения перед экстракцией РНК.

Профилирование транскрипции.

Тотальную РНК экстрагировали из жировой ткани придатка яичка мышей ob / ob, и DIO. Двадцать микрограммов РНК из каждого образца дополнительно очищали для удаления загрязняющих органических веществ и видов, не являющихся РНК, с использованием кремнеземной смолы в соответствии с инструкциями производителя. Полная РНК была преобразована в биотинилированную, фрагментированную кРНК и гибридизована с мышиными чипами U74Av2 с использованием протоколов, рекомендованных производителем микрочипов.Образцы окрашивали и промывали на Fluidics Station 400 и сканировали на сканере GeneArray. Первичное извлечение данных выполняли с помощью Microarray Suite 5.0, а нормализацию сигнала по образцам выполняли с использованием всех наборов зондов со средним значением экспрессии 500.

Выделение РНК и ПЦР в реальном времени.

образцов РНК экстрагировали с помощью реагента TRIzol. Профиль экспрессии и регуляции хемокинов измеряли с помощью ПЦР-анализа в реальном времени. Для обратной транскрипции использовали случайные гексамеры.Анализ ПЦР в реальном времени выполняли в 15 мкл реакции на 96-луночном прозрачном планшете с использованием набора реагентов Power SYBR Green RT-PCR на термоциклере ABI Prism, модель 7500. Относительные уровни экспрессии мРНК нормализовали до экспрессии 28S рРНК.

Электропорация адипоцитов и анализ люциферазы.

адипоцитов 3T3-L1 трансфицировали конструкцией NF-κB-люциферазы (Firefly) путем электропорации с помощью системы Nucleofector (Amaxa Biosystems) в соответствии с инструкциями производителя.Вкратце, адипоциты 3T3-L1 трипсинизировали, ресуспендировали в растворе Nucleofector в концентрации 2,0 × 10 ⁶ клеток / 100 мкл и смешивали с люциферазным репортерным вектором. Затем клетки подвергали электропорации с помощью программы A-033 с использованием Nucleofector II (Amaxa Biosystems). Клетки немедленно высевали на 12-луночные планшеты (1,0 × 10 ⁶ клеток / лунку) после электропорации. Через 24 часа после электропорации клетки не содержали сыворотки в течение ночи. Ингибитор NF-κB наносили на адипоциты за 1 час до обработки FFA, а также добавляли во время обработки FFA.Для анализа люциферазы трансфицированные клетки дважды промывали PBS, лизировали в двух циклах замораживания-оттаивания и центрифугировали при 10 000 g в течение 5 минут при 4 ° C для удаления клеточного дебриса. Активность люциферазы светлячка измеряли путем смешивания 20 мкл клеточного экстракта со 100 мкл буфера для анализа люциферазы, содержащего субстрат люциферазы светлячка. Светоотдача измерялась в течение 5 с на люминометре Perkin Elmer.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Ожирение связано с активацией множества хемотаксических факторов моноцитов в жировой ткани и адипоцитах.

На сегодняшний день идентифицировано 46 хемокинов и найдено 38 мышиных ортологов, включая псевдоген. Мы проанализировали экспрессию и регуляцию мышиных хемокинов в жировой ткани у мышей ob / ob и DIO с помощью профилирования транскрипции и анализа ПЦР в реальном времени. Мы выбрали 9-недельных мышей ob / ob и 24-недельных мышей DIO, получавших диету с высоким содержанием жиров в течение 20 недель из-за их сопоставимого ожирения. Метаболические параметры этих мышей перечислены в таблице 1.Было обнаружено, что шесть хемокинов CC и один CXC значительно повышают уровень WAT у мышей ob / ob и DIO. Эти хемокины CC включают MCP-1 , MCP-2 , MCP-3 , MIP-1 α, MRP-1 и MRP-2 (рис. 1). Хемокин CXC MIP-2 также значительно повышен в WAT как у мышей ob / ob , так и у мышей DIO; MIP-1 β был значительно повышен в WAT у мышей ob / ob , но не у мышей DIO; MIP-2γ был значительно повышен в WAT мышей DIO, но не ob / ob мышей.Интересно, что все шесть хемокинов CC с повышенной регуляцией обладают хемотаксической способностью моноцитов. Разделение адипоцитов и стромальных сосудистых клеток указывает на то, что эти хемокины CC в основном увеличиваются в первичных адипоцитах (рис. 1). Ранее сообщалось, что MCP-1, MCP-2, MCP-3, MIP-1α и MRP-2 увеличиваются на уровне мРНК во всей жировой ткани (4,7,9,26). Наше исследование не только добавляет MRP-1 в список, но также указывает на то, что повышение экспрессии хемокинов в основном происходит в адипоцитах. Уровни белка MCP-1, MCP-3, MIP-1α, MRP-1 и MRP-2 были значительно увеличены на 402, 213, 604, 92 и 190%, соответственно, в WAT мышей DIO с белком уровень ГЦН-2 неизменен (рис.1 B ). Уровни белка MCP-1, MCP-2, MCP-3, MIP-1α, MRP-1 и MRP-2 были значительно увеличены на 85, 16, 134, 134, 21 и 60% соответственно в WAT. мышей ob / ob (рис. 1 B ). Уровни циркулирующих MCP-1, MCP-3, MRP-1 и MRP-2 были значительно увеличены на 160, 254, 41 и 17%, соответственно, в плазме мышей DIO (рис. 1 C ). Уровни циркулирующих MCP-1 и MCP-3 также были значительно увеличены на 345 и 71% соответственно в плазме мышей ob / ob (рис.1 С ). Уровни циркуляции MCP-2 не изменялись ни у мышей DIO, ни у мышей ob / ob . Уровни циркуляции MRP-1 и MRP-2 увеличились только у мышей DIO, но остались неизменными у мышей ob / ob . Уровень циркуляции MIP-1α не определялся ни у мышей ob / ob , ни у мышей DIO. Чтобы понять, когда эти хемокины начинают увеличиваться, мышей C57BL / 6J в возрасте 4 недель на короткое время применяли диету с высоким содержанием жиров. Уровень белка MCP-1 быстро увеличивался через 1 день после диеты с высоким содержанием жиров и продолжал расти через 3 и 7 дней диеты с высоким содержанием жиров (рис.1 D ). Уровни протеина MCP-2 и MCP-3 увеличивались в течение 1 дня при диете с высоким содержанием жиров, а повышение стало значительным через 3 и 7 дней при диете с высоким содержанием жиров. Уровень белка MRP-2 значительно увеличился через 7 дней диеты с высоким содержанием жиров. Однако уровни белка MIP-1α и MRP-1 существенно не повысились в течение 1 недели диеты с высоким содержанием жиров. Эти результаты показывают, что MCP-1, MCP-2, MCP-3 и MRP-2 могут быть более важными при начальной экстравазации макрофагов в жировую ткань по сравнению с MIP-1α и MRP-1, которые, вероятно, играют роль в привлечении макрофагов. в жировую ткань на более поздней стадии развития ожирения.Чтобы определить, происходит ли повышение экспрессии хемокинов в жировой ткани до инфильтрации макрофагами, мы оценили кинетику инфильтрации макрофагов, сравнив ожирение и количество макрофагов у мышей DIO и контрольной группы худых 1, 4, 8, 12, 16 и 20 недель при высокой нагрузке. жирная диета (дополнительная таблица 1, доступная в онлайн-приложении по адресу http://dx.doi.org/10.2337/db07-1344). Наши результаты ясно показывают, что увеличение жировых подушечек, увеличение количества адипоцитов и повышение экспрессии хемотаксических факторов моноцитов происходит уже через 1 неделю при диете с высоким содержанием жиров, но содержание жировых макрофагов не увеличивалось значительно до 12 недель на диете с высоким содержанием жиров. .Недавнее исследование показало, что двойные положительные клетки F4 / 80 и CD11C в основном ответственны за опосредованную макрофагами воспалительную активность (23). Поэтому мы проанализировали содержание жировых макрофагов путем подсчета двойных положительных клеток по F4 / 80 и CD11C.

РИС. 1.

Ожирение связано с активацией множества хемотаксических факторов моноцитов в жировой ткани и адипоцитах. A : Значительно повышенная регуляция хемотаксических факторов моноцитов в эпидидимальных жировых подушках у ob / ob мышей по сравнению с худой контрольной группой ( n = 5, вверху слева ) у мышей DIO по сравнению с худой контрольной ( n = 5, вверху справа ), в изолированных адипоцитах мышей DIO по сравнению с худой контрольной ( n = 4, внизу слева ) и в изолированных стромальных сосудистых клетках в Мыши DIO по сравнению с контролем ( n = 4, внизу справа ).Экспрессию хемокинов измеряли с помощью ПЦР-анализа в реальном времени. Для сравнения, уровень экспрессии этих генов у худых мышей был произвольно установлен на 1. B : Уровни белка MCP-1, MCP-2, MCP-3, MIP-1α, MRP-1 и MRP- 2 в жировой ткани мышей ob / ob и DIO. C : Уровни в плазме MCP-1, MCP-2, MCP-3, MRP-1 и MRP-2 у мышей ob / ob , и DIO. D : Уровни белка MCP-1, MCP-2, MCP-3, MIP-1α, MRP-1 и MRP-2 в жировой ткани мышей с постным жиром на диете с высоким содержанием жиров.Планки погрешностей представляют ± SE. * P <0,05, ob / ob ( O ) по сравнению с постным (L) или с высоким содержанием жира (HF) по сравнению с низким содержанием жира (LF). HFD, диета с высоким содержанием жиров; WK, неделя.

ТАБЛИЦА 1

Метаболические параметры мышей ob / ob и DIO

FFA являются мощными индукторами экспрессии хемокинов.

Массивное расширение жировой ткани отражает потребность организма в накоплении избыточного количества энергии в форме триглицерида, который синтезируется с использованием свободных жирных кислот и глицерина в качестве субстратов.Действие свободных жирных кислот и глицерина на продукцию хемокинов в адипоцитах не было документально подтверждено. Чтобы определить, может ли избыток FFA и / или глицерина быть стимулом для увеличения продукции хемокинов, адипоциты 3T3-L1 стимулировали смесью 0,5 ммоль / л FFA / BSA или 0,5 ммоль / л глицерина. Мы решили использовать смесь 0,5 ммоль / л насыщенных (лауриновая и миристиновая кислоты) и ненасыщенных (олеиновая, линолевая и арахидоновая кислоты) СЖК для стимуляции. СЖК резко повышали экспрессию MCP-1 , в то время как глицерин не влиял (рис.2 А ). Дальнейшие эксперименты показали, что СЖК также способны активировать MCP-2 , MCP-3 , MIP -1α, MRP-1 и MRP-2 в адипоцитах 3T3-L1 (рис. 2 ). А ). В качестве отрицательного контроля экспрессия эотаксина 2 , который не активируется в жировой ткани с ожирением, была исследована в адипоцитах 3T3-L1, и было обнаружено, что она не повышается при обработке FFA (фиг. 2 A ). Повышение уровня мРНК вышеуказанных хемокинов обработкой FFA сопровождается повышенной секрецией белка в кондиционированную среду (рис.2 В ). Стимулированная FFA продукция хемокинов в адипоцитах 3T3-L1 зависит от дозы (данные не показаны) и времени (фиг. 3). Детальный временной ход экспрессии хемокинов показал, что максимальная экспрессия MCP-1 , MCP-2 , MCP-3 и MIP-1 α составляет ~ 3 часа после обработки (фиг. 3). Интересно, что стимулированная FFA повышающая регуляция MRP-1 и MRP-2 связана с замедленным снижением, а не увеличением фактических уровней мРНК по сравнению с клетками, обработанными носителем (рис.3). Эксперименты с использованием отдельных FFA показывают, что эффект, скорее всего, связан с ненасыщенными FFA (дополнительный рис. 1, доступный в онлайн-приложении).

РИС. 2.

FFA стимулируют продукцию хемокинов в адипоцитах 3T3-L1. A : СЖК повышают регуляцию хемотаксических факторов моноцитов на уровне мРНК в адипоцитах 3T3-L1. Left : СЖК, а не глицерин, способны индуцировать экспрессию MCP-1 в культивируемых адипоцитах 3T3-L1. РНК экстрагировали из полностью дифференцированных адипоцитов 3T3-L1, обработанных 0.5 ммоль / л FFA / BSA, 0,5 ммоль / л глицерина, 1 мкг / мл инсулина или соответствующие носители (Veh) в течение 3 часов после инкубации в течение ночи с бессывороточной средой. Справа : СЖК способны индуцировать экспрессию множества хемокинов в культивируемых адипоцитах 3T3-L1. Для сравнения, уровень экспрессии этих генов в адипоцитах 3T3-L1, обработанных носителем, был произвольно установлен на 1. B : FFAs повышают регуляцию хемотаксических факторов моноцитов в адипоцитах 3T3-L1 на уровне белка. Кондиционированную среду собирали из адипоцитов, обработанных этанолом / BSA или FFA / BSA в течение 3 часов после инкубации в течение ночи с бессывороточной средой, и использовали для иммуноферментного анализа (ELISA).Планки погрешностей представляют ± SE. * P <0,05, обработанные по сравнению с носителем. Показанные здесь результаты являются репрезентативными для трех независимых экспериментов.

РИС. 3.

Динамика индуцированной FFA активации хемотаксических факторов моноцитов в адипоцитах 3T3-L1. После инкубации в течение ночи с бессывороточной средой адипоциты 3T3-L1 обрабатывали этанолом / BSA или FFA / BSA в течение 1, 3, 5, 7 или 9 часов перед экстракцией РНК. Экспрессию хемокинов оценивали с помощью ПЦР-анализа в реальном времени. Планки погрешностей представляют ± SE.* P <0,05, обработанные по сравнению с носителем. Показанные здесь результаты являются репрезентативными для трех независимых экспериментов.

Роль TLR4 в экспрессии хемокинов, индуцированной FFA.

TLR4 играет важную роль в врожденном иммунитете. Недавно было продемонстрировано, что TLR4 опосредует индуцированную жирными кислотами активацию воспалительных путей и ослабление передачи сигналов инсулина (24,27). Чтобы исследовать, играет ли TLR4 роль в индуцированной FFA экспрессии хемокинов в адипоцитах, мы обрабатывали адипоциты 3T3-L1, стабильно экспрессирующие scramble shRNA или shTLR4, с помощью FFA.В соответствии с предыдущим сообщением, снижение экспрессии TLR4 в адипоцитах значительно снижает индуцированную FFA экспрессию IL-6 (рис. 4). FFA-индуцированная экспрессия MCP-1 , MCP-3 , MIP-1 α, MRP-1 и MRP-2 также была снижена (рис. 4). Кроме того, были снижены базальные уровни MCP-1 , MRP-1 и MRP-2 (рис. 4). Однако нокдаун TLR4 не оказывал никакого влияния на экспрессию MCP-2 ни в базальном, ни в стимулированном FFA состоянии.Эти результаты показывают, что TLR4 частично отвечает за экспрессию хемокинов, индуцированную FFA, и что также существует альтернативный путь (пути).

РИС. 4.

TLR4 участвует в индуцированной FFA повышающей регуляции экспрессии хемокинов. Преадипоциты 3T3-L1, стабильно экспрессирующие shRNA против TLR4 (L1-shTLR4) или scramble shRNA (L1-scramble), были дифференцированы в адипоциты, обработанные этанолом / BSA или 0,5 ммоль / л FFAs / BSA в течение 3 часов после инкубации в течение ночи с сывороткой крови. свободная среда перед экстракцией РНК.Для сравнения, уровень экспрессии хемокинов в обработанных носителем адипоцитах 3T3-L1, экспрессирующих scramble shRNA, был произвольно установлен на уровне 1. * P <0,05, L1-shTLR4 по сравнению с L1-scramble. Показанные здесь результаты являются репрезентативными для трех независимых экспериментов.

Механизм экспрессии хемокинов, индуцированной FFA.

Для дальнейшего изучения механизма экспрессии хемокинов, индуцированной FFA в адипоцитах 3T3-L1, мы проверили, зависит ли регуляция от транскрипции и / или синтеза белка.Повышение регуляции α-мРНК MCP-1, , MCP-2, , MCP-3, и MIP-1 в ответ на FFA зависит от транскрипции, поскольку эффект может быть заблокирован обработкой актиномицином D (рис. А ). Напротив, повышающая регуляция мРНК MRP-1, и MRP-2 является посттранскрипционной (рис. 5 A ). Синтез белка требуется только для стимулированной FFA экспрессии MIP-1 α, поскольку он блокируется обработкой циклогексимидом (рис.5 В ). Напротив, блокировка синтеза белка значительно увеличивала экспрессию MCP-1 и MCP-3 (фиг. 5, B, ).

РИС. 5.

Механизм индуцированной FFA активации хемокинов. A : индуцированная FFA повышающая регуляция экспрессии хемокинов является как транскрипционно-зависимой, так и независимой. Адипоциты 3T3-L1 предварительно обрабатывали 5 мкг / мл актиномицина D в течение 30 минут перед стимуляцией 0,5 ммоль / л FFA в течение 3 часов. B : Синтез белка необходим только для опосредования индуцированной FFA экспрессии MIP1α.Адипоциты 3T3 – L1 предварительно обрабатывали 10 мкг / мл циклогексимида в течение 30 минут перед стимуляцией 0,5 ммоль / л FFA в течение 3 часов. Для сравнения уровень экспрессии хемокинов в адипоцитах 3T3-L1, обработанных носителем, был произвольно установлен на 1. Veh, носитель; ActD, актиномицин D; CHX, циклогексимид. Планки погрешностей представляют ± SE. * P <0,05, обработанные по сравнению с носителем. Показанные здесь результаты являются репрезентативными для трех независимых экспериментов.

Сообщалось, что

FFA вызывают выработку перекиси водорода в адипоцитах 3T3-L1 (28).Несмотря на то, что высокая концентрация перекиси водорода (0,5 ммоль / л) может незначительно индуцировать мРНК MCP-1 в адипоцитах 3T3-L1 через 24 часа после обработки, мы обнаружили, что 0,5 ммоль / л перекись водорода не вызывает значительного повышения регуляции этих шести хемокинов в 3T3. -L1 адипоциты через 3 часа после обработки (данные не показаны). Кроме того, обработка 500 мкмоль / л ингибитора НАДФН-оксидазы апоцинина не могла подавить продукцию хемокинов, индуцированную FFA, но действительно подавляла выработку перекиси водорода, вызванную обработкой FFA (рис.6 А ). Также известно, что FFA активируют пути как NF-κB, так и JNK (29,30). Таким образом, мы проверили возможность того, является ли экспрессия хемокинов, индуцированная FFA, следствием активации путей NF-κB и / или JNK. Ингибитор активации транскрипции NF-κB использовали для обработки адипоцитов 3T3-L1 при концентрации 200 мкмоль / л, что ингибировало индуцированную FFA активацию NF-κB на 99,8% (рис. 6 B ). Значительное подавление экспрессии хемокинов, индуцированной FFA, ингибитором NF-κB наблюдалось для всех шести хемокинов (рис.6 В ). Ингибитор JNK II (SP600125) применяли для оценки роли JNK в индуцированной FFA экспрессии хемокинов в адипоцитах 3T3-L1. FFA-индуцированная экспрессия MCP-1 и MCP-3 была значительно снижена в адипоцитах 3T3-L1, обработанных SP600125 (фиг. 6 C ). Эффективность SP600125 в адипоцитах 3T3-L1 была подтверждена снижением фосфорилирования JNK (фиг. 6 C ). Чтобы подтвердить роль NF-κB в экспрессии хемокинов, индуцированной FFA, с помощью биологического подхода, мы снизили экспрессию IKKβ с помощью РНК-интерференции (рис.7 А ). В соответствии с нашими результатами с ингибитором NF-κB, снижение экспрессии IKKβ в адипоцитах 3T3-L1 посредством РНК-интерференции также снижает индуцированную FFA повышающую регуляцию всех шести хемокинов CC (фиг. 7 A ). Ингибирующий эффект ингибитора JNK на FFA-индуцированную экспрессию MCP-1 и MCP-3 был также подтвержден с помощью РНК-интерференции (фиг. 7 B ). Кроме того, сверхэкспрессия как дикого типа, так и конститутивно активной формы IKKβ в адипоцитах 3T3-L1 CAR посредством аденовирусного переноса генов может значительно увеличить экспрессию MCP-1, MCP-2, MCP-3, MIP-1α и MRP. -2 (рис.8), но, что удивительно, не MRP-1 (данные не показаны).

РИС. 6.

Воспалительные пути, участвующие в экспрессии хемокинов, индуцированной FFA. A : Окислительный стресс не требуется для опосредования индуцированной FFA экспрессии хемокинов в адипоцитах 3T3-L1. Адипоциты 3T3-L1 предварительно обрабатывали апоцинином 500 мкмоль / л (ингибитор НАДФН) в течение 1 часа перед стимуляцией 0,5 ммоль / л FFA в течение 3 часов. B : Путь NF-κB участвует в опосредованной FFA повышающей регуляции экспрессии хемокинов в адипоцитах 3T3-L1.Адипоциты 3T3-L1 предварительно обрабатывали 200 мкмоль / л ингибитором NF-κB в течение 1 часа перед стимуляцией 0,5 ммоль / л FFA в течение 3 часов. C : JNK необходим для опосредования индуцированной FFA экспрессии MCP-1 и MCP-3 , но не других хемокинов, в адипоцитах 3T3-L1. Адипоциты 3T3-L1 предварительно обрабатывали ингибитором JNK 250 мкмоль / л в течение 1 часа перед стимуляцией 0,5 ммоль / л FFA в течение 3 часов. Для сравнения уровень экспрессии хемокинов в адипоцитах 3T3-L1, обработанных носителем, был произвольно установлен на 1.* P <0,05, обработанные по сравнению с носителем. NF-κB Inh, ингибитор NF-κB; SP600125, ингибитор JNK. Показанные здесь результаты являются репрезентативными для трех независимых экспериментов.

РИС. 7.

Эффект нокдауна IKKβ и JNK на индуцированную FFA активацию хемокинов. A : Top , снижение экспрессии IKKβ в адипоцитах 3T3-L1 за счет РНК-интерференции. Адипоциты 3T3-L1 подвергали электропорации с использованием либо скремблированной миРНК, либо миРНК против IKKβ. Через 24 часа после электропорации адипоциты инкубировали в бессывороточной среде DMEM в течение ночи.Через 48 часов после электропорации адипоциты обрабатывали 0,5 ммоль / л FFA / BSA или этанолом / BSA в течение 2 часов, а затем собирали для исследования экспрессии IKKβ. Внизу , экспрессия хемокинов в адипоцитах 3T3-L1 с нокдауном IKKβ. Адипоциты, обработанные, как описано в A , собирали для исследования экспрессии хемокинов с помощью ПЦР-анализа в реальном времени. * P <0,05, скремблировано по сравнению с siIKKβ. B : Top , снижение экспрессии JNK в адипоцитах 3T3-L1 за счет РНК-интерференции. Внизу , экспрессия хемокинов в адипоцитах 3T3-L1 с нокдауном JNK. Для сравнения, уровень экспрессии хемокинов в адипоцитах 3T3-L1, обработанных скремблированной siRNA и обработанных этанолом / BSA, был произвольно установлен на 1. Результаты, представленные здесь, являются репрезентативными для трех независимых экспериментов.

РИС. 8.

Эффект сверхэкспрессии IKKβ на продукцию хемокинов. Неактивный и конститутивно активный IKKβ дикого типа (названный hIKK WT, hIKK KM и hIKK SE соответственно) сверхэкспрессировался в клетках 3T3-L1 CAR. A : Сверхэкспрессия hIKKβ в клетках 3T3-L1 CAR на уровне белка. B : Экспрессия генов хемокинов в адипоцитах 3T3-L1 CAR, сверхэкспрессирующих hIKKβ. Полностью дифференцированные адипоциты 3T3-L1 CAR инфицировали аденовирусами, сверхэкспрессирующими зеленый флуоресцентный белок (GFP), hIKKβ WT, hIKKβ KM или hIKKβ SE в дозе 1 × 10 ⁹ бляшкообразующих единиц / мл в течение 6 часов. Затем клетки инкубировали в свежей среде в течение 48 часов. Через 48 часов после заражения клетки инкубировали в бессывороточной среде в течение ночи.Через 72 часа после заражения клетки собирали для экстракции РНК, чтобы исследовать экспрессию генов хемокинов с помощью ПЦР-анализа в реальном времени. C : Экспрессия хемокинового белка в кондиционированном супернатанте. Кондиционированный супернатант, собранный в эксперименте, описанном в B , использовали для измерения секретируемого хемокинового белка с помощью ELISA. Планки погрешностей представляют собой средние значения ± SE. Методы конструирования аденовирусных конструкций представлены в дополнительных материалах, доступных в онлайн-приложении.* P <0,05, клетки со сверхэкспрессией IKKβ по сравнению с клетками со сверхэкспрессией GFP. Показанные здесь результаты являются репрезентативными для трех независимых экспериментов.

Влияние розиглитазона на экспрессию хемотаксических факторов моноцитов in vitro и in vivo.

Сообщалось, что тиазолидиндионы обладают сильной противовоспалительной активностью и подавляют активность NF-κB в MNCs и снижают уровень MCP-1 в плазме (15,20). Чтобы выяснить, могут ли тиазолидиндионы подавлять индуцированную FFA экспрессию хемокинов в адипоцитах, адипоциты 3T3-L1 обрабатывали розиглитазоном в течение 24 часов перед стимуляцией FFA.Предварительная обработка розиглитазоном значительно и дозозависимо снижала экспрессию MCP-1 , MCP-3 , MIP-1 α, MRP-1 и MRP-2 , но не MCP-2 , в адипоцитах 3T3-L1 (дополнительный рис. 2, доступный в онлайн-приложении). Сообщалось, что у мышей с ожирением, получавших тиазолидиндионы, снижалась экспрессия MCP-1, MCP-3 и MIP-1α, но не изменялась экспрессия MCP-2 в жировой ткани; и люди с ожирением, получавшие пиоглитазон, снижали экспрессию MCP-1 в жировой ткани (4,9,31).Однако потенциальная регуляция MRP-1 и MRP-2 в жировой ткани тиазолидиндионами никогда не изучалась. Мы лечили ob / ob мышей розиглитазоном в течение 4 недель и оценивали экспрессию всех шести хемокинов, повышенную в ожирении. В соответствии с предыдущими сообщениями, экспрессия MCP-1 , MCP-3 и MIP-1 α была репрессирована, но MCP-2 остается неизменной (фиг. 8 B ). Неожиданно розиглитазон может снижать экспрессию только MRP-1 и MRP-2 in vitro, но не in vivo, что позволяет предположить, что эти два хемокина могут регулироваться дополнительным механизмом in vivo по сравнению с in vitro.

ОБСУЖДЕНИЕ

Было продемонстрировано, что связанное с ожирением накопление макрофагов жировой ткани способствует развитию системной инсулинорезистентности (9–11). Чтобы понять ответственные хемотаксические факторы в дополнение к MCP-1, мы систематически проанализировали экспрессию и регуляцию мышиных хемокинов в жировой ткани самцов мышей ob / ob и DIO. Всего было обнаружено, что пять дополнительных хемокинов моноцитов имеют повышенную регуляцию как на уровне мРНК, так и на уровне белка у мышей WAT ob / ob и DIO, что указывает на то, что экстравазация макрофагов в жировую ткань при ожирении может быть очень сложной.Недавняя публикация показала, что другой моноцитарный хемокин MIP-2γ активируется на уровне мРНК в WAT как у мышей ob / ob , так и у мышей DIO, тогда как мы обнаружили только умеренное повышение активности WAT у DIO, но не у мышей ob / ob (32 ). Несоответствие, вероятно, связано с гендерными различиями. В этом отчете было показано, что MIP-2γ играет важную роль в инфильтрации макрофагов WAT у самок, но не у самцов мышей DIO (32). В нашем исследовании мы наблюдали только за шестью хемокинами CC, которые активируются в WAT как у самцов мышей ob / ob , так и у мышей DIO.Выделение первичных адипоцитов доказывает, что вышеупомянутые хемокины преимущественно увеличиваются в адипоцитах, подтверждая гипотезу о том, что хемокины, полученные из адипоцитов, могут играть важную роль в начальной инфильтрации макрофагов. Исследование диеты с высоким содержанием жиров показало быстрое увеличение MCP-1, MCP-2, MCP-3 и MRP-2 в жире в течение недели, при этом уровни циркулирующих хемокинов не изменились. Наше кинетическое исследование на мышах DIO показывает, что увеличение жировой массы предшествует увеличению содержания макрофагов, и дополнительно подтверждает, что адипоциты могут играть важную роль в инициации инфильтрации макрофагов путем секреции хемокинов.

Было обнаружено, что повышенный уровень СЖК, хорошо известного фактора, способствующего развитию системной инсулинорезистентности и воспаления у МНК при ожирении (8), сильно индуцирует экспрессию хемотаксических факторов моноцитов в культивируемых адипоцитах 3T3-L1, что сопровождается повышенной секрецией белка в кондиционированная среда. Экспрессия хемотаксических факторов моноцитов, стимулированная FFA, зависит от дозы и времени, и за этот эффект в основном ответственны ненасыщенные жирные кислоты. Степень и продолжительность индукции хемокинов FFAs в адипоцитах 3T3-L1 варьируются в зависимости от хемокинов.Поскольку эти хемокины начинают увеличиваться в жировой ткани в разные моменты времени при диете с высоким содержанием жиров, вполне вероятно, что они играют неравную роль в привлечении моноцитов. Почему такое количество хемотаксических факторов моноцитов увеличивается при ожирении, не ясно. Генетические модели, дефицитные по этим хемокинам по отдельности или в комбинации, предоставят больше информации об их относительной важности для привлечения макрофагов жировой ткани. В дополнение к потенциальной способности рекрутировать макрофаги, еще предстоит изучить, обладают ли эти хемокины другими биологическими функциями, такими как нарушение чувствительности к инсулину в клетках-мишенях инсулина, таких как MCP-1 (7).

Интересно, что не все хемокины с повышенной регуляцией происходят из-за фактического увеличения мРНК. В случаях MRP-1 и MRP-2 уровни мРНК быстро снижались в адипоцитах 3T3-L1, обработанных носителем, тогда как замедленное снижение мРНК наблюдалось в обработанных FFA клетках, что позволяет предположить, что FFA могут защищать стабильность мРНК MRP-1. и MRP-2. Для MCP-1, MCP-2, MCP-3 и MIP-1α уровни мРНК индуцировались обработкой FFA через транскрипционно-зависимый механизм. Недавно было продемонстрировано, что TLR4 является важным рецептором для опосредования эффектов FFAs на активацию воспалительных путей.Мы обнаружили, что TLR4 также частично ответственен за индуцированную FFA активацию MCP-1, MCP-3, MIP-1α, MRP-1 и MRP-2. Известно, что FFA активируют пути NF-κB и JNK, важные внутриклеточные пути, которые активируются воспалительными стимулами. Было показано, что ось IKKβ / NF-κB является молекулярной мишенью для гипогликемического действия салицилатов (33,34). IKKβ избирательно фосфорилирует белок IκB, ингибитор NF-κB, который запускает деградацию IκB и высвобождает NF-κB для транслокации в ядро ​​для транскрипции многих генов-мишеней, связанных с инсулинорезистентностью (35).Путем применения ингибитора активации NF-κB, снижения экспрессии IKKβ посредством РНК-интерференции и сверхэкспрессии IKKβ мы показали, что путь IKK / NF-κB оказывает широкое влияние на экспрессию хемокинов, индуцированную FFA. JNK – это стресс-киназа, участвующая в инсулинорезистентности (36–38). Животные с дефицитом JNK-1 защищены от развития инсулинорезистентности на диете с высоким содержанием жиров (39). Кроме того, было продемонстрировано, что JNK вносит основной вклад в индуцированную FFA клеточную инсулинорезистентность с использованием адипоцитов 3T3-L1 в качестве модельной системы (29).В нашем исследовании ингибирование пути JNK частично снижает индуцированную FFA активацию MCP-1 и MCP-3. Поскольку повышающая регуляция MCP-1 и MCP-3 обработкой FFA происходит из-за повышенной транскрипции, экспрессия хемокинов с участием JNK наиболее вероятна через активацию c-Jun. Сообщалось, что сайты AP-1 существуют в промоторах MCP-1 и MCP-3. Наши данные предоставляют дополнительные доказательства, демонстрирующие, что JNK не только важен для опосредования индуцированной FFA инсулинорезистентности, но также участвует в индуцированной FFA экспрессии хемотаксических факторов моноцитов в адипоцитах.

Среди современных терапевтических агентов для лечения диабета 2 типа тиазолидиндионы в основном улучшают чувствительность жировой ткани к инсулину. Существующие данные указывают на то, что тиазолидиндионы обладают мощным противовоспалительным действием за счет подавления активности NF-κB, по крайней мере, в MNC, предполагая, что улучшение чувствительности к инсулину может быть частично за счет его противовоспалительного эффекта (15,20,22). Розиглитазон не только значительно снижает экспрессию MCP-1, MCP-3 и MIP-1α в жировой ткани, но также может подавлять экспрессию вышеупомянутых хемокинов, индуцированную FFA, в период пика экспрессии в адипоцитах.Эти результаты предполагают, что противовоспалительный эффект тиазолидиндионов, вероятно, проявляется как через макрофаги, так и через адипоциты. Неожиданно розиглитазон подавляет индуцированную FFA экспрессию MRP-1 и MRP-2 только in vitro, но не in vivo. Еще предстоит изучить, находится ли экспрессия MRP-1 и MRP-2 in vivo под другим механизмом контроля по сравнению с in vitro. Повышающая регуляция множества хемотаксических факторов моноцитов с помощью различных механизмов при ожирении может затруднить полное истощение жировых макрофагов посредством нацеливания на отдельный хемокин или рецептор.Следует отметить, что улучшение системной инсулинорезистентности наблюдалось у мышей с дефицитом MCP-1, MIP-2γ и CCR2, а также у мышей, получавших антагонист CCR2, хотя содержание макрофагов в жировой ткани было снижено лишь частично. Эти результаты не только демонстрируют, что макрофаги, инфильтрованные жировой тканью, играют важную роль в развитии инсулинорезистентности, связанной с ожирением, но также подразумевают, что уменьшение количества макрофагов жировой ткани в большей степени может быть более полезным.

Благодарности

H.X. получил грант на развитие ученых Американской кардиологической ассоциации.

О потенциальных конфликтах интересов, относящихся к этой статье, не сообщалось.

Мы благодарим доктора Джеффри С. Флиера за предоставление клеточных линий 3T3-L1, стабильно экспрессирующих shTLR4 или scramble shRNA.

Сноски

• Опубликованы перед печатью на http://diabetes.diabetesjournals.org 3 октября 2008 г.

• Читатели могут использовать эту статью, если работа правильно процитирована, используется в образовательных, а не на прибыль, и работа не переделывалась.Подробнее см. Http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/.

• Расходы на публикацию этой статьи были частично покрыты за счет оплаты страницы. Поэтому данная статья должна быть помечена как «реклама» в соответствии с 18 U.S.C. Раздел 1734 исключительно для указания этого факта.

• • Получено 20 сентября 2007 г.
  • Принято 19 сентября 2008 г.

ССЫЛКИ

1. ↵

   Festa A, D’Agostino R Jr, Howard Haner L. SM: Хроническое субклиническое воспаление как часть синдрома инсулинорезистентности: исследование инсулинорезистентного атеросклероза (IRAS).Тираж102 : 42 –47,2000

2. ↵

   Pickup JC, Mattock MB, Chusney GD, Burt D: NIDDM как заболевание врожденной иммунной системы: ассоциация острофазовых реагентов и интерлейкина-6 с метаболическим синдромом X. Диабетология40 : 1286 –1292,1997

3. ↵

   Ганим Х., Алджада А., Хофмейер Д., Сайед Т., Моханти П., Дандона П.: Циркулирующие мононуклеарные клетки у людей с ожирением находятся в провоспалительном состоянии. Тираж110 : 1564 –1571,2004

4. ↵

   Xu H, Barnes GT, Yang Q, Tan G, Yang D, Chou CJ, Sole J, Nichols A, Ross JS, Tartaglia LA, Chen H: Хроническое воспаление жира играет важную роль. решающую роль в развитии инсулинорезистентности, связанной с ожирением.J Clin Invest112 : 1821 –1830,2003

5. ↵

   Weisberg SP, McCann D, Desai M, Rosenbaum M, Leibel RL, Ferrante AW Jr: Ожирение связано с накоплением макрофагов в жировой ткани. J Clin Invest112 : 1796 –1808,2003

6. ↵

   Grimble RF: Воспалительный статус и инсулинорезистентность. Курр Опин Clin Nutr Metab Care5 : 551 –559,2002

7. ↵

   Сартипи П., Лоскутов Д.Д.: Хемоаттрактантный белок 1 моноцитов при ожирении и инсулинорезистентности.Proc Natl Acad Sci U S A100 : 7265 –7270,2003

8. ↵

   Tripathy D, Mohanty P, Dhindsa S, Syed T, Ghanim H, Aljada A, Dandona P: Повышение уровня свободных жирных кислот вызывает воспаление и ухудшает реактивность сосудов у здоровых людей. Диабет52 : 2882 –2887,2003

9. ↵

   Weisberg SP, Hunter D, Huber R, Lemieux J, Slaymaker S, Vaddi K, Charo I, Leibel RL, Ferrante AW: CCR2 модулирует воспалительные и метаболические эффекты кормления с высоким содержанием жиров.J Clin Invest116 : 115 –124,2006

10. ↵

    Kanda H, Tateya S, Tamori Y, Kotani K, Hiasa KI, Kitazawa R, Kitazawa S, Miyachi H, Maeda S, Egashira K, Kasuga M: MCP-1 способствует развитию макрофагов инфильтрация в жировую ткань, инсулинорезистентность и стеатоз печени при ожирении. Дж Клин Инвест116 : 1494 –1505,2006

11. ↵

    Kamei N, Tobe K, Suzuki R, Ohsugi M, Watanabe T., Kubota N, Ohtsuka-Kowatari N, Kumagai K, Sakamoto K, Kobayashi M, Yamauchi T, Ueki Y, Nishimura S, Manabe I, Hashimoto H, Ohnishi Y, Ogata H, Tokuyama K, Tsunoda M, Ide T, Murakami K, Nagai R, Kadowaki T. Сверхэкспрессия моноцитарного хемоаттрактантного белка-1 в жировой ткани вызывает рекрутирование макрофагов и инсулина сопротивление.J Biol Chem281 : 26602 –26614,2006

12. ↵

    Inouye KE, Shi H, Howard JK, Daly CH, Lord GM, Rollins BJ, Flier JS: Отсутствие хемокинового лиганда 2 CC не ограничивает инфильтрацию макрофагов в жировую ткань, связанную с ожирением. . Сахарный диабет56 : 2242 –2250,2007

13. ↵

    Канселло Р., Хенегар С., Вигери Н., Талеб С., Пуату С., Руо С., Купай М., Пеллу V, Хюголь Д., Бульо Дж. Л., Булуми А., Барбателли Дж., Синти С., Svensson PA, Barsh GS, Zucker JD, Basdevant A, Langin D, Clement K: Уменьшение инфильтрации макрофагов и изменений экспрессии гена хемоаттрактанта в белой жировой ткани субъектов с патологическим ожирением после потери веса, вызванной операцией.Диабет54 : 2277 –2286,2005

14. ↵

    Clement K, Viguerie N, Poitou C, Carette C, Pelloux V, Curat CA, Sicard A, Rome S, Benis A, Zucker JD, Vidal H, Laville M, Barsh GS, Басдевант А, Стич В., Канселло Р., Лангин Д. Снижение веса регулирует гены, связанные с воспалением, в белой жировой ткани людей с ожирением. FASEB J18 : 1657 –1669,2004

15. ↵

    Моханти П., Альджада А., Ганим Х., Хофмейер Д., Трипати Д., Сайед Т., Аль-Хаддад В., Дхинда С., Дандона П.: Доказательства мощного противовоспалительного эффекта розиглитазона.J Clin Endocrinol Metab89 : 2728 –2735,2004

16. Ricote M, Li AC, Willson TM, Kelly CJ, Glass CK: гамма-рецептор, активируемый пролифератором пероксисом, является негативным регулятором активации макрофагов. Природа391 : 79 –82,1998

17. Jiang C, Ting AT, Seed B: агонисты PPAR-гамма подавляют продукцию воспалительных цитокинов моноцитами. Природа391 : 82 –86,1998

18. Маркс Н., Либби П., Плутцки Дж .: Рецепторы, активируемые пролифератором пероксисом (PPAR) и их роль в стенке сосуда: возможные медиаторы сердечно-сосудистого риска? J Кардиоваск Риск8 : 203 –210,2001

19. Li AC, Brown KK, Silvestre MJ, Willson TM, Palinski W., Glass CK: гамма-лиганды рецепторов, активируемых пролифератором пероксисом, ингибируют развитие атеросклероза у мышей с дефицитом рецепторов ЛПНП.J Clin Invest106 : 523 –531,2000

20. ↵

    Ghanim H, Garg R, Aljada A, Mohanty P, Kumbkarni Y, Assian E, Hamouda W., Dandona P: Подавление ядерного фактора-kappaB и стимуляция ингибитора kappaB троглитазоном: доказательства для противовоспалительного эффекта и потенциального антиатеросклеротического эффекта при ожирении. J Clin Endocrinol Metab86 : 1306 –1312,2001

21. Aljada A, Garg R, Ghanim H, Mohanty P, Hamouda W., Assian E, Dandona P: подавляющее действие ядерного фактора-каппаB и стимулирующее действие ингибитора-каппаB троглитазона у пациентов с ожирением с типом 2 сахарный диабет: доказательства противовоспалительного действия? J Clin Endocrinol Metab86 : 3250 –3256,2001

22. ↵

    Ghanim H, Dhindsa S, Aljada A, Chaudhuri A, Viswanathan P, Dandona P: низкие дозы розиглитазона оказывают противовоспалительное действие с увеличением адипонектина независимо от падения свободных жирных кислот и падения инсулина. сенсибилизация у страдающих ожирением диабетиков 2 типа.J Clin Endocrinol Metab91 : 3553 –3558,2006

23. ↵

    Nguyen MT, Favelyukis S, Nguyen AK, Reichart D, Scott PA, Jenn A, Liu-Bryan R, Glass CK, Neels JG, Olefsky JM: субпопуляция адгезивных инфильтратов макрофагов ткани и активируется свободными жирными кислотами через Toll-подобные рецепторы 2 и 4 и JNK-зависимые пути. J Biol Chem282 : 35279 –35292,2007

24. ↵

    Ши Х., Кокоева М.В., Иноуэ К., Цамели И., Инь Х., Флиер Дж. С.: TLR4 связывает врожденный иммунитет и резистентность к инсулину, индуцированную жирными кислотами.Дж Клин Инвест116 : 3015 –3025,2006

25. ↵

    Орлики Д. Д., ДеГрегори Дж., Шаак Дж. Конструирование стабильных клеток 3T3-L1, экспрессирующих вирус Коксаки и аденовирусный рецептор. J Lipid Res42 : 910 –915,2001

26. ↵

    Kim CS, Kawada T, Yoo H, Kwon BS, Yu R: Макрофагальный воспалительный белок-2, связанный с белком-2, новый CC-хемокин, может регулировать миграцию преадипоцитов и дифференцировку адипоцитов. FEBS Lett548 : 125 –130,2003

27. ↵

    Tsukumo DM, Carvalho-Filho MA, Carvalheira JB, Prada PO, Hirabara SM, Schenka AA, Araujo EP, Vassallo J, Curi R, Velloso LA, Saad MJ: Loss-of- Функциональная мутация Toll-подобного рецептора 4 предотвращает вызванное диетой ожирение и инсулинорезистентность.Сахарный диабет56 : 1986 –1998,2007

28. ↵

    Furukawa S, Fujita T, Shimabukuro M, Iwaki M, Yamada Y, Nakajima Y, Nakayama O, Makishima M, Matsuda M, Shimomura I: Повышенный окислительный стресс при ожирении и его влияние на метаболический синдром. Дж Клин Инвест114 : 1752 –1761,2004

29. ↵

    Nguyen MT, Satoh H, Favelyukis S, Babendure JL, Imamura T, Sbodio JI, Zalevsky J, Dahiyat BI, Chi NW, Olefsky JM: JNK и фактор альфа-некроза опухоли инсулинорезистентность, индуцированная жирными кислотами, в адипоцитах 3T3-L1.J Biol Chem280 : 35361 –35371,2005

30. ↵

    Chung S, Brown JM, Provo JN, Hopkins R, McIntosh MK: Конъюгированная линолевая кислота способствует инсулинорезистентности адипоцитов человека посредством NFkappaB-зависимой продукции цитокинов. J Biol Chem280 : 38445 –38456,2005

31. ↵

    Di Gregorio GB, Yao-Borengasser A, Rasouli N, Varma V, Lu T, Miles LM, Ranganathan G, Peterson CA, McGehee RE, Kern PA: Экспрессия CD68 и химиотерапевтических макрофагов гены протеина-1 в жировой и мышечной тканях человека: связь с экспрессией цитокинов, инсулинорезистентностью и восстановлением под действием пиоглитазона.Диабет54 : 2305 –2313,2005

32. ↵

    Nara N, Nakayama Y, Okamoto S, Tamura H, Kiyono M, Muraoka M, Tanaka K, Taya C, Shitara H, Ishii R, Yonekawa H, Minokoshi Y, Hara T: Нарушение хемокинового лиганда-14 мотива CXC у мышей улучшает инсулинорезистентность, вызванную ожирением. J Biol Chem282 : 30794 –30803,2007

33. ↵

    Юань М., Константопулос Н., Ли Дж., Хансен Л., Ли З.У., Карин М., Шоелсон С.Е.: Обращение к инсулинорезистентности, вызванной ожирением и диетой, с помощью салицилатов или целенаправленного нарушения Иккбета.Наука293 : 1673 –1677,2001

34. ↵

    Hundal RS, Petersen KF, Mayerson AB, Randhawa PS, Inzucchi S, Shoelson SE, Shulman GI: Механизм, с помощью которого высокие дозы аспирина улучшают метаболизм глюкозы при диабете 2 типа. J Clin Invest109 : 1321 –1326,2002

35. ↵

    Шоелсон С.Е., Ли Дж., Голдфайн А.Б.: Воспаление и инсулинорезистентность. Дж Клин Инвест116 : 1793 –1801,2006

36. ↵

    Aguirre V, Uchida T, Yenush L, Davis R, White MF: c-Jun NH (2) -концевая киназа способствует инсулинорезистентности во время ассоциации с субстратом-1 рецептора инсулина и фосфорилирования Сер (307).J Biol Chem275 : 9047 –9054,2000

37. Aguirre V, Werner ED, Giraud J, Lee YH, Shoelson SE, White MF: фосфорилирование Ser307 в субстрате-1 рецептора инсулина блокирует взаимодействия с рецептором инсулина и ингибирует действие инсулина. J Biol Chem277 : 1531 –1537,2002

38. ↵

    Вернер Э.Д., Ли Дж., Хансен Л., Юан М., Шоелсон С.Е.: Инсулинорезистентность из-за фосфорилирования субстрата-1 инсулинового рецептора по серину 302. J Biol Chem279 : 35298 –35305,2004

39. ↵

    Hirosumi J, Tuncman G, Chang L, Gorgun CZ, Uysal KT, Maeda K, Karin M, Hotamisligil GS: центральная роль JNK в ожирении и инсулинорезистентности.Природа420 : 333 –336,2002

Расширительный клапан кондиционера – Тепловой расширительный клапан UAC EX 10013C Легковые и грузовые кондиционеры и обогреватели Metaloprema Автозапчасти и транспортные средства

Расширительный клапан кондиционера – тепловой расширительный клапан UAC EX 10013C Легковые и грузовые автомобили Кондиционирование и обогреватели Metaloprema Автозапчасти и транспортные средства

Расширительный клапан кондиционера – тепловой расширительный клапан UAC EX 10013C, EX 10013C Расширительный клапан кондиционера – тепловой расширительный клапан UAC, номер детали: EX 10013C, Эта деталь обычно подходит для автомобилей Honda и включает такие модели, как Civic, CRX с отделкой Base Coupe 2-Door, Base Hatchback 3-Door, Base Wagon 4-Door, CX Hatchback 3-Door, 2-дверное купе DX, 3-дверный хэтчбек DX, 4-дверный седан DX, 4-дверный универсал DX, 4-дверный седан EX, 2-дверное купе HF, 4-дверный седан LX, 4-дверный универсал RT 4WD, SE Хэтчбек 3-дверный, Si Coupe 2-дверный, Si Hatchback 3-дверный, Wagovan Wagon 4-дверный, Лучшие предложения в Интернете Получите дешевые товары в Интернете БЕСПЛАТНАЯ и БЫСТРАЯ доставка Дешевый ассортимент Доступный и быстрая доставка прямо к вашей двери! Расширительный клапан-Тепловой расширительный клапан UAC EX 10013C A / C.

• pomembna nam je

  vijačno spojnega materiala

• строка варенья

• 500 тонн

• vijačnega blaga

• profesionalno orodje

• ЛАСТНА

  ДЕЛАВНИ ЧАС НАШИХ ТРГОВИН: 
-ponedeljek petek от 8 до 16 часов
-собота запрто

Готовинска плачила об превзэму NISO MOŽNA.Plačilo po PREDRAČUNU.
 
PREDLAGAMO, DA   NAROČILA ODDATE PREKO PORTALA  
   m-online.si  / ali preko vašega komercialista.
Dodatne informacije na  тел. 05 662 60 40
  

Расширительный клапан кондиционера – Температурный расширительный клапан UAC EX 10013C

Расширительный клапан кондиционера – Тепловой расширительный клапан UAC EX 10013C. Номер детали: EX 10013C. Эта деталь обычно подходит для автомобилей Honda и включает такие модели, как Civic, CRX с отделкой Base Coupe 2-Door, Base Hatchback 3-Door, Base Wagon 4-Door, CX Hatchback 3-Door, DX Coupe 2-Door, DX Hatchback. 3-дверный, 4-дверный седан DX, 4-дверный универсал DX, 4-дверный седан EX, 2-дверное купе HF, 4-дверный седан LX, 4-дверный универсал RT 4WD, 3-дверный хэтчбек SE, Si Coupe 2 -Дверь, Si Hatchback 3-дверный, Wagovan Wagon 4-дверный.. Состояние: Новое ： Гарантия: ： Другое ， Номер детали производителя: ： EX 10013C ： Количество: ： 1 ， Артикул: ： UC: EX10013C ： UPC: ： 711307125593 ， Бренд: ： Универсальный кондиционер ，

Расширительный клапан кондиционера – Терморегулирующий клапан UAC EX 10013C

Пожалуйста, ознакомьтесь с размером ниже перед заказом.Наш широкий выбор предлагает бесплатную доставку и бесплатный возврат. Он имеет красочный дизайн с цветами, а также изображение любимого персонажа Диснея вашего ребенка. Изготовлен из латекса с нанесенными звездообразованиями и точками. Отвертки серии 400 прочнее. брюки также можно носить как повседневное платье, пожалуйста, не стесняйтесь сообщить нам об этом. A / C Расширительный клапан-Тепловой расширительный клапан UAC EX 10013C , они напечатаны с красивым рисунком, размер резьбы 25) – Пакет из 20 гаек колесных проушин.Пожалуйста, прочтите «Информация о продукте» ниже, чтобы узнать точный размер и вес свечи. Комфортный коврик для кухни Anti-Fatigue имеет размеры примерно 20 на 30 дюймов, ** Защищен от ультрафиолета и воды, прослужит долгие годы. ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ: РУЧНОЙ РАЗМЕР БРАСЛЕТА. в противном случае сделайте пометку в разделе комментариев. A / C Расширительный клапан – Тепловой расширительный клапан UAC EX 10013C , Карманная глина защищает кристаллы от повреждений, пожалуйста, не стесняйтесь обращаться к нам через разговоры на Etsy.Все мои салфетки стираются и гладятся перед отправкой к вашей двери – они готовы к использованию, – Украшены заклепками и стразами, Бусинами из свадебного жемчуга Gentle Hair Grip. ☺️ Поддерживает красивую сферу из черного оникса диаметром 12 мм. • Карманы достаточно большие, чтобы вместить 3 кисти в одну. A / C Expansion Valve – Thermal Expansion Valve UAC EX 10013C , Pet Memorial Ornament Pet Loss Gift Pet Sympathy Gift Dog, Shop James Harrison Pittsburgh Steelers Подписанный Суперкубок 43 16×20 Фото JSA 130439 и более аутентичные, Они любят время, проведенное с ней , Изготовлен из высококачественной заготовки из нержавеющей легированной стали EN58AM. Это воссоздание оригинальной детали Land Rover VPLDP005 – (сталь толщиной 5 мм).у компании больше возможностей, чем когда-либо, для выполнения своей давней цели «спроектировать гантели или штангу для подтягивания за секунды.

Ластна производня

изделий по начрту

Расширительный клапан кондиционера – Терморегулирующий клапан UAC EX 10013C

Deer Babies On Board Car Виниловая наклейка 5 “Baby Muddy Hunter Kids Browning Girl Boy, Buick Cadillac Chevrolet GMC Suzuki Lot 48 МАСЛЯНЫЙ ФИЛЬТР ДВИГАТЕЛЯ SO291 Ph4531 подходит, передняя фара левая подходит для SUZUKI Alto Hatchback 2009, 2009-2016 Suzuki GSXR1000 Front OEM Gas Винты бака Деталь # 09139-06105, 1964-66 GTO Hurst Монтажный кронштейн переключателя передач, литой под давлением алюминий GM 9776403.Deka East Penn 00253 Подставка для батарей. НОВЫЙ ЗАЖИГАТЕЛЬ И ВСЕ ДВЕРНЫЕ ЗАМКИ ДЛЯ TOYOTA LITEACE SPACIA TOWNACE, 10ПК T4.2 Neo Wedge 1-SMD LED Cluster Интерьер приборной панели Климатические лампы. Мотоцикл 3M Боковой бак Pad Защитная наклейка для Yamaha R15 2017-2018, белый 502007147 Ski-Doo Rev-XP Передний бампер. Новый карбюратор с головкой F подходит для Jeep Willys CJ3b M38A1 F134 Carb 17701.02 CJ5, AM Новая передняя, ​​правая пассажирская дверь, внешняя ручка для Honda CR-V CHROME. ПОДХОДИТ ДЛЯ PORSCHE 993 REAL BLACK REAL LEATHER SHIFT BOOT NEW, A518 46RE A618 Master Rebuild Kit 1998-2002 подходит только для Cummins Diesel, PSR РЕГУЛИРУЕМАЯ АЛЮМИНИЕВАЯ БОКОВАЯ ПОДСТАВКА 07-08 GSXR 1000 P / N 0510-0169.Рейтинг инструментов IFR IPC CFII IFR Checkride Reviewer. Хромированная крышка клапана Сапуны и втулки FORD BLUE WHITE НОВЫЙ НАБОР НАБОР ИЗ 4 ПРЕДМЕТОВ, ACDelco 11 25171350 # 11 RapidFire Platinum Блок свечей зажигания из 8 штук. Подлинное уплотнительное кольцо насоса гидроусилителя рулевого управления Honda 1998-2007 Accord 91345-RDA-A01, YAMAHA TW200 TW 200 НОВЫЙ НАБОР ЗВЕЗДОЧКИ И ЦЕПИ БЕЗ УПЛОТНИТЕЛЬНОГО КОЛЬЦА 14/44 1995-2012.

Расширительный клапан кондиционера – Терморегулирующий клапан UAC EX 10013C

Номер детали: EX 10013C, Эта деталь в основном подходит для автомобилей Honda и включает такие модели, как Civic, CRX с отделкой Base Coupe 2-Door, Base Hatchback 3-Door, Base Wagon 4-Door, CX Hatchback 3-Door, DX 2-дверное купе, 3-дверный хэтчбек DX, 4-дверный седан DX, 4-дверный универсал DX, 4-дверный седан EX, 2-дверное купе HF, 4-дверный седан LX, 4-дверный универсал RT 4WD, хэтчбек SE 3-дверный, Si Coupe 2-дверный, Si Hatchback 3-дверный, Wagovan Wagon 4-дверный, Лучшие предложения в Интернете Получите дешевые товары в Интернете БЕСПЛАТНАЯ и БЫСТРАЯ доставка Дешевый ассортимент Доступный и быстрая доставка прямо к вашей двери!
Расширительный клапан кондиционера – Терморегулирующий клапан UAC EX 10013C

Доказательства того, что Swi / Snf напрямую репрессирует транскрипцию в S.cerevisiae

Аннотация

Многие исследования установили, что семейство Swi / Snf комплексов ремоделирования хроматина активирует транскрипцию. Последние отчеты предположили возможность, что эти комплексы также могут репрессировать транскрипцию. Теперь мы представляем иммунопреципитацию хроматина. доказательства того, что комплекс Swi / Snf Saccharomyces cerevisiae непосредственно репрессирует транскрипцию гена SER3 .В соответствии с его ролью в ремоделировании нуклеосом, Swi / Snf контролирует структуру хроматина промотора SER3 . Однако, в отличие от активации Swi / Snf, которая требует большинства субъединиц Swi / Snf, репрессия Swi / Snf на SER3 зависит в первую очередь от одного компонента Swi / Snf, Snf2. Эти результаты показывают явные различия в требованиях к Swi / Snf. компоненты транскрипционной активации и репрессии.

Сноски

• №1 Автор, ответственный за переписку.

• ЭЛЕКТРОННАЯ ПОЧТА winston {at} rascal.med.harvard.edu; ФАКС (617) 432-3993.

• Статья и публикации находятся по адресу http://www.genesdev.org/cgi/doi/10.1101/gad.1009902.

• • Поступило 24.05.2002.
  • Принято 2 июля 2002 г.
• Лабораторный пресс Колд-Спринг-Харбор

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

---

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно.Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом.Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

---

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу.Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

---

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта.