Как запустить стиральную машину без убл: Как запустить стиральную машину без убл

Содержание

Как запустить стиральную машину без убл

Порой техника начинает вести себя непредсказуемо, и отеческий хлопок по корпусу уже не имеет прежнего эффекта. Если стиральная машинка вдруг отказывается открывать дверцу, проблема наверняка заключается в блокирующем механизме, а не в упрямстве.

Бытовая техника стала неотъемлемой частью нашей жизни, а потому, когда что-то выходит из строя, воспринимается на грани катастрофы. Для хозяйки особенно болезненно, если ломается ее главная помощница – стиральная машина. Одна из возможных проблем – неисправное устройство блокировки люка (сокращенно – УБЛ).

Как работает и почему ломается замок

Создана запорная конструкция для нашей же безопасности. При неожиданном открытии дверцы есть риск оказаться на пути горячего потока, да и соседям снизу он не понравится.

Как только белье загружено в барабан, засыпано моющее средство, выбрана программа, захлопнута створка, а машинке отдана команда стирать, механизм запирается. Только спустя минуту после завершения цикла замок щелкнет, и люк можно будет открыть. Однако это в ситуации с исправно работающей техникой.

Есть два вида УБЛ:

термозамки с биометрическими пластинками;
электрозамки на электромагнитах.

У них есть важное отличие. Если в момент стирки отключится электричество, через несколько минут термозамок разблокирует люк, и белье можно достать. В случае с электромагнитным механизмом ситуация противоположная – добраться до вещей в барабане можно, только когда вновь восстановится электропитание.

Современные модели машинок оснащены в основном термозамками, которые более надежны и безопасны. Принцип их работы простой: термоэлемент под воздействием напряжения нагревается и заставляет биопластину изгибаться, пока не сработает фиксатор. Когда контакт установлен, на управляющий модуль поступает команда, что «граница на замке», и можно начинать стирку.

Если блокировка не сработала, модуль выведет на дисплей сообщение об ошибке.

После завершения стирки надо дождаться обратного процесса – остывания пластины и возвращения ее в исходное положение. Именно поэтому после окончания работы дверца отпирается не сразу.

Постоянные нагрев и остывание постепенно разрушают конструкцию, отчего однажды ее заклинивает. Элементы восстановлению не подлежат, и их можно только заменить.

Включить стиральную машину без блокирующего устройства нельзя – не позволит программа. Эту функцию можно обойти только в ремонтной мастерской, когда для тестирования состояния техники необходимо замкнуть контакты. Дома делать это опасно и сложно. Гораздо проще заменить неисправную деталь, тем более что она недорого стоит и всегда есть в наличии.

Как происходит замена УБЛ

Для тех, кто на «ты» с техникой, хорошая новость в том, что блокирующий механизм легко поменять самостоятельно:

1. При открытом люке.

Из инструментов понадобятся отвертка и плоскогубцы. Снимаем сначала хомут, а затем и саму резиновую герметизирующую манжетку.

Чтобы бак не мешал, наклоните корпус машинки назад. Теперь откручивайте винтики и демонтируйте УБЛ. Для этого снимите с проводов разъемы и подключите к ним новенький замок. Прикручивайте винтики обратно, возвращайте на место манжету с хомутом. Осталось лишь проверить результат контрольной стиркой.

2. При закрытом люке.

Для начала не паникуйте. Далее берите инструмент и снимайте верхнюю крышку корпуса стиралки. Наклоните машинку назад и просуньте руку между барабаном и лицевой панелью, найдите фиксатор замка и переместите его так, чтобы он отпустил дверцу. Далее меняйте устройство описанным выше способом.

Если ваши познания в технике ограничиваются статусом пользователя, лучше не рисковать, а обратиться за помощью в сервисный центр.

Как работает и почему ломается замок

Есть два вида УБЛ:

термозамки с биометрическими пластинками;
электрозамки на электромагнитах.

Как происходит замена УБЛ

1. При открытом люке.

2. При закрытом люке.

Все автоматические стиральные машины оснащаются устройствами блокировки люка – сокращённо эти устройства называются не иначе как УБЛ. Для чего нужен УБЛ и какую функцию он выполняет? Данное устройство необходимо для обеспечения безопасности во время стирки – оно блокирует дверцу люка. Если УБЛ сломано, то стирка станет невозможной

Как проверить УБЛ стиральной машины тестером и убедиться в его работоспособности?

Прежде чем начать статью о ремонте УБЛ, нужно рассказать о том, что существует два типа данных замков:

Термозамки, работающие на базе биметаллической пластины;
Электрозамки, построенные на электромагнитах.

Практически все современные стиральные машины оснащаются первым вариантом. Устройство блокировки люка с термозамком обладает более высокой надёжностью и выносливостью. К тому же, оно проще по своей конструкции и реже ломается. Поэтому в данном обзоре мы уделим внимание термозамкам.

Принцип действия УБЛ стиральной машины

Устройство блокировки люка стиральной машины на базе термозамка устроено очень и очень просто – внутри находятся биметаллическая пластина и термоэлемент, разогревающийся при подаче на него напряжения. Под действием тепла биметаллическая пластина мгновенно разогревается, изгибается и с помощью специального фиксатора блокирует дверцу загрузочного люка.

Одновременно с этим замыкается контакт, сигнализирующий управляющему модулю о том, что дверца действительно закрылась – далее стартует выбранная программа стирки. Кстати, указанный контакт является частью системы самодиагностики. Если по каким-то причинам блокировка люка не сработает (неправильно закрыт люк, сломался термоэлемент), то управляющий модуль выдаст на дисплей машины соответствующую ошибку.

Причины задержки разблокировки

Замечали ли вы, что после завершения программы стиральная машинка открывает люк не сразу, а спустя несколько минут? Для чего сделана такая задержка? Всё дело в том, что после остановки программы с термозамка снимается питающее напряжение. За счёт этого происходит постепенное остывание биметаллической пластины. Как только её температура достигнет определённого значения, она примет исходную форму и отодвинет фиксатор загрузочного люка – можно доставать бельё и отправлять его на сушку. Иногда случается так, что просто необходимо отключить стиральную машину во время стирки — как справиться с такой проблемой мы рассказывали в отдельном обзоре.

Ещё одно преимущество термозамка

Таким образом, УБЛ стиральной машины обладает предельно простой и долговечной конструкцией. И даже если отключится электроэнергия, спустя несколько минут произойдёт автоматическая разблокировка замка. Если же в стиральной машине будет установлен электромагнитный замок, то блокировка будет снята только после возобновления подачи электроэнергии – это ещё один недостаток замков данного типа.

Как проверить УБЛ стиральной машины

Для того чтобы проверить УБЛ стиральной машины, необходимо найти подходящий источник питания и подключить его к соответствующим контактам. Как только на термоэлемент поступит напряжение, биметаллическая пластина зафиксирует замок – будет слышан щелчок. Если с замком всё в порядке, нужно проверять другие узлы.

Например, следует проверить поступление напряжения с управляющего модуля. Для этого прикладываем щупы тестера к контактам замка и запускаем какую-либо программу, контролируя наличие напряжения. Если напряжения нет, проверяем модуль управления и электрические цепи УБЛ.

Замена устройства блокировки люка в стиральной машине

Ремонт УБЛ стиральной машины своими руками сводится полной замене замка. Но из-за чего он может сломаться? Самая распространённая причина поломки – потеря свойств биметаллической пластины. Со временем она разрушается за счёт постоянного нагрева и охлаждения. В результате происходит её поломка, а сам замок может заклинить в открытом или закрытом положении. Давайте разберёмся, как заменить УБЛ на стиральной машине.

Описание процесса ремонта следует начать с ситуации, когда у нас есть возможность открыть люк. Вооружаемся отверткой (или плоскогубцами, в зависимости от конструкции хомута) и снимаем хомут герметизирующей резиновой манжеты. После этого аккуратно снимаем её и откручиваем отвёрткой два винта, шляпки которых видны по бокам от отверстия замка. Далее просовываем руку в пространство между баком и передней стенкой и извлекаем замок наружу.

Сам замок меняется очень легко – снимаем разъёмы с проводами, после чего подключаем к ним новый замок. Далее устанавливаем его на штатное место, закрепляем винтами. После этого возвращаем манжету на место, прикладывая все усилия, чтобы она была надета правильно. Фиксируем манжету снятым хомутом и приступаем к проверочной стирке.

Что делать, если замок заклинило в закрытом положении? Без доступа к винтам мы его просто не снимем. Поэтому вооружаемся инструментами и снимаем верхнюю крышку стиральной машины. Отклоняем её корпус назад и протягиваем руку между корпусом и барабаном – здесь нам надо нащупать фиксатор замка и сдвинуть его в открытое положение. После этого открываем люк и приступаем к вышеописанной процедуре ремонта.

Можно ли запустить стиральную машину без УБЛ

Как уже говорилось, в конструкции термозамка присутствует специальный контакт, относящийся к диагностической системе стиральной машины. Как только он окажется в замкнутом положении, стиральная машина поймёт, что загрузочный люк надёжно заблокирован, и можно приступать к запуску программы стирки.

Если замок всё-таки сломался, то он будет передавать электронному модулю одну из двух ошибок:

Люк не закрывается;
Замок постоянно закрыт.

В любом случае мы увидим на дисплее машины соответствующую ошибку. Запустить машину без УБЛ невозможно, так как это противоречит безопасности – незаблокированный люк может быть открыт, что приведёт к затоплению помещения (а заодно и соседей снизу). Поэтому все программы стирки стартуют только после того, как будет получен сигнал о закрытии люка.

Но мы можем сформировать этот сигнал самостоятельно, замкнув соответствующие контакты. Это допустимо лишь при проведении тестирования стиральной машины. В реальных эксплуатационных условиях этого делать нельзя (к тому же, процесс этот весьма затруднительный). Лучше всего выполнить замену УБЛ и забыть про поломку – термозамки характеризуются достаточно приемлемой стоимостью и не являются дефицитом.

В стиральной машине-автомат каждая деталь отвечает за определенную работу — так, дверцу закрывает специальное устройство УБЛ. Этот электронный блокиратор фиксирует дверь при закрытии, посылая сигнал на модуль управления. Когда запорное устройство срабатывает, начинается стирка.

Мы рассмотрим причины поломки устройства блокировки, а также варианты его проверки.

Принцип работы и виды блокировки

Перед тем, как проверить замок в стиральной машине, необходимо понять, как это устройство работает. Зачастую, в современных машинах производители использую два типа замка:

Электромагнитный. Этот блокиратор используется все реже. Неудобство его использования в том, что он работает, пока есть подача электричества. Если его отключат, вам не удастся открыть люк.

Биметаллический. Устройство и принцип работы замка на двери люка довольно просты: электричество подается на термический элемент, который за счет этого нагревается. Одновременно он нагревает пластины из биметалла, за счет чего они выгибаются, оказывая давление на рычаг. Последний срабатывает и замыкает дверцу.

Такие термозамки с биметаллическими пластинами считаются наиболее эффективными.

Предусмотрена задержка при разблокировке дверцы. Зачем? Пока вода окончательно не сольется, а все части машины не остановят движение, дверь не должна открываться в целях безопасности.

Еще один плюс термозамков: при отключении электричества их можно открыть.

Почему УБЛ выходит из строя

Вы уже поняли, как работает УБЛ стиральной машины и в чем преимущества его использования. Почему же замок ломается? Вот основные причины неисправности:

Длительное использование способствует износу биметаллических пластин. В результате постоянной деформации пластины теряют свои функциональные качества.
Из-за короткого замыкания устройство также выходит из строя.

Пока на устройство подается напряжение, оно работает. Поэтому, если ваша стиралка остановилась, но дверь не разблокировалась, не спешите винить устройство блокировки. Скорее всего, сломался симистор на электронной плате, который отвечает за работу УБЛ. Питание подается беспрерывно, поэтому дверца не открывается.

Самостоятельная проверка замка СМА

Существует ряд внешних признаков, по которым пользователь может предположить неисправность блокировки:

СМ отключена, однако дверца остается закрытой. Причина кроется в устройстве блокировки либо в главном модуле.
При запуске программы стирка не начинается, люк остается открытым.
Стиралка выдает код неисправности, означающий поломку замка.

Чтобы понять, сломан замок или что-то другое, нужно знать, как проверить УБЛ в стиральной машине тестером.

Вам понадобится снять устройство с машины:

Отключите СМА от сети.
Откройте дверцу.
Отогните манжету люка и снимите ее хомут.

Оттянув манжету сбоку, вы увидите замок.

Открутите два болта, фиксирующие замок.

Разожмите все разъемы и достаньте блокиратор.

Теперь, когда УБЛ у вас в руках, вы можете начать проверку замка стиральной машины. Чтобы воспользоваться мультиметром, понадобится схема замка. Это необходимо для определения расположения общего и нейтрального контактов.

В домашних условиях вы сможете проверить только термоэлемент, который нагревает пластины.

Установите тестер в режим измерения сопротивления.
Приложите его щупы к нейтральному и фазовому контакту.
Замок исправен, если на экране показалось трехзначное число.
Щупальца мультиметра переставьте на контакты нейтральный – общий.
Устройство неисправно, если на табло высветилось 1 или 0.

Выяснив, как правильно проверить устройство блокировки люка в стиральной машине, вы можете установить новый замок. Действуйте так:

Подключите провода к исправному устройству.
Заведите его за стенку корпуса, установите в отверстие для замка.
Закрутите винты крепления.
Установите на место хомут манжеты.

Проверка УБЛ в стиральной машине задача не сложная, вы сможете сделать это своими руками. Разумеется, при неисправном замке дверца не закроется, поэтому стирка не начнется в целях вашей безопасности.

Установить новый блокиратор не составит труда новичку, главное – последовательность действий.

Все машинки с фронтальной загрузкой оснащены блокиратором. Это устройство надежно закрывает дверцу люка от случайного открытия во время стирки. Представьте, если посреди цикла кто-то случайно дернул ручку и полный бак воды пролился бы на пол. Именно такие казусы предотвращает защитная блокировка. Но как проверить замок стиральной машины, если он вдруг заклинил либо, наоборот, не срабатывает? Об этом пойдет речь в статье.

Устройство блокировки люка

Приступая к проверке, важно понимать, какой тип замка установлен в вашей модели стиральной машинки-автомата (СМА). В более старых выпусках СМ производители устанавливали блокираторы с электромагнитом. Однако они оказались неэффективны без электричества. Если во время стирки отключали электричество, то люк автоматически разблокировался.

Другое дело — замок двери люка на основе биметаллических пластин. Их применяют повсеместно благодаря эффективной работе.

Состоит конструкция из трех основных элементов:

термоэлемента;
биметаллической пластины;
фиксирующего устройства.

Как работает УБЛ? Все завязано на электронике. Электронная плата подает ток на термоэлемент, который быстро нагревается. Он в свою очередь — на пластину, которая, увеличиваясь в размере, выталкивает фиксатор. Обычно, когда вы запускаете цикл, слышится щелчок, что означает фиксацию дверцы и готовность к забору воды.

После окончания стирки дверца открывается с задержкой? Это нормальная практика. Так работает система безопасности, задерживая фиксацию, пока вода полностью не сольется из бака.

Принцип работы замка разобрали. Теперь поговорим о его неполадках: по каким причинам случается поломка?

Причины неисправности блокиратора в стиралке

Есть две основные причины поломок: физический износ и проблемы с электроникой.

Постоянная деформация пластин при нагреве приводит к порче и разрушению элемента. В таких случаях фиксация совсем не срабатывает.
Скачки напряжения в сети могут привести к пробою термоэлемента. Тогда он не нагревается, следовательно, и пластина остается на месте. Замыкание симистора управления приводит к тому, что дверца не открывается. Ток непрерывно подается на детали, поэтому фиксатор не отключается.

Что делать в случае неполадки? Проверить замок стиралки и выполнить замену при неисправности.

Как проверить УБЛ стиральной машинки тестером?

Первое, что бросается в глаза при поломке — это ненормальная работа техники. Вот какие признаки указывают на проблемы с УБЛ:

Люк не открывается даже спустя несколько часов по окончании стирки.
На дисплее стиралки высветился код, который указывает на неполадку блокиратора.
Дверца не разблокируется даже после отключения техники от сети.
Во время запуска замок не срабатывает, люк не закрывается.

Чаще всего из строя выходит либо сам элемент, либо его проводка и управляющий модуль. Точно установить причину поломки поможет мультиметр.

Чтобы выполнить диагностику, вам понадобится электрическая схема устройства. Для каждой модели она может быть различна, потому что производители располагают контакты по-своему.

Что вам нужно выяснить:

Где находится контакт «нейтральный».
Где находится «общий».
Где расположена «фаза».

Подготовьте мультиметр, отрегулируйте его на измерение сопротивления. Добраться к замку можно одинаково во всех фронтальных моделях:

Откройте дверцу.
Выкрутите два болта крепления.
Отогните уплотнительную манжету.
Запустите руку за корпус.
Достаньте УБЛ.
Отключите проводку.

Теперь один щуп тестера приложите к нейтральному контакту, а другой к фазовому. Нормальными считаются трехзначные значения.

Далее один щуп прислоните к нейтральному контакту, а другой к общему. Прибор считается сломанным, если значения оказались 1 или 0.

Тестер не нашел поломку, но блокировка не срабатывает? Осмотрите сам замок, возможно, причина как раз в износе биметаллического элемента. Ремонту блокировка не подлежит, нужно сразу провести замену. Купите в магазине идентичную деталь, подключите провода и установите ее на прежнее место. Подробности смотрите на видео:

Как выполнить диагностику, если люк заблокирован? Есть простой способ его открыть:

Возьмите тонкую тесемку.
Проденьте ее между дверцей и корпусом СМА.
Потяните с усилием за оба конца.
Защелка должна поддаться.

В последнюю очередь осматривают управляющую плату. Ее симисторы часто страдают от окисления и подгаров. Виной тому — нестабильное напряжение в сети и повышенная влажность в помещении. Ремонт модуля лучше доверить специалисту.

Чтобы сохранить работоспособность электроники стиральной машины, подключайте технику через стабилизатор напряжения . Перед началом ремонта отключите вилку от розетки.

Запустить стиральную машину без УБЛ можно, но не нужно

Как работает и почему ломается замок

Есть два вида УБЛ:

термозамки с биометрическими пластинками;
электрозамки на электромагнитах.

Как происходит замена УБЛ

1. При открытом люке.

2. При закрытом люке.

загрузка…

Как включить стиральную машину без УБЛ

Пока «мозг» машинки не получит сигнала, что люк закрыт, цикл не запустится. Вода не начнет набираться в бак, если система негерметична. Однако некоторые умельцы все же умудряются обмануть модуль управления и включают стирку даже со сломанным УБЛ, главное, чтобы контакты блокиратора были целые. Разберемся, как запустить стиральную машину без УБЛ. Если быть точнее, то с ним, только с неисправным. Расскажем, как нужно действовать.

Как вынуть замок машинки?

Конечно, самый верный способ – сразу заменить УБЛ при выявлении его поломки. Если купить новый замок пока не получается, можно пойти иным путем – слегка «подделать» неработающий блокиратор.

Чтобы замкнуть контакты блокиратора и запустить стирку как бы без него, необходимо демонтировать устройство.

Снять блокиратор можно по-разному. Некоторые мастера убирают манжету люка и после демонтируют замок. Риск такого способа в том, что обывателю, по неопытности, потом будет сложно вернуть на место уплотнительную резинку. Поэтому более легкий вариант – достать УБЛ через верх машинки-автомат. Алгоритм действий будет таковым:

обесточьте стиралку;
настежь откройте дверцу люка;
отыщите отверстие, куда заходит «язычок» замка;
выкрутите два болтика, находящихся рядом со «скважиной» для крючка;
снимите верхнюю панель корпуса, открутив два удерживающих ее самореза;
рукой дотянитесь до УБЛ через верх машинки и аккуратно сбросьте фишку с проводами;
медленно вытащите блокиратор из корпуса.

Далее придется поработать с контактами сломанного замка. Разберемся, что делать с демонтированным блокиратором, как включить стирку.

Имитируем включенное УБЛ

Чтобы запустить машинку со сломанным блокиратором, придется «убедить» модуль управления в абсолютной исправности замка. Обмануть интеллект машинки-автомат получится, если замкнуть контакты УБЛ в положении блокировки. Чтобы выполнить это, необходимо разобраться, как срабатывает механизм.

На стандартном блокираторе имеется 3 контакта – N, L, C. На первые два подается напряжение. За счет этого нагревается термокатушка, которая накаляет биметаллическую пластинку. Затем горячая пластина замыкает между собой контакты L и C.

Замыкание двух крайних контактов – это и есть сигнал для «умного» модуля, что дверца люка плотно закрыта. После этого «мозг» активирует впускной клапан и вода начинает поступать в бак.

Чтобы включить машинку со сломанным замком, необходимо замкнуть перемычкой два крайних контакта УБЛ – L и C.

Вернув «переделанный» блокиратор на место, попробуйте запустить цикл. Машинка может «подумать» несколько минут, но в большинстве случаев стирка все же начнется. Не надо дергать дверцу, чтобы посмотреть, надежно ли она закрыта. Блокирующее устройство не работает, поэтому открыть люк будет очень просто.

С самыми современными автоматами такой фокус не пройдет. У них предусмотрен защитный алгоритм, поэтому замыкание контактов перемычкой приведет лишь к отображению на дисплее кода ошибки. Встречается такая технология сегодня редко, поэтому можно попробовать «обмануть» электронный модуль.

Поделитесь своим мнением – оставьте комментарий

Как обойти убл стиральной машины индезит?

Как обойти убл стиральной машины

Наиболее распространенные приемы разблокировки

В большинстве случаев, чтобы снять стиральную машину с блокировки, необходимо отключить ее от сети электропитания, вынув вилку из розетки на 15-20 минут. За это время аппарат сбросит программу и будет готов к новому циклу.

Чтобы экстренно разблокировать дверцу стиральной машины, на большинстве современных агрегатов следует выбрать программу «отжим» и режим «без отжима». Через две-три минуты люк откроется.
При необходимости «привести в чувство» машину после кратковременного отключения электричества можно нажать и 30-60 секунд удерживать кнопку «Старт» или «Пуск» на панели управления.
Проблему с замком машины Сименс, Бош или Аристон можно снять, запустив стирку по новой. В процессе, нажав «отложенный старт» либо «без отжима», следует потянуть дверцу на себя, как только станет слышен щелчок.

Отключение стиральной машины

Как самый крайний вариант, можно снять блокировку двери стиральной машины вручную. В большинстве приборов Bosch, Самсунг, Аристон и прочих внутри корпуса установлен аварийный тросик. Он располагается под крышкой дренажного фильтра. Окраска тросика обычно красная или оранжевая.

Второй вариант «ручного» открытия Bosch и прочих марок машин более сложен и требует навыка обращения с отверткой. Придется снять верхнюю панель и, отклонив весь агрегат назад (чтобы барабан несколько сдвинулся и открыл доступ к устройству замка), просунуть руку внутрь корпуса. Нащупав запорное устройство, нужно надавить пальцем на язычок замка (в сторону), и потянуть дверцу на себя. Перед тем как разбирать автомат, следует отключить его от розетки и слить всю воду.

Снятие блокировки вручную

Блокирование и его устранение

Рассмотрим подробнее особенности разблокировки на разных моделях:

На приборах марки Индезит (чаще всего модели WISL 82) мигание лампочки замка свидетельствует о включенном режиме стирки без отжима. Некоторые владельцы случайно выбирают данную опцию и принимают этот сигнал за неисправность. Для устранения проблемы следует отключить «исключение отжима» нажав на соответствующую кнопку меню.

Стиральная машина Indesit WISN 82

Если не удается разблокировать дверцу машинки Индезит WIU 80, это свидетельствует о серьезной неисправности. В этом случае требуется вызов мастера по ремонту.
Прибор Индезит WISL 103, имеющий проблемы с электронным модулем люка или датчиком температуры воды, сигнализирует об этом индикатором замка и кодом ошибки KEY3 или KEY4. Для устранения неисправности следует обратиться в мастерскую.
Аппараты Индезит WIUN 102 сигнализируют индикатором «блока» о поломке клапана подачи воды либо о проблеме с прессостатом и платой управления. Разблокировать «захандривший» прибор сможет только мастер.
В аппаратах марки Бош модели LOGIXX 8 SENSITIVE предусмотрен ручной режим для аварийного открытия люка. Для разблокировки следует снять нижнюю панель прибора и сильно потянуть за тросик, расположенный за ней.
Отключить замок на агрегате Бош модели WAS 20443 можно при удержании нажатой кнопки «стоп/пауза», расположенной в правой части панели.
Разблокировать замок на стиралке Bosch MAX 5 можно путем установки ее на программу, с которой была начата стирка. Затем, выждав до момента непрерывного горения индикатора замка, нужно нажать и удерживать 5 секунд кнопку «отложенный старт».
На машинках Самсунг SENSOR COMPACT f015j поломка электронного блока или износ замка люка проявляется как индикация ошибки «door» и остановка в процессе стирки. После нескольких минут отстоя прибор может продолжить операцию, но эта ситуация будет повторяться до замены замка или устранения неисправности проводки. Следует вызвать мастера.

Стиральная машина Самсунг DIAMOND

В стиралках Самсунг DIAMOND дверца не открывается при некорректной работе сливного насоса. Чтобы получить доступ к белью, придется слить воду вручную и подождать несколько минут, затем длительно удерживать кнопку «старт/пуск».
Рекомендации, как снять стиральную машину Аристон с блокировки, кроме общих перечисленных приемов, указывают на необходимость осмотреть сливной фильтр. Машинка, как и Bosch, не откроется в случае неполного слива воды, произошедшего из-за его засора.

Мигают индикаторы на стиральной машине

Срабатывание исключительно блокировки замка двери и мигание индикации без запуска какой-либо программы на стиралках Индезит, Bosch, Аристон, Самсунг или Сименс, свидетельствует об аппаратной ошибке. Прибору требуется квалифицированная диагностика.

При неудачной попытке снять блокировку двери простыми способами переходить к ручному разблокированию следует, если машина не находится на гарантии, поскольку подобное вмешательство может стоить владельцу отказа от гарантийного обслуживания и бесплатного ремонта техники.

Источник: http://1stiralnaya.ru/ekspluataciya/snyat-blokirovku

Как своими руками отремонтировать замок стиральной машины – Remont-Bosch.RU

Загрузочные люки всех современных стиральных машин снабжаются специальными устройствам блокировки, которые предотвращают их открытие во время работы агрегатов. В большинстве случаев они состоят из таких деталей, как терморезистор, биметаллическая пружина, задвижка и возвратная пружина. Как только дверь стиральной машины закрывается и запускается выбранная программа стирки, через терморезистор начинает течь ток, он нагревается, биметаллическая пружина меняет свою форму и задвигает запорную планку, блокируя тем самым загрузочный люк. После того, как стирка заканчивается, цепь размыкается, терморезистор остывает, а возвратная пружина выталкивает в исходную позицию запорную планку.

Ремонт замка стиральной машины требуется относительно редко, поскольку в его конструкции деталей не так уж и много, и они отличаются довольно высокой надежностью. Однако порой все же бывает так, что вследствие больших перепадов напряжения терморезистор выходит из строя и устройство блокировки люка перестает функционировать должным образом. Следует отметить, что замки стиральных машин обычно выпускаются в полностью герметичных пластиковых корпусах, и поэтому они, по сути дела, являются неремонтопригодными. Таким образом, эти устройства в случае их неисправности требуют замены.

Ссылки по теме:
Ремонт замка стиральной машины Ariston ( нужен тогда, когда «сгорает» его основной элемент – терморезистор )
Ремонт замка стиральной машины Indesit ( все их компоненты заключены в герметичный корпус, не подлежащий разборке )

Производится эта процедура достаточно просто. Для начала стиральная машина полностью отключается от сети и из нее удаляется вода. После этого при помощи крестообразной отвертки демонтируется верхняя панель. Устройство блокировки люка располагается на внутренней стороне фронтальной панели, рядом с дверцей. Для того чтобы его снять, требуется сначала отключить ведущие к нему провода, а затем открутить крепежные винты. Опытные мастера не торопятся устанавливать новую деталь, и для начала производят диагностику предположительно неисправной. Дело в том, что порой вина за то, что замок не срабатывает, лежит на модуле управления стиральной машиной, который «забывает» подать на УБЛ напряжение при запуске программы стирки. Чтобы проверить, исправен ли этот узел, достаточно просто подключить его к источнику тока.

Ссылки по теме:
Ремонт замка стиральной машины Miele ( ремонт устройства блокировки люка стиральной машины Miele )
Ремонт замка стиральной машины Samsung ( отсоединяют электропровода, а после этого отвинчивают крепежные винты )

Следует подчеркнуть, что замену устройства блокировки люка предпочтительнее доверить профессионалам авторизованного сервисного центра. Они отлично знают особенности конструкции различных моделей стиральных машин, большой практический опыт, и поэтому произведут все работы быстро и качественно. К тому же обойдется это совсем недорого, а если «стиралка» находится на гарантии – то вообще бесплатно (потратиться придется только на новый замок).

Ссылки по теме:
Ремонт замка стиральной машины Zanussi ( на него просто подается питающее напряжение от независимого источника )

Ремонт замка стиральной машины Zanussi

Ремонт замка стиральной машины Zanussi

Дверцы стиральной машины Zanussi во избежание их случайного открытия во время работы агрегата снабжаются специальными устройствами блокировки (УБЛ). Они могут иметь различную конструкцию, но наиболее распространены те, работа которых основана на термическом принципе. Такие замки состоят из полупроводниковых приборов, называемых терморезисторами, биметаллических пластин, задвижек и возвратных пружин. Принцип функционирования таких устройств блокировки достаточно прост: при запуске рабочего режима через терморезистор начинает течь ток, он начинает нагреваться, а биметаллическая пружина воздействует на задвижку, которая и запирает люк. Этот механизм подвержен поломкам и требуется ремонт стиральной машины Samsung. Как только стирка или отжим белья прекращаются, электрическая цепь разъединяется, резистор и биметаллическая ланка остывают, и возвратная пружина отправляет засов в исходное положение.

Ремонт замка стиральной машины Zanussi требуется в тех случаях, когда выходит из строя основной его чувствительный компонент, то есть терморезистор. К сожалению, устройство блокировки люка представляет собой неразборную конструкцию, все компоненты которой заключены в герметичный пластиковый корпус, и поэтому его в случае поломки требуется просто заменить на новый. Доверить эту работу лучше всего мастерам авторизованного сервисного центра производящих ремонт импортных стиральных машин, поскольку, несмотря на относительную простоту, она имеет некоторые нюансы (которые чаще всего зависят от особенностей конструкции отдельных моделей стиральных машин Zanussi), а также требует некоторых навыков и сноровки.

Устройство блокировки люка обычно крепится с внутренней стороны передней панели «стиралки», в непосредственной близости от дверцы. Поэтому для того, чтобы его демонтировать, следует эту самую дверку открыть, затем отсоединить от него электропроводку, взять крестообразную отвертку и отвернуть крепежные винты. После этого неисправное УБЛ можно вынимать из машины и на его место смонтировать новые устройство.

Справедливости ради следует отметить, что нередко устройство блокировки люка стиральной машины не работает не потому, что он неисправно, а по той простой причине, что на него просто не подается электричество. Поэтому опытные мастера, прежде чем менять замок на новый, проверяют его «истинную» работоспособность. Для этого на него просто подается питающее напряжение от независимого источника, и если УБЛ срабатывает, то проблема не в нем, а, скорее всего, в устройстве управления. Что касается стоимости устройства блокировки люка стиральной машины Zanussi, то она весьма демократична, да и услуги по его замене довольно недороги.

Дополнительная информация:

Стоимость ремонта замка стиральной машины Zanussi

Замок стиральной машины не разблокируется – как действовать

22 Апреля 2020

Всем известно, что после окончания цикла стирки стиральная машина должна автоматически открыть дверцу спустя пару минут.

Но, может случится так, что эта дверца не открывается. В чем же причина и как действовать. В данной статье мы расскажем обо всех причинах, по которым это может случится.

Содержание:

Как открыть дверцу стиральной машины

Остановится стиралка может по средине цикла стирки, в процессе отжима или полоскания и при этом дверь прибора останется заблокированной. Но, может быть такое, что машинка закончит процесс стирки, но дверь останется закрытой. Не важно, в какой момент остановилась машинка главное не применять силу, чтобы открыть ее дверцу. Ведь последствием ваших усилий может быть только сломанная ручка. Это все равно не даст результата, дверь останется закрытой. Вы просто получите дополнительные расходы, ведь придется покупать новую ручку.

Сохраняйте спокойствие и прислушайтесь к некоторым полезным советам:

1. По окончанию стирки машинка сливает всю воду, останавливается и спустя минуту дверца автоматически открывается. Но, в некоторых моделях для этого может понадобится больше времени, около пяти минут.

2. Стоит проверить не осталась ли в машинке вода. Есть такие модели машинок, особенно новые, в которых с завода запрограммировано открытие люка, только когда внутри бака нет воды. Это мера предосторожности, чтобы избежать потопа. В таком случае нужно воспользоваться специальной программой «Слив воды».

3. Если описан выше совет не помог справится с этой задачей, то попробуйте отключить прибор примерно на пол часа. Потом снова включите стиралку в розетку. Иногда бывает, что в работе прибора может произойти сбой в работе платы управления. Отключение позволит перегрузить машинку и устранить сбой.

4. Если процесс стирки окончен, а люк не открывается, попробуйте снова запустить стирку. Машинка запрограммирована так, что перед тем как начать стирку она проверяет заблокировался люк или нет. Если вы поймаете этот момент, то вам удастся открыть дверь и программа запуска отключится автоматически.

Если все выше описанное не помогло, и дверца осталась закрытой, то скорее всего ваша стиральная машина сломалась и ее необходимо отвести в сервис или вызвать мастера для ремонта на дом.

Давайте попробуем разобраться, в причинах выхода из строя машинки и методах исправления. Но, все же лучший помощник – это мастер.

Открыть дверцу стиралки вручную

Завод изготовитель при разработке своих продуктов продумывает все до мелочей, для того, чтобы пользователь комфортно себя чувствовал. Поэтому и предусмотрены все программы для блокировки дверцы, чтобы избежать потопов и всего остального. Но, завод предусматривает и то, что дверь стиральной машины можно открыть вручную. Для этого есть специальный тросик возле лючка слива воды.

Последовательность действий для того, чтобы открыть дверцу стиралки

Еще раз наполним, что очень часто помогает в случае заблокированной дверцы отключение бытового прибора от сети.

Практически в каждой машинке на передней панели внизу, там, где сливной лючок есть тросик оранжевого цвета. Именно этот тросик отвечает за ручное открытие люка машинки.

Но, может быть и такая модель, в которой нет оранжевого тросика. В таком случае вам придется снять переднюю панель стиралки. Далее наклоните прибор назад, это отодвинет барабан от передней стенки машинки. После этого попробуйте достать фиксатор замка и отведите его в сторону, для разблокировки люка.

Не забывайте, стиралка – это хрупкий бытовой прибор, поэтому если у вас нет уверенности в том, что справитесь с этими действиями, то лучше всего отвести машинку в сервис или пригласите мастера. Дело в том, что если вы не справитесь с этой задачей, то придется покупать ручку и проводить ее замену, а это будет намного доже стоять.

Почему дверка стиралки не открывается и как это решить

Основная причина выхода из строя машинки – сбои в работе устройства, что отвечает за автоматическую блокировку люка или же неисправность ручки дверки стиральной машины.

Если причиной неисправности является устройство блокировки люка (УБЛ), то это не поддается ремонту, устройство УБЛ необходимо менять полностью.

Для замены УБЛ нужно снять верхнюю крышку машинки, отвинтите саморезы, что держат устройство блокировки люка. Открутить саморезы модно только открыв заблокированную дверь. Это возможно наклонив машинку и рукой разблокировав дверцу вручную. Потом снимите хомут, фиксирующий люк. Потом отсоедините правую часть манжеты люка. В образовавшиеся отверстие должна пройти рука, для снятия саморезов. Снимите УБЛ и замните его на новый. Снимая замок запомните или зарисуйте последовательность, в которой вы проделали всю работу для снятия замка, чтобы потом не забыть.

Проделав всю нужную работу требуется проверить, правильно ли вы установили УБЛ. Включите стиральную машину в сеть, выберите короткую программу и запустите ее, машинка должна заблокировать двери, а окончив стирку спустя пару минут дверца разблокируется.

Как устроена дверь стиральной машины

Еще к распространённым поломкам относится неисправная ручка стиральной машины. Решить эту проблему можно только одним методом – замена ручки двери. Это не сложная процедура. Дверца машинки состоит из пластиковых ободков, которыми окружено стекло люка. Крепятся эти ободки при помощи саморезов и специальных защелок. Чтобы удобно было менять ручку снимите дверцу с петель, раскрутите саморезы, отсоедините ободки друг от друга. К одной из половинок крепится ручка, а к ней присоединен язычок, что фиксирует дверцу в корпусе.

Принявшись за замену ручки, хорошенько запомните всю последовательность действий, чтобы потом при сборке не было лишних запчастей и болтиков. Если не уверены, что запомните, то зарисовывайте или фото фотографируйте каждый шаг.

Как завершите процесс установки новой ручки включите стиралку и запустите самую короткую программу, чтобы проверить все ли правильно сделано. Важно, чтобы дверца не только блокировалась при включении программы, но и хорошо фиксировалась.

Блокировка дверцы стиралки может быть и в том, что в замок попали вещи при загрузке. Но, дергать и вырывать дверь не нужно. Снимите верхнюю крышку стиральной машины, предварительно отключив ее от сети, потом найдите зацеп и используя отвертку снимите его.

Чтобы проделать все эти действия машинку нужно наклонить. Наклоняя убедитесь, что в ней нет много воды, иначе вода попадет на модуль управления и модуль сгорит. А ремонт тогда будет не особо выгодным, ведь модуль очень дорогой и ремонт тоже стоит денег.

Можно ли открыть машинку если отключили электричество

Наверное, каждый сталкивался с тем, что только поставили стирку и электроэнергию отключили. Это может быть просто выбили пробки, но может быть и причина отсутствия света в том, что случилась авария на подстанции, и света не будет несколько часов. В таком случае оставлять белье в машинке не нужно.

Больше проблем возникнет со стиральной машиной, у которой фронтальная загрузка. Ведь в такой машинке если пропал свет, дверки открыть невозможно, даже если прилагать усилия. Ведь все запрограммировано таким образом, что если в стиралке есть вода, то дверца не откроется, это позволит уберечь вас от потопа. Именно по этой причине не стоит пытаться открыть люк вручную, если вы не уверены в том, что в машинке нет воды.

Полезные советы

1. Если не открывается стиральная машина, то стоит взять инструкцию и посмотреть в ней подробные действия, когда заблокирована дверца.

2. Просмотрите слита ли вода полностью со стиральной машины.

3. Разблокировать дверь, можно обесточив машинку.

4. Проверьте работоспособность устройства блокировки люка, или ручку стиральной машины.

5. Если стиралка заблокировала дверь через отключение электричества, то необходимо сначала убедится есть вода в машинке или нет, и только тогда открывать замок.

6. В случае, когда вы не имеете уверенности в том, что сами сможете справиться с заменой УБЛ или ручки, то лучше не беритесь, а сразу обратитесь в сервисный цент. Ведь если при самостоятельном ремонте что-то пойдет не так, то придется заплатить больше, чем сразу вызвать мастера.

Удачных покупок!

Часто задаваемые вопросы про Стиральные машины

Схема замка стиральной машины индизит. Ремонт или замена УБЛ (замка) в стиральной машине

Задумывался ли кто-нибудь из вас хотя бы раз в жизни о том, сколько важных элементов в стиральных машинах? Вот, например, замок для стиральной машины – вроде бы ничего особенного, но нет. Если замок выходит из строя, то о стирке и речи не может быть. Почему так, и как заменить замок на стиральной машине, мы постараемся рассказать в этой статье.

Принцип действия запорного устройства люка стиральной машины-автомата

Устройство блокировки люка автомата на основе термозамка действует очень и очень легко:

Внутри находится биметаллическая пластина, а также термоэлемент, который нагревается при подаче на нее напряжения.
Под воздействием тепла биметаллическая пластина моментально нагревается, изгибается и с помощью специального зажима запирает дверцу загрузочной дверцы.
В то же время замыкается контакт, который сигнализирует модулю управления, что дверца фактически уже закрылась – тогда начинается выбранная программа стирки.

Важно! Указанный контакт – важная часть системы самодиагностики. В случае, если по каким-либо причинам не смог сработать замок люка – либо неправильно закрытый люк, либо сломался термоэлемент, модуль управления отобразит соответствующую ошибку на дисплее машины.

Причины, по которым может возникнуть задержка отпирания люка

Обычно при завершении программы стиральной машины люк открывается не сразу, а по прошествии нескольких минут. Для чего была сделана эта задержка? Все дело в том, что после остановки программы с термоблоком снимается напряжение питания. Благодаря этому происходит поэтапное охлаждение биметаллической пластины.

Когда его температура достигнет определенного значения – оно приобретет исходную форму, отодвинет замки загрузочной дверцы – вы можете вынуть белье и отправить его на льняную нить или в сушилку.

Важно! Исходя из того, что мы описали вам ранее, стиральные машины UBL имеют чрезвычайно простую и прочную конструкцию. И даже при отключении электричества через несколько минут замок стиральной машины автоматически разблокируется.

Если внутри стиральной машины установлен электромагнитный замок, то замок снимется только после возобновления подачи электроэнергии – это недостаток замков данного типа.

Если замок для стиральной машины сломан – этого процесса не происходит или происходит некорректно.В конце концов – нельзя открывать люк и забирать чистые вещи.

Самая частая причина выхода из строя – биметаллическая пластина потеряла свои свойства. Через время он разрушается из-за постоянного нагрева, а после – и охлаждения. В результате всего этого он выходит из строя, а сам замок вполне может застрять в закрытом или открытом положении.

Как проверить стиральную машину-автомат УБЛ?

Чтобы проверить устройство блокировки люка стиральной машины-автомат, необходимо найти подходящий источник питания, а затем подключить этот же источник к соответствующим контактам.Когда на термоэлемент поступит напряжение, биметаллическая пластина надежно зафиксирует замок – вы должны будете услышать характерный щелчок. Если блокировка в порядке, проверьте оставшиеся узлы.

Например:

Необходимо проверить соответствующее напряжение с модуля управления. Для этого прикрепите щупы тестера непосредственно к контактам замка и запустите какую-нибудь программу, при этом следя за наличием напряжения.
Если напряжение отсутствует, проверить модуль управления и электрические цепи UBL.

Можно ли запустить программу стиральной машины без UBL?

Как уже упоминалось ранее, конструкция термозамка имеет специальный контакт, который относится к диагностической системе вашей автоматической стиральной машины. Как только он перейдет в закрытое положение, агрегат поймет, что дверца загрузочного люка надежно заблокирована, и вы сможете приступить к запуску программы стирки.

Если замок стиральной машины все еще сломался, он передает одну из этих двух ошибок в специальный электронный модуль:

Люк не закрывается;
Замок всегда в закрытом положении.

В любом из этих случаев вы увидите соответствующую ошибку на дисплее вашего автомата.

Важно! Запустить программу стирки стиральной машины без УБЛ невозможно, так как это противоречит всем протоколам безопасности. Незапертый люк может находиться в открытом состоянии, что приведет к немедленному затоплению помещения, а заодно – ваших соседей снизу. Поэтому абсолютно все программы стирки запускаются исключительно после того, как будет получен сигнал о закрытии люка.

Но мы можем сформировать этот сигнал самостоятельно, просто замкнув соответствующие контакты.

Важно! Это действие разрешено только во время тестирования стиральной машины. Во время реальной эксплуатации этого делать ни в коем случае нельзя, тем более что процесс этот очень сложный.

Лучшим вариантом будет заменить УБЛ и забыть о поломке, потому что, помимо прочего, термозамки отличаются достаточно доступной ценой и не являются дефицитным продуктом.

Поменять устройство блокировки люка стиральной машины-автомат

Замена стиральной машины УБЛ своими руками сводится к полной замене замка. Посмотрим, как заменить замок стиральной машины.

Поменять замок на открытый люк

Описание процесса замены УБЛ нужно начинать с ситуации, когда есть возможность открыть люк:

Вооружитесь отверткой или плоскогубцами – все зависит от конструкции фиксатора, а затем снимите фиксатор уплотнительной резиновой манжеты.
Осторожно снимите его и отверткой открутите два винта – шляпки этих винтов видны с разных сторон отверстия замка.
После этого просунуть руку в пространство между баком и передней стенкой, вытащить фиксатор.

Важно! Чтобы обеспечить легкое снятие замка, вы можете наклонить корпус назад, чтобы тяжелый барабан не давил на манжету.

Сам замок довольно простой – снимаем разъемы с проводами, затем подключаем к ним только что приобретенный замок.
Затем установите его в предусмотренное место и закрепите винтами.
После этого верните манжету на место, приложив все усилия для ее правильного ношения.
Зафиксируйте манжету со снятым зажимом, а затем выполните пробную стирку.

Что делать, если замок заклинило в закрытом положении?

Если у вас нет доступа к винтам, вы просто не будете их снимать. Следовательно:

Вооружитесь инструментами и снимите верхнюю крышку стиральной машины.

Наклоните ее тело назад и протяните руку сквозь корпус и барабан – здесь вы должны нащупать замок, а затем переместить его в открытое состояние.

После этого откройте люк и перейдите к описанной выше процедуре замены UBL.

Теперь вы знаете, как работает замок стиральной машины, как он работает и почему он может не открываться вовремя или ломаться. Надеемся, что даже если с вами случилось последнее, вы смогли отремонтировать УБЛ своими руками без помощи мастера.

Запирающее устройство люка (UBL) предназначено для обеспечения того, чтобы дверца люка стиральной машины была заблокирована в течение всего цикла стирки, для безопасного использования. Наибольшее распространение в стиральных машинах получила термоблокировка, в которой присутствует термоэлемент.

1. Внутреннее термоблокирующее устройство

Кратко опишем принцип работы дверного замка-люка. Нагреваясь за счет прохождения электрического тока, термоэлемент нагревает биметаллическую пластину, которая практически мгновенно прогибается, замыкая контакты цепи стиральной машины.

Одновременно с замыканием контактов и запуском процесса стирки происходит механическая блокировка язычка дверцы люка. После этого ручка люка не вращается, а дверца или верхняя крышка не открываются.

По окончании цикла стирки устройство термоблокировки обесточивается, пластины возвращаются в исходное положение через 1–4 минуты, а дверца разблокируется.

2. Причины отказа двери от замка

Есть две основные причины отказа блокировки:

Первый – это физический износ биметаллических пластин, которые рассчитаны на определенное количество включений-выключений.Каждый раз, выгибаясь при включении и возвращаясь в конце стирки, пластины изнашиваются, становятся хрупкими и не выполняют свои функции.
Вторая причина – когда при падении напряжения в сети во время стирки пластины теряют свои свойства или разрушаются.

3. Проверить исправность устройства блокировки люка (УБЛ)

Как правило, выход из строя замка выражается в том, что пластины не возвращаются в исходное положение и дверь остается запертой.Постоянно запираемая дверца стиральной машины в выключенном состоянии, это первый признак выхода из строя замка люка. Такой замок обязательно нужно заменить.

Немного сложнее понять выход из строя термоблока, если он не блокируется после включения кнопки пуска и не запускается стирка.

Тогда в основном есть два варианта: либо замок вышел из строя, либо неисправен электронный модуль. Отдельно от автомата проверить замок сложно, так как для этого нужно было бы подключить к нему электричество по определенной схеме и щелкнуть для определения исправности.

Поэтому, если дверца люка не заблокирована, то выключите стиральную машину от электросети, снимите замок и купите новый в магазине, следуя модели (неисправный замок ремонту не подлежит). Это не дорого.

Купив новый УБЛ, устанавливаем его на стиральную машину и включаем на стирку. Если процесс пошел, значит дело было в блокировке, если нет – неисправен электронный модуль. Дальнейшие действия зависят от предпочтений конкретного человека и обстоятельств.

Катя 23.03.17

В нашей квартире, на кухне, установлена встроенная посудомоечная машина Neff. И, как вы понимаете, разборка и доставка в ремонтную мастерскую потребуют много времени и сил. Поэтому мы пригласили мастера Ремонт-Бош для ремонта на дому. Машина без перебоев прослужила нам три года, но все же пришло время, когда она потребовала ремонта. Все проблемы были с качеством воды. Это из-за того, что ее машина вышла из строя. Мастер посоветовал поставить дополнительный фильтр, особенно для посудомоечной машины.И в будущем таких проблем больше не будет. Еще мне очень понравилось, что перед приездом мастер спросил о модели машины и о том, что с ней случилось при поломке. Это дало ему возможность взять с собой сразу все необходимые детали и произвести ремонт на месте. Очень доволен ремонтом и мастером сделавшим его.

Антон 24.03.17

У нас очень маленькая семья, в ней всего два человека, и посудомоечная машина bosch тоже компактных размеров.Эта техника служила нам ежедневно в течение 8 лет без каких-либо повреждений и нареканий. Но настал момент, когда она просто перестала работать. Перед выходом на работу позвонил на участок из ремонтной мастерской и согласился привезти посудомоечную машину в ремонт. Модель даже не спросили, просто все согласились. Принес, уехал, сказал, что когда починят, перезвонят. После обеда мне позвонили, машину починили, и я могу приехать за ней. После работы я так и поступил. Фактически, однажды у нас была только одна посудомоечная машина.Очень быстро все сделано.

Георгий 19.04.17

Не так давно обратился в ремонт, когда жена сказала, что перестала работать сушилка (которая у нас марка Miele), а точнее барабан перестал крутиться в машине при попытке ее завести. Делать нечего, стал звать мастера.
Приехал молодой человек, посмотрел и сказал, что сломалась плата блока управления, объявив цену ремонта. Я ожидал гораздо большей суммы, поэтому был рад, когда услышал число в 2 раза меньше, чем ожидал.
В целом доволен, ремонт занял больше часа, при этом мастер был очень аккуратен в своей работе, успел наблюдать за процессом, а в процессе общения на отвлеченные темы потихоньку проводил ремонт.

Татьяна 15.08.17

В интернете нашел ваш сайт. Стиральная машина Bosch. После заявления на следующий день приехал Баранов Александр Леонидович. Мастер высшей категории. Профессионально, методично, со знанием дела устранил все неисправности: замену ТЭНа, течь, выбивание УЗО.Проблем много. Однажды уже обратилась в ремонтную мастерскую. Мастер слил руку на течь: «бывает» заменил ТЭН, хотя он был в рабочем состоянии. Короче есть с чем сравнивать. Поэтому дотошность и внимание Александра Леонидовича удивили и обрадовали! БЛАГОДАРИТЬ! Согласен с Ириной: ТЫ ЛУЧШИЙ !!!

Имеется замок, запирающий люк. В профессиональном плане эта деталь называется «запирающим устройством люка». И уже из названия можно понять, что его основная функция – блокировать дверцу при стирке вещей.Почему нужно перекрывать люк? Чтобы вещи не выпадали из машины и вода при стирке или отжиме не выливалась на пол.

Простое устройство, которое не играет важной роли в работе станка. Но если замок люка неисправен, стиральная машина просто не запустит процесс. Поэтому незначительная поломка небольшой детали вызовет серьезные затруднения. Ремонт замка стиральной машины нужно будет провести чем раньше, тем лучше.

Как замок?

Чтобы лучше понять, какие ситуации могут возникнуть при ремонте замка стиральной машины, и как лучше отремонтировать деталь, нужно разобраться, как работает механизм.

Есть два типа запорных устройств люков:

Термозамок – работает биметаллической пластиной;
Электрозамок – работает от электромагнитов.

Большинство стиралоков, таких как Candy, Atlant и почти все новые модели оснащены термозамком.Такие замки более надежны и очень редко ломаются. К тому же устроены они крайне незамысловато. Составными частями запорного устройства являются биметаллическая пластина и термоэлемент. При подаче на него напряжения он нагревается и, соответственно, нагревает пластину. Она испытывает воздействие температуры, наклоняется, срабатывает защелку и запирает крышку барабана.

При этом в цепи происходит замыкание, и модуль управления получает информацию о том, что дверь заперта. Только после этого машина может начать стирать в установленном режиме.

Но если с замком что-то не так, система предупредит вас об ошибке.

Признаки поломки

В целом, может быть два признака неисправности устройства блокировки:

Крышка барабана не забита, стирка не начинается;
Дверца барабана не открывается после стирки.

В первом случае проблема может быть вовсе не в замке. Иногда может случиться так, что человек просто неправильно закрыл дверь.Следовательно . Но если вы проверили дверцу, вы убедились, что все закрыто как надо, а стирка все равно не начинается, это тревожный знак.

Второй случай может доставить гораздо больше проблем. Намного хуже, если машина не возвращает вещи, чем если она отказывается их стирать. Но может быть простое решение.

Не забывайте, что дверца барабана после стирки открывается не сразу. Поэтому не тяните за ручку через секунду после остановки стиральной машины.На многих моделях есть лампочка, которая мигает через короткое время после стирки, указывая на то, что крышку можно открыть.

После мытья крышка может оставаться закрытой в течение нескольких минут. Причина этого в том, что пластина и термоэлемент не сразу остывают после прекращения подачи напряжения. Крышка открывается, когда пластина остынет и вернется в исходное положение.

Но если прошло достаточно времени, а машина все равно не открывается, значит, замок стиральной машины требует ремонта.

Основные причины выхода из строя УБЛ

Почему вообще может выйти из строя устройство блокировки люка? Электрозамки менее надежны и причинами их поломок часто бывают скачки напряжения, сбои в сети, попадание воды и прочие бытовые мелочи.

Термозамок менее уязвим для такого рода неприятностей. Даже когда вы выключаете свет в процессе стирки, прибор реагирует на это довольно спокойно. Пластина остынет, и через некоторое время замок можно будет открыть. С электрозамком придется подождать, пока в квартире снова не появится электричество.

Основные причины отказа устройства блокировки:

Самая частая причина надежных замков, что удивительно, – это время. Биметаллическая пластина рассчитана на определенное количество нагрева и охлаждения и по прошествии определенного времени просто изнашивается;
Падения напряжения отрицательно сказываются на термозамках. Из-за них компоненты разрушаются.

Что делать, если сломался замок автомобиля?

Отремонтировать изношенные детали нельзя ни при каких обстоятельствах.Замок придется менять на новый. А если дверь просто перестала закрываться, сделать это довольно просто, так как опытному специалисту добраться до самого замка не составит труда. Мастера нашей компании справляются с этой задачей с помощью одной отвертки. Но, несмотря на простоту ремонта, мы не рекомендуем вам менять устройство самостоятельно, если у вас нет опыта работы с электроникой. Для правильной работы устройства нужно знать, как и как подключать контакты.

Намного более сложная ситуация, если дверца люка не открывается. Затем вам нужно снять с машины всю переднюю панель. И здесь не обойтись без опытного мастера, умеющего обращаться со стиральными машинами. И таких людей вы можете найти, обратившись в нашу компанию.

Прямо у вас дома поменяют аппарат на новый, качественный запчасть от проверенного производителя. И ваша машина прослужит вам долго.

В контакте с
Facebook
Твиттер
Google+

Замок стиральной машины не самое сложное устройство, но без него стирка невозможна.Необходимо запереть и опломбировать люк при стирке, ополаскивании и

Это устройство предназначено для обеспечения надежной автоматической защиты от непроизвольного открытия дверцы и остановки программы стирки в случае поломки. Устройство блокировки дверцы при неисправности и износе требует ремонта или замены замка на стиральной машине.

Как работает замок стиральной машины и как это работает

Прежде чем проверять работоспособность блокировщика, нужно хотя бы знать, из чего он состоит и как работает.

Стиральные машины разных производителей оснащены запорными устройствами одного из двух типов для запирания люка:

защелка;
термоэлемент;
биметаллическая пластина.

Замок люка стиральной машины скрыт в пластиковом кожухе, где в его нижней части имеется отверстие для крепления пружины, соединяющей систему с люком.

При получении команды от модуля управления оборудованием устройство, блокирующее люк стиральной машины, получает заряд тока на термоэлементе.Термопара мгновенно нагревается, что приводит к нагреву биметаллической пластины, которая от этого удлиняется и расширяется. В этом состоянии она нажимает на защелку и он тут же срабатывает, и замок стиральной машины закрывается. Пока тарелка не остынет, она будет заблокирована.

При отключении электричества термоэлемент не получает тепла и пластина остывает, что приводит к открытию двери. Если в модуле управления выходит из строя блокировочное устройство или симистор, отвечающий за его работу, а напряжение на замке постоянное, он не может открыться, пока автомат не будет обесточен.Если контакт ТЭНа сломан или пробит, то нагрева вообще не будет и тогда дверь не сможет закрываться.

Как проверить замок стиральной машины

Для определения исправности устройства блокировки стиральной машины понадобится тестер – мультиметр. Перед проверкой блокировка снимается. Для этого:

открыть в стиральной машине Люк;
обнаруживает проволочное кольцо;
снимите кольцо отверткой;
расположите так, чтобы можно было получить замок;
откручиваем болты, которые крепятся к замку, и вытаскиваем его.

Смотрите также: Как отрегулировать ножки на стиральной машине

После снятия внимательно изучается ее схема. Это делается для того, чтобы иметь представление о том, какой контакт за что отвечает.

Необходимо выяснить, где фаза, где нейтраль, а где общий контакт.

Устройство с биметаллической пластиной, выпускаемое многими фирмами, и расположение контактов часто отличается. Без изучения схемы использовать мультиметр и проверить его очень сложно.

UBL-домен Usp14 и других белков стимулирует протеасомную активность и деградацию белка в клетках.

Значение

26S протеасомы катализируют большую часть деградации белка в эукариотических клетках, и их активность точно регулируется. После связывания убиквитинированных белков протеасомы активируются. Эта активация запускается связыванием убиквитиновой цепи с деубиквитинирующим ферментом, ассоциированным с протеасомами, Usp14 / Ubp6. Изучая этот механизм активации, мы обнаружили, что убиквитиноподобный (UBL) домен Usp14 сам по себе стимулирует множественные протеасомные активности и, таким образом, по-видимому, опосредует активацию убиквитинированными белками.Многие другие белки содержат домены UBL, и мы показали, что домены UBL других белков также стимулируют способность протеасом к деградации. Таким образом, активация протеасом может представлять новую роль для UBL-содержащих белков. Кроме того, сверхэкспрессия домена UBL в клетках увеличивает общий распад белка, что может иметь терапевтическое применение.

Abstract

Самая известная функция убиквитин-подобных (UBL) доменов в белках – обеспечение их связывания с протеасомами 26S.Деубиквитинирующий фермент, связанный с протеасомами, Usp14 / UBP6 содержит N-концевой домен UBL и является важным регулятором протеасомной активности. Usp14 сам по себе подавляет множественные протеасомные активности, но после связывания убиквитиновой цепи Usp14 стимулирует эти активности и способствует деградации конъюгата убиквитина. Здесь мы демонстрируем, что UBL-домен Usp14 имитирует активацию протеасом цепями убиквитина. Добавление этого домена UBL к очищенным протеасомам 26S стимулировало те же активности, ингибируемые Usp14: проникновение и гидролиз пептида, зависимый от белка гидролиз АТФ, деубиквитинирование с помощью Rpn11 и деградацию убиквитинированных и неубиквитинированных белков.Таким образом, связывание UBL Usp14 (очевидно, с сайтом T2 Rpn1), по-видимому, опосредует активацию протеасом убиквитинированными субстратами. Однако стимуляция этих различных активностей была сильнее в протеасомах, лишенных Usp14, чем в частицах дикого типа, и, таким образом, это общий ответ, который не включает некоторое замещение Usp14. Кроме того, домены UBL из hHR23 и hPLIC1 / UBQLN1 также стимулировали гидролиз пептидов, а экспрессия домена UBL hHR23A в клетках HeLa стимулировала общую деградацию белка.Следовательно, многие UBL-содержащие белки, которые связываются с протеасомами, могут также аллостерически усиливать его протеолитическую активность.

В клетках млекопитающих 26S протеасомы являются основным участком деградации белка (1). Большинство белков, перевариваемых протеасомами, сначала маркируются убиквитиновыми (Ub) цепями. Протеасома 26S состоит из протеолитической коровой частицы 20S и одной или двух регуляторных частиц 19S (PA700) (2). Цилиндрическая 20S протеасома представляет собой полую частицу с четырьмя кольцами, которая содержит в своих двух центральных β-кольцах шесть протеолитических сайтов, два из которых являются химотрипсиноподобными, два трипсиноподобных и два каспазоподобных по специфичности (3).Его внешние α-кольца содержат центральный закрытый канал для входа в подложку (4). Регуляторная частица 19S выполняет несколько ферментативных и неферментативных функций, необходимых для деградации убиквитинированных белков, включая связывание и разборку Ub-цепи, гидролиз АТФ и разворачивание белка-субстрата (2). В основании регуляторной частицы 19S находится кольцо из шести гомологичных ААА-АТФаз (5, 6). АТФазы связываются, разворачиваются и перемещают полипептид через свой центральный канал, а затем через закрытый входной канал в частицу 20S (7, 8).Многие этапы этого процесса деградации связаны с упорядоченными циклами связывания и гидролиза АТФ (2).

Три различных деубиквитинирующих фермента (DUB) связаны с 19S регуляторной частицей высших эукариот: два из них представляют собой цистеиновые протеазы, Usp14 / Ubp6 (9) и Uch47 / UchL5 (10, 11), а третий, Rpn11 / PSMD14, представляет собой металлопротеиназа (12, 13). Usp14 содержит N-концевой домен UBL и C-концевой каталитический домен USP (убиквитин-специфическая протеаза) (14). Деубиквитинирующая активность Usp14 резко стимулируется при его ассоциации с частицей 19S, для которой требуется домен UBL (15, 16).Rpn11 удаляет единый блок Ub-цепи АТФ-зависимым образом и необходим для деградации убиквитинированных белков (17). Таким образом, Rpn11 облегчает транслокацию полипептида через АТФазное кольцо в частицу 20S (12, 18), тогда как другие DUB, как полагают, ограничивают время связывания субстратов с протеасомой перед процессингом (2, 8).

Эффективная деградация Ub-конъюгата требует тесно интегрированной серии шагов (2, 19), порядок и координация которых все еще плохо изучены.После того, как Ub-цепь обратимо связывается с субъединицами рецептора, полипептид, если он обнажает слабо свернутый домен, становится прочно связанным с частицей посредством АТФ-зависимой реакции, которая приводит к деградации субстрата (20). Неожиданно связывание Ub-конъюгата с Usp14 или Uch47 активирует проникновение небольших пептидов через АТФазное кольцо и закрытый канал в 20S (21). Если убиквитинированный белок также содержит слабо свернутый домен, также активируется гидролиз АТФ (19).

Эта роль Usp14 в активации протеасом конъюгатами Ub была неожиданной, поскольку ранее было показано, что Usp14 / Ubp6 ингибирует деградацию убиквитинированных белков как за счет своей активности DUB, так и за счет аллостерического механизма (22, 23). Поскольку быстрое обрезание Ub-цепей с помощью Usp14 может привести к высвобождению субстрата без его деградации, Finley, King и соавторы (16, 24) показали, что ингибиторы каталитической активности Usp14 (IU1) могут усиливать протеасомную деградацию некоторых белков, замедляя субстрат деубиквитинирование.Недавно мы продемонстрировали, что в отсутствие убиквитинированных субстратов Usp14 аллостерически ингибирует множественные протеасомные активности, включая проникновение и гидролиз пептидов, гидролиз АТФ и, что неожиданно, деубиквитинирование с помощью Rpn11 (25). Эти ингибирующие действия Usp14 в отсутствие субстрата могут помочь снизить неэффективное потребление АТФ и деградацию неубиквитинированных белков (25).

Недавние криоэлектронные микроскопические исследования показали, что связывание Usp14 или его дрожжевого гомолога Ubp6 с комплексом 19S вызывает заметные изменения в структуре 19S (26⇓-28).После связывания ингибитора переходного состояния Ub-альдегид с активным сайтом Usp14 / Ubp6 его C-концевой домен USP перемещается рядом с кольцом АТФазы и Rpn11. Однако без связывания Ub-альдегида или Ub-цепи этот домен более динамичен и не может взаимодействовать с АТФазами (26, 27). Предположительно, эти конформационные изменения обеспечивают механистическое объяснение противоположных аллостерических действий Usp14, как его базального ингибирования протеасомы, так и его активации при связывании субстрата (19, 21, 25).

Хотя было предложено несколько ролей для доменов UBL (29⇓ – 31), присутствующих во многих клеточных белках, наиболее документированной функцией домена UBL является обеспечение сродства к протеасоме 26S, где домен UBL может связываться с Субъединицы рецептора Ub Rpn10, Rpn13 и Rpn1 (32–34). Среди множества функций, выполняемых UBL-содержащими белками, является действие факторов челночного перемещения (то есть белков UBL-UBA), которые переносят Ub-конъюгированные белки в протеасому в виде Ub-лигаз (например, Паркин) или протеасомных DUB (35%). –37).Из-за важности домена UBL Usp14 в его ассоциации с протеасомой и в результирующей стимуляции деубиквитинирующей активности Usp14, мы предположили, что его домен UBL также может быть важным в опосредовании активации протеасомы при связывании субстрата с Usp14. Поэтому мы исследовали, активирует ли UBL-домен Usp14 при связывании с протеасомой 26S сам по себе эти различные протеасомные активности. Мы демонстрируем здесь, что UBL-домен Usp14 аллостерически активирует те же протеасомные функции, которые активируются при связывании Ub-цепи с протеасомой, и, таким образом, усиливает деградацию белка под действием UPS.Эти данные предполагают, что домен UBL Usp14 опосредует активацию конъюгатами Ub. Однако, поскольку еще более сильная активация была обнаружена у частиц, лишенных Usp14, и поскольку было показано, что домены UBL других белков также стимулируют активность 26S, эти результаты также убедительно указывают на новую общую роль доменов UBL: они не только способствуют связыванию. белков в протеасому, но также активирует протеасомы для деградации белков.

Результаты

UBL-домен Usp14 усиливает гидролиз пептидов 26S протеасомами.

Чтобы проанализировать роль доменов UBL и USP Usp14 в регуляции функции протеасом, мы проверили, может ли связывание одного домена UBL влиять на его несколько ферментативных активностей. Когда очищенный GST-меченный домен UBL из Usp14 (остатки от 2 до 79) инкубировали в присутствии АТФ с протеасомами 26S, очищенными из эмбриональных фибробластов мыши (MEF), лишенных Usp14 (Usp14KO), он стимулировал химотрипсиноподобную активность протеасом в аналогично убиквитиновой цепи (гексаубиквитину) в присутствии Usp14.Гекса-Ub вызывал большую стимуляцию ферментативно неактивным мутантом C114A Usp14, чем ферментом WT. Напротив, добавление либо WT Usp14, либо неактивного мутанта C114A без субстрата ингибировало активность 26S-пептидазы, как сообщалось ранее (25). Таким образом, эти регуляторные эффекты не связаны с активностью DUB Usp14. В отличие от домена UBL, гекса-Ub тогда оказывал лишь незначительное влияние в отсутствие Usp14, и этот эффект, вероятно, происходил за счет его связывания с Uch47 (19) (рис. 1 A ).

Рис. 1.

Связываясь с протеасомами 26S, UBL-домен Usp14 стимулирует расщепление пептида всеми тремя пептидазными сайтами, особенно в протеасомах, лишенных Usp14. Активность WT и Usp14KO 26S анализировали путем измерения расщепления флуорогенных субстратов пептид-amc (10 мкМ) в присутствии АТФ или ATPγS (100 мкМ). Контроль (100%) указывает на активность пептидазы каждого типа протеасомы (1 нМ) без добавленных белков. ( A ) Добавление GST-UBL из Usp14 (200 нМ) само по себе стимулирует химотрипсиноподобную активность 26S, аналогичную добавлению Usp14 (1 мкМ) плюс линейной цепи гекса-Ub (200 нМ).Добавление WT Usp14 или ферментативно неактивного мутанта C114A само по себе подавляло, но вместе с гекса-Ub стимулировало активность пептидазы, особенно с неактивным мутантом Usp14. LLVY-amc: Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-amc в качестве субстрата для химотрипсиноподобной активности. * P <0,05 и ** P <0,01 по тесту Стьюдента t . Данные – это средние значения ± стандартное отклонение; n = 4. ( B ) UBL Usp14 стимулирует химотрипсиноподобную активность как WT, так и Usp14KO 26S.UBL, по-видимому, связывается с одинаковым сродством (~ 100 нМ) к обоим, но вызывает гораздо большую стимуляцию Usp14KO 26S. Данные – это средние значения ± стандартное отклонение; n = 5. ( C ) Все три пептидазные активности больше стимулируются UBL (200 нМ) в Usp14KO 26S, чем в WT с присутствующим АТФ. LRR-amc: Boc-Leu-Arg-Arg-amc в качестве субстрата для трипсиноподобной активности; nLPnLD-amc: Ac-Nle-Pro-Nle-Asp-amc в качестве субстрата для активности, подобной каспазе. * P <0,05 и ** P <0.01 по тесту Стьюдента t . Данные – это средние значения ± стандартное отклонение; n = 6. ( D ) В присутствии ATPγS домен UBL дополнительно усиливал (в пять-восемь раз) три пептидазные активности Usp14KO 26S. Гидролиз пептидов WT 26S также стимулировался, но в меньшей степени. * P <0,05 и ** P <0,01 по тесту Стьюдента t . Данные – это средние значения ± стандартное отклонение; n = 6. ( E ) Полноразмерный Usp14 ингибирует активацию гидролиза пептидов посредством UBL.Добавление увеличивающихся концентраций WT Usp14 или неактивного мутанта C114A снижало химотрипсиноподобную активность протеасом 26S в присутствии UBL и ATPγS. Протеасомы Usp14KO (1 нМ) предварительно инкубировали с UBL (100 нМ), а затем к смеси добавляли различные концентрации Usp14. Данные – это средние значения ± стандартное отклонение; n = 4. ( F ) Полноразмерный Usp14 конкурирует с GST-UBL за связывание с протеасомой 26S. Usp14KO 26S, связанный с UBL на смоле, элюировали путем добавления увеличивающихся концентраций Usp14 (55).Количество элюированных протеасом определяли с помощью гидролиза LLVY-amc (20). Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение; n = 6. ( G ) Домен UBL из Usp14 стимулирует химотрипсиноподобную активность дрожжевого мутанта WT и T1 (ARR) 26S, но не мутанта T2 (AKAA) (32). Активность связанных со смолой дрожжей 26S измеряли после добавления UBL, полученного из Usp14 млекопитающих (200 нМ). Данные – это средние значения ± стандартное отклонение; n = 3.

Эта стимуляция доменом UBL возрастала с более высокой концентрацией и постоянно была примерно в два раза больше в протеасомах Usp14KO, чем в WT 26S (рис.1 В ). Большее усиление активности 26S в отсутствие Usp14 контрастирует с активацией конъюгатами Ub, которые в дрожжах 26S требуют Ubp6 (21), а в протеасомах млекопитающих необходимы Usp14 или Uch47 (Fig. 1 A ) (19). Сам по себе очищенный домен UBL не обладал пептидазной активностью ( SI, приложение , фиг. S1, A ) и не стимулировал гидролиз пептидов протеасомами 20S без присутствующей регуляторной частицы 19S ( SI, приложение , фиг.S1 B ). Эти наблюдения не связаны со связью с GST, димерным белком, потому что аналогичная стимуляция химотрипсиноподобной активности протеасом наблюдалась при добавлении мономерного His ₆-помеченного домена UBL ( SI Приложение , рис. S1 C ). Кроме того, UBL увеличивал трипсиноподобную и особенно каспазоподобную активности 26S, и эти эффекты также были постоянно больше в Usp14KO 26S (рис. 1 C и D ).Этот усиленный гидролиз активными центрами всех трех типов, скорее всего, связан с большим проникновением субстрата через кольцо АТФазы и закрытым входным каналом в частицу 20S (т.е. «открытие ворот»), а не за счет аллостерической активации отдельных каталитических центров ( 4, 38).

Это одновременное значительное усиление всех трех пептидазных активностей напоминает стимулирующие эффекты PA28αβ и связывания нуклеотидов, особенно ATPγS, которые усиливают проникновение пептида в частицу 20S (39).Однако домен UBL еще больше стимулировал гидролиз пептидов в присутствии ATPγS (рис. 1 D ), который, как предполагалось, вызывает максимальное открытие ворот и скорость гидролиза пептидов ( SI Приложение , рис. S1 D ). ). Напротив, добавление полноразмерного Usp14 к 26S протеасомам снижает стимуляцию гидролиза пептидов ATPγS (25). Домен UBL в присутствии ATPγS неожиданно вызвал гораздо большую стимуляцию Usp14-дефицитного 26S, чем WT 26S (рис.1 D ). Таким образом, ATPγS и UBL-домен Usp14, по-видимому, синергетически стимулируют пептидный гидролиз протеасомами, что означает, что для стимуляции UBL-доменом требуется конформация частицы 19S, индуцированная ATPγS (40).

UBL-домен Usp14 связывается с сайтом T2 Rpn1 для активации 26S.

Поскольку Usp14 UBL не влияет на активность пептидазы ядер 20S ( SI Приложение , рис. S1 B ), его активирующий механизм должен отличаться от PA28 или C-концевого HbYX АТФазы. мотив, который связывается с α-кольцом 20S (4, 41).Более вероятно, что UBL стимулирует путем связывания с тем же сайтом на Rpn1, что и полноразмерный Usp14 (32, 42), и, таким образом, он не влияет напрямую на механизм стробирования 20S. Соответственно, стимуляция гидролиза пептидов была намного меньше в частицах WT, чем в 26S без Usp14, вероятно, потому, что в частице WT Usp14 и свободный UBL связываются с одним и тем же сайтом, что снижает стимуляцию доменом UBL (рис. 1 C и D ). Соответственно, модификация Usp14 ковалентным ингибитором Ub-винилсульфоном, который усиливает его ассоциацию с частицей 26S (27), частично подавляет стимуляцию химотрипсиноподобной активности добавленным UBL ( SI Приложение , рис.S2). Чтобы определить, связывается ли при активации гидролиза пептидов UBL с тем же сайтом, который занят Usp14, мы проверили, конкурентно ли ингибирует добавление полноразмерного Usp14 стимуляцию открытия ворот с помощью UBL. Как и предполагалось, инкубация Usp14KO 26S с увеличивающимися количествами полноразмерного WT Usp14 или его мутанта активного сайта C114A вместе с доменом UBL снижала стимуляцию химотрипсиноподобной активности со стороны UBL (фиг. 1 E ). Кроме того, когда протеасомы Usp14KO были впервые связаны со смолой GST-UBL, они могли быть элюированы добавлением возрастающих количеств полноразмерного Usp14 WT или неактивного мутанта C114A (рис.1 Ф ). Таким образом, эта активация не связана с активностью DUB Usp14, которая находится в его домене USP. Выводы о том, что Usp14 конкурирует с GST-UBL за связывание с протеасомой и ингибирует стимулирующий эффект UBL, предполагают, что связывание Ub-цепи или Ub-альдегида с Usp14 аллостерически стимулирует проникновение пептида (21) через его домен UBL, в то время как его ингибирующий эффект Домен USP предотвращает эту стимуляцию со стороны UBL до тех пор, пока цепь Ub не свяжется с доменом USP.

Недавно было показано, что дрожжевой Rpn1 имеет два отдельных сайта связывания Ub, T1 и T2 (32).T1 является сайтом связывания Ub и UBL-домена Rad23, тогда как T2 является сайтом связывания UBL-домена Ubp6 (32) и, следовательно, предположительно опосредует эту активацию. Поэтому мы проверили, может ли Т1 или Т2 играть важную роль в активации гидролиза пептидов. После инкубации с протеасомами 26S, очищенными от мутаций, несущих дрожжи, которые инактивируют сайт T1 или T2 (32), UBL Usp14 стимулировал химотрипсиноподобную активность очищенных протеасом 26S как WT (SY1214), так и мутантного штамма T1 (SY1210). , rpn1-ARR), но не из T2-мутантного штамма (SY1724, rpn1-AKAA) (рис.1 G ). Хотя абсолютная стимуляция была намного меньше в дрожжевых частицах, чем у 26S млекопитающих, предположительно из-за того, что мы использовали домен UBL млекопитающих, эти результаты показывают, что для этой стимуляции UBL Usp14 требуется связывание с сайтом T2, но не с сайтом T1. .

UBL-домен Usp14 вместе с свободно свернутым белком усиливает гидролиз АТФ.

Общая особенность гексамерных ААА-АТФ-зависимых протеаз состоит в том, что их активность АТФазы стимулируется при связывании слабо свернутого белкового субстрата (43–45).Однако для стимуляции протеасомных АТФаз требуется одновременное связывание Ub-цепи с Usp14 (или с Uch47) и неструктурированной области полипептида с 19S-АТФазами, хотя Ub-цепь и полипептид не обязательно должны быть ковалентно связаны (19). Таким образом, как мы недавно показали (25), Usp14 подавляет протеасомный гидролиз АТФ, но при связывании цепи Ub с Usp14 АТФазы активируются, если также присутствует развернутый полипептид (2).

Таким образом, мы проверили, может ли домен UBL Usp14 также стимулировать АТФазную активность 26S, поскольку он стимулирует пептидазную активность.Хотя один только UBL не имел эффекта, UBL с β-казеином стимулировал гидролиз АТФ в протеасомах MEF (фиг. 2 A ) и действовал в той же степени, что и гексамерный Ub (фиг. 2 A ). Таким образом, стимуляция 19S-АТФаз с помощью UBL не требует связывания Ub-цепи, но все же требует связывания слабо свернутого белка, вероятно, с АТФазами (2). Таким образом, домен UBL сам по себе имитирует способность связанного с субстратом Usp14 активировать как пептид, так и гидролиз АТФ. Эти находки также предполагают, что домен UBL опосредует эту активацию с помощью субстрата и, следовательно, что каталитический домен Usp14 (USP), вероятно, ответственен за базальное ингибирование этих активностей, пока он не свяжет цепь Ub и не вступит во взаимодействие с АТФазами (26⇓-28).Напротив, в 26S, лишенном Usp14, связывание одного казеина полностью стимулировало гидролиз АТФ (25), и добавление UBL не имело дальнейшего эффекта (фиг. 2 A , справа ). Интересно, что аналогичная стимуляция АТФаз неубиквитинированным полипептидом наблюдалась в реконструированных протеасомах дрожжей (27). Такое поведение явно не наблюдается в наших препаратах из клеток млекопитающих WT (2, 19), где присутствие Usp14 делает активацию зависимой от убиквитинированного белка или белка плюс убиквитиновая цепь.

Рис. 2.

UBL усиливает гидролиз АТФ протеасомами WT при условии, что также присутствует неструктурированный белок (казеин), и стимулирует деградацию неубиквитинированных белков. ( A ) После связывания казеина (1 мкМ) и цепи гекса-Ub (1 мкМ), которые вместе имитируют связывание конъюгатов Ub (20), гидролиз АТФ с помощью WT и Usp14KO 26S (20 нМ) увеличивается примерно на два – втрое. UBL (500 нМ) плюс казеин также увеличивал гидролиз АТФ в обоих случаях в той же степени, что и гекса-Ub плюс казеин.Однако один только UBL или гекса-Ub не увеличивал гидролиз АТФ ни одним из типов протеасом. Однако в Usp14KO 26S в отсутствие цепи UBL или гекса-Ub казеин сам по себе может усиливать гидролиз АТФ. Гидролиз АТФ измеряли с помощью анализа малахитового зеленого (62). 6Ub: линейный гекса-Ub. * P <0,05 и ** P <0,01 по тесту Стьюдента t . Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение; n = 3. ( B ) Домен UBL, как и цепь Ub, стимулирует деградацию внутренне неструктурированного белка (Sic1) протеасомами 26S.Влияние UBL (500 нМ) или линейной цепи гекса-Ub (1 мкМ) на деградацию PY-Sic1 (100 нМ) под действием WT 26S (2 нМ) оценивали с помощью вестерн-блоттинга. Протеасомы инкубировали с цепью UBL или Ub при комнатной температуре в течение 15 мин до начала реакции. ( B , Left ) В указанные моменты был измерен оставшийся Sic1. ИБ, иммуноблоттинг. ( B , Right ) Деградацию Sic1 измеряли с помощью программного обеспечения ImageJ и наносили на график. Аналогичные данные были получены в трех независимых экспериментах.

UBL-домен Usp14 стимулирует деградацию неубиквитинированного развернутого белка.

Поскольку UBL-домен Usp14 стимулирует открытие ворот и гидролиз АТФ, оба из которых важны для эффективного протеолиза (2), UBL может также стимулировать протеасомную деградацию некоторых неубиквитинированных белков. Фактически, добавление либо гекса-Ub цепей, либо только UBL к WT 26S резко (до 10 раз) стимулировало распад внутренне неупорядоченного белка Sic1 (46) (рис.2 В ). Однако в протеасомах, лишенных Usp14 ( SI Приложение , рис. S3 A ), добавление UBL не стимулировало дальнейшей деградации Sic1, вероятно потому, что этот процесс уже активирован в этих частицах (25), как и скорость гидролиза АТФ (25), которая определяет скорость деградации белка (47). Другой примечательной особенностью протеасом с дефицитом Usp14 является то, что для активации гидролиза АТФ требуется только присутствие слабо свернутого белка и также не требуется Ub-цепь (рис.2 A , Правый ). Эти данные предоставляют дополнительные доказательства того, что Usp14 ингибирует Ub-независимый протеолиз до тех пор, пока связывание Ub-цепи не отменяет это ингибирование, которое, по-видимому, происходит через домен UBL Usp14.

UBL-домен Usp14 стимулирует деубиквитинирование с помощью Rpn11.

После связывания цепи Ub, домен USP Usp14 приближается к Rpn11 и стерически препятствует Rpn11 (27), чья активность и доступность для субстратов зависят от гидролиза АТФ (18). Удивительно, но даже при том, что протеасомы Usp14KO лишены важного DUB, они обладают гораздо большей способностью разбирать цепи Ub, чем WT, из-за стимуляции активности Rpn11 (25).Чтобы узнать, может ли домен UBL также влиять на активность Rpn11, мы изучили влияние GST-UBL на гидролиз цепей тетра-Ub. UBL стимулировал расщепление Ub цепей K48 и K63 протеасомами WT и Usp14KO 26S (рис. 3 A ). UBL даже увеличивал способность протеасом гидролизовать тетра-Ub (рис. 3 A ) в присутствии ATPγS, который сам по себе усиливает активность Rpn11 (25). Соответственно, эта стимуляция распада тетра-Ub посредством UBL блокировалась ингибитором Rpn11, или -фенантролином, но не ингибитором цистеина DUBS, Ub-VS (рис.3 В ). Кроме того, протеасомы Usp14KO разбирали другой субстрат DUB, K63 FRET di-Ub, быстрее при добавлении UBL ( SI Приложение , фиг. S3 B ). Таким образом, UBL-домен Usp14 аллостерически стимулирует каталитическую активность Rpn11, тогда как его USP-домен после связывания Ub-цепи ограничивает Rpn11 для обработки только одной Ub-цепью за раз, предотвращая взаимодействие Rpn11 с новым субстратом (27). Поскольку Rpn11-опосредованное высвобождение Ub-цепи важно для транслокации субстрата в 20S (18), эта активация Rpn11, вероятно, будет иметь основной эффект в усилении деградации убиквитинированных белков.

Рис. 3.

домен UBL стимулирует как разборку Ub-цепи с помощью Rpn11, так и деградацию Ub ₅ -DHFR. ( A ) UBL увеличивает разрыв цепей тетра-Ub K48 и K63 (368 нМ) под действием MEF 26S в присутствии АТФ или ATPγS. Протеасомы 26S (5 нМ) инкубировали с UBL, как указано, при комнатной температуре в течение 15 минут перед реакцией, которую проводили при 37 ° C в течение 20 минут. Образование три-, ди- и моно-Ubs анализировали с помощью вестерн-блоттинга, как сообщалось ранее (25).Аналогичные данные были получены в трех независимых экспериментах. ( B ) UBL стимулирует расщепление тетра-Ub K48 под действием WT 26S при наличии АТФ, и эта стимуляция должна включать Rpn11, потому что он ингибируется o -фенантролином (OPT; 1 мМ), но не Ub-винилсульфоном. (Ub-VS; 200 нМ). Аналогичные данные были получены в двух независимых экспериментах. ( C ) 26S протеасомы разбирают цепь Ub на убиквитинированном DHFR с образованием мономерных Ubs. При ингибировании Usp14 и Uch47 Ub-альдегидом (300 нМ) цепи тетра-Ub разбираются с помощью Rpn11, и ингибитор Rpn11 OPT (1 мМ) полностью блокирует деубиквитинирование DHFR.Расщепление Ub ₅ -DHFR (100 нМ) 26S протеасомами (2 нМ) за 20 мин анализировали с помощью вестерн-блоттинга. Звездочка указывает на неспецифический сигнал Ub-альдегида. ( D ) Иллюстрация того, почему разложение Ub ₅ -DHFR зависит от Rpn11. Ни Usp14, ни Uch47 не могут катализировать разборку цепи тетра-Ub. Только после того, как Rpn11 отщепляет тетраубиквитиновые цепи целиком от белка, эти другие деубиквитинирующие ферменты могут разобрать цепь. Следовательно, деградация Ub ₅ -DHFR зависит от активности Rpn11.( E ) Хотя WT 26S быстро разлагает Ub ₅ -DHFR, добавление UBL (500 нМ) еще больше усиливает этот процесс. Однако ингибирование активности Rpn11 с помощью OPT (1 мМ) полностью блокирует деградацию. Аналогичные данные были получены в трех независимых экспериментах.

UBL-домен Usp14 стимулирует Ub-зависимую деградацию.

Поскольку домен UBL Usp14 стимулирует несколько этапов, критических для протеасомной деградации убиквитинированных белков (например, Rpn11, открытие ворот и активируемый белками гидролиз АТФ), мы проверили, усиливает ли домен UBL также деградацию конъюгата Ub _5. -DHFR (рис.3 C ), в котором N-концевой слитый Ub дигидрофолатредуктазы (DHFR) конъюгирован с K48-связанной тетра-Ub цепью (48). 26S протеасомы переваривают этот убиквитинированный белок и разбирают его Ub-цепь на мономерные Ubs (рис. 3 C , дорожка 3). Однако при наличии Ub-альдегида для ингибирования Usp14 и Uch47 образовывались несвязанные тетра-Ub цепи (фиг. 3 C , дорожка 4). Поскольку Ub-цепь не была переварена, когда присутствовал o- фенантролин (фиг. 3 C , дорожки 5 и 6), Usp14 и Uch47 неожиданно неспособны деубиквитинировать этот субстрат до тех пор, пока Rpn11 сначала не отщепит тетра-Ub от DHFR [возможно, из-за предпочтения Usp14 многократно убиквитинированных белков (24)] (проиллюстрировано на рис.3 D ). Таким образом, деубиквитинирование Ub ₅ -DHFR требует активности Rpn11, как и деградация DHFR (фиг. 3 E , дорожка 4). Даже несмотря на то, что WT 26S гидролизовал Ub ₅ -DHFR быстро, как и предсказывалось, добавление домена UBL дополнительно усиливало его деградацию (фиг. 3 E ).

UBL-домены других белков UBL-UBA также могут стимулировать активность 26S-пептидазы.

Подобно Usp14 / Ubp6, множество других белков также содержат домен UBL, например, факторы челночного перемещения hHR23A и B, которые связываются с конъюгатами Ub через их домены UBA, а также с протеасомами через их домены UBL ( SI Приложение , стр. Инжир.S4). Чтобы определить, могут ли UBL-домены этих других белков также стимулировать протеасомную активность, мы проанализировали гидролиз пептидов протеасомами Usp14KO 26S с или без GST-UBL hHR23B и hPLIC1 / UBQLN1 (фиг. 4 A ). Подобно UBL Usp14, UBL hHR23B усиливал все три пептидазные активности Usp14KO 26S в 3-5 раз. UBL hPLIC1 также увеличивал эту активность, но в гораздо меньшей степени (в 1,5–2 раза), чем UBL hHR23B. Филогенетический анализ доменов UBL показал, что первичные последовательности UBL из hHR23A и B и их дрожжевого гомолога Rad23 эволюционно близки к последовательностям Usp14 и Ubp6 ( SI Приложение , рис.S4). Напротив, UBL hPLIC1 более тесно связан с Ub, который не оказывает стимулирующего эффекта (21). Эти находки убедительно свидетельствуют о том, что активация протеасомы является общим свойством доменов UBL, обнаруженных во многих белках, которые связываются с 26S.

Рис. 4.

доменов UBL других белков UBL-UBA, hHR23 и hPLIC1, также стимулируют гидролиз пептидов протеасомами 26S, а экспрессия EGFP-UBL увеличивает деградацию долгоживущих белков в клетках HeLa. ( A ) С ATPγS (100 мкМ) и Usp14KO 26S (1 нМ) домен UBL (500 нМ) hHR23B стимулирует три пептидазные активности протеасом в 3-5 раз, тогда как домен UBL hPLIC1 стимулирует их в два или менее раза. .Пептидазную активность измеряли, как показано на рис. 1. * P <0,05 и ** P <0,01 с помощью теста Стьюдента t . Данные – это средние значения ± стандартное отклонение; n = 6. ( B ) EGFP и EGFP-UBL, полученные из hHR23A, экспрессировались в клетках HeLa (48 ч после трансфекции). ( C ) Клетки HeLa, экспрессирующие EGFP-UBL, разлагают долгоживущие белки быстрее, чем контрольные клетки. Белки метили [³ H] фенилаланином (5 мкКи / мл) в течение 24 часов. После 1 часа в среде погони (DMEM, содержащей 2 мг / мл нерадиоактивного фенилаланина), чтобы позволить короткоживущим белкам разлагаться, распад клеточных белков измеряли в свежей среде погони в течение до 3 часов.Данные – это средние значения ± стандартное отклонение; n = 3. ( D ) Содержание конъюгатов убиквитина в лизатах клеток HeLa было ниже после экспрессии EGFP-UBL, чем после EGFP. Через 48 часов после трансфекции равные количества белков (2 мкг) в лизатах подвергали электрофорезу и затем вестерн-блоттингу с использованием антител против Ub. Аналогичные результаты были получены в двух независимых экспериментах. ( E ) Краткое изложение аллостерической регуляции Usp14 протеасомной деградации убиквитинированных белков.Без связывания с Ub-конъюгатом Usp14 (через свой домен USP) ингибирует гидролиз АТФ, проникновение субстрата в 20S и деубиквитинирование с помощью Rpn11 (25). Однако при связывании цепей Ub Usp14 претерпевает основные структурные переходы (2), а его домен UBL активирует проникновение пептида в 20S, Rpn11 и гидролиз АТФ, если также связывается развернутый белок. Эти действия способствуют эффективной деградации убиквитинированных субстратов. Это активированное состояние должно поддерживаться до тех пор, пока Usp14 связывает цепь Ub.Эти процессы возвращаются в базальное состояние покоя, когда субстрат разрушается или деубиквитинируется и диссоциирует. Эти аллостерические действия не зависят от каталитической активности Usp14, который разрушает цепь Ub и, таким образом, ограничивает продолжительность активного состояния (25). Также показана предполагаемая активация протеасом UBL-содержащими белками, которая не должна зависеть от присутствия Usp14.

Экспрессия домена UBL в клетках HeLa стимулирует деградацию белка.

Поскольку домен UBL Usp14 может стимулировать несколько протеасомных активностей, которые необходимы для деградации Ub-конъюгата, и может способствовать гидролизу модельного убиквитинированного субстрата, мы проверили, может ли экспрессия домена UBL в культивируемых клетках увеличивать деградацию клеточных белков. в целом. Клетки HeLa трансфицировали pEGFP-UBL ^hHR23A (фиг.4 B ), и измеряли скорости деградации долгоживущих белков, которые составляют основную часть клеточных белков (фиг.4 С ). Чтобы проследить общую скорость протеолиза, мы первоначально пометили радиоактивным изотопом большинство клеточных белков путем воздействия [³ H] фенилаланина в течение 24 часов и проследили последующую деградацию радиоактивно меченных белков, измерив их превращение в растворимый в TCA материал в присутствии большого избытка. нерадиоактивного фенилаланина для предотвращения повторного включения радиоактивно меченных аминокислот (49). Клетки HeLa, экспрессирующие EGFP-UBL ^hHR23A, разрушали эндогенные белки на 60% быстрее, чем контрольные клетки, экспрессирующие EGFP (рис.4 С ). Скорее всего, этот усиленный протеолиз произошел как следствие повышенной активности протеасом, поскольку клетки, экспрессирующие EGFP-UBL, также имели гораздо более низкий уровень конъюгатов Ub (фиг. 4 D ). Это усиление общей деградации является неожиданным, поскольку можно ожидать, что сверхэкспрессия GST-UBL будет ингибировать многие важные UBL-зависимые взаимодействия в клетках, такие как связывание факторов челночного перемещения с протеасомой. Фактически, когда клетки HeLa трансфицировали большим количеством плазмиды pEGFP-UBL ^hHR23A для дальнейшего повышения уровней UBL, деградация долгоживущих клеточных белков подавлялась ( SI Приложение , рис.S5). Эти данные также указывают на то, что связывание UBL с протеасомами увеличивает их способность деградировать убиквитинированные субстраты in vivo, как это было замечено in vitro.

Обсуждение

UBL-домен Usp14 является аллостерическим стимулятором множественной протеасомной активности.

Несмотря на свою каталитическую и регуляторную важность, Usp14 обнаруживается только на небольшой фракции 26S протеасом in vivo, по-видимому, на тех частицах, которые активно участвуют в деградации убиквитинированных белков (50).Когда протеасомы связывают конъюгаты убиквитина, их ассоциация с Usp14 увеличивается, а гидролиз конъюгатов способствует диссоциации Usp14. Сообщалось, что связывание Usp14 с протеасомой резко стимулирует его каталитическую активность и требует наличия его домена UBL (16). Однако добавление домена UBL не вызывает диссоциации Usp14, совместно очищенного с протеасомой. Помогая удалить цепи Ub из белка, связанного с протеасомой, Usp14 / Ubp6 снижает бесполезную деградацию Ub протеасомой и способствует его рециклингу (51).Однако Usp14 может как аллостерически ингибировать, так и активировать несколько этапов деградации Ub-конъюгата (19, 21, 25). Мы показали здесь, что UBL-домен Usp14 сам по себе аллостерически стимулирует те же протеасомные активности, которые ингибируются Usp14 в отсутствие субстрата, и активируются, когда Ub-цепь связывается с Usp14: гидролиз пептидов, активность АТФазы, деградация неубиквитинированных и убиквитинированных белков, и активность Rpn11. Скоординированное увеличение активности трех пептидаз убедительно свидетельствует о том, что ассоциация домена UBL усиливает проникновение субстратных пептидов в камеру 20S (рис.1), а не вызывает аллостерическую стимуляцию шести сайтов пептидазы. Долгое время считалось, что ATPγS максимально открывает эти ворота (39). Однако домен UBL наиболее эффективно стимулирует гидролиз пептидов в присутствии ATPγS (фиг. 1 D ). Этот негидролизованный нуклеотид вызывает не только открытие ворот 20S, способствуя стыковке C-концевых мотивов HbYX АТФаз в межсубъединичные карманы во внешнем кольце 20S (4), но также запускает реорганизацию центральной поры в кольце АТФазы. что привело к его увеличению и соосности с затвором 20S (40).Подобная структурная реорганизация происходит при деградации убиквитинированного субстрата (7). Настоящие данные могут предполагать, что этот входной канал намного более доступен для транслокации субстрата, когда домен UBL и негидролизуемый нуклеотид присутствуют вместе, чем с любым из них по отдельности. Такое большое увеличение (в пять-восемь раз) канала входа в субстрат должно быть ясно видно с помощью криоЭМ.

Альтернативно, это большое увеличение активности пептидазы, когда UBL присутствует с ATPγS, может происходить за счет активации отдельной популяции протеасом, которые в противном случае не участвуют в деградации.Даже очищенные препараты протеасом гетерогенны [например, только небольшая фракция содержит Usp14 или Ube3C (50)]. Криоэлектронная микроскопия изолированных нейронов показала, что большинство клеточных 26S протеасом не находятся в конформации, связанной с субстратом (52). Возможно, домен UBL in vitro или при экспрессии in vivo индуцирует более активную конформацию в этой популяции.

Во время деградации убиквитинированного белка Rpn11 располагается над каналом АТФазы (7) и расщепляется в основном между проксимальным Ub и субстратом, высвобождая Ub-цепь (12).Таким образом, он облегчает транслокацию белкового субстрата через АТФазы в частицу 20S (18). Все эти действия Rpn11 стимулируются ATPγS (25), но даже в присутствии ATPγS домен UBL Usp14 дополнительно стимулирует способность Rpn11 разбирать цепи Ub. Эта стимуляция наблюдалась в отсутствие каталитического домена USP Usp14, который обычно стерически ингибирует Rpn11 (27) при связывании цепи Ub. Таким образом, эти наблюдения обнаруживают неожиданную координацию действий этих двух 26S DUB (рис.3 А ). Поскольку стимуляция гидролиза пептидов и разборки Ub-цепи посредством UBL дополняет эффекты ATPγS, домен UBL, вероятно, способствует этой активности по механизму, отличному от механизма связывания нуклеотидов. Однако криоЭМ-анализы до сих пор были сосредоточены на определении больших изменений, которые происходят аналогичным образом при связывании ATPγS, Ub-альдегида или Ub-конъюгированного субстрата и включают стерическое ингибирование Rpn11 с помощью Usp14 (7, 26, 27, 40), но они еще не проявили больших аддитивных эффектов, как здесь продемонстрировано биохимическими анализами (рис.1 D и 3 A ).

Активация протеасомы при связывании конъюгата Ub представляет собой многоступенчатый процесс (2), включающий последовательное распознавание убиквитиновой цепи, а затем белкового субстрата (2, 19). После начального связывания Ub-цепи с Usp14, 19S-АТФазы активируются и передают белок для деградации (2, 19). Было обнаружено, что при наличии казеина только UBL стимулирует гидролиз АТФ протеасомами (фиг. 2 A ). Таким образом, UBL обеспечивает очень похожий положительный аллостерический сигнал на АТФазы, как и Usp14 при связывании Ub-цепи или Ub-альдегида (21).

Подобно цепи Ub, UBL сам по себе не вызывает активацию АТФазы, для чего по-прежнему требуется присутствие полипептида со слабо свернутым доменом. Скорее всего, этот домен напрямую взаимодействует с протеасомными АТФазами ААА, чтобы активировать их, как это происходит с гомологичными АТФ-зависимыми протеазами бактерий и архей (2). Подобно этим АТФазам ААА, в протеасомах, лишенных Usp14 (в отличие от частиц дикого типа), казеин сам по себе может стимулировать гидролиз АТФ без присутствия Ub-цепи, Ub-альдегида или домена UBL.Интересно, что в дрожжевом 26S, восстановленном in vitro, неубиквитинированный белковый субстрат мог сам активировать гидролиз АТФ (27). Такое поведение не коррелирует и не может объяснить потребность как в убиквитиновой цепи, так и в слабо свернутом домене для деградации протеина протеасомами in vivo (53).

В совокупности настоящие наблюдения делают весьма вероятным, что активация протеасомы при связывании субстрата с Usp14 опосредуется его доменом UBL (фиг. 4 E ).Соответственно, добавление WT или каталитически неактивного Usp14 снижает способность экзогенного UBL стимулировать проникновение субстрата и связываться с 26S (фиг.1 E ), очевидно, конкурируя за тот же сайт связывания на Rpn1 (фиг.1 F). ) (42, 54). Несмотря на эту конкуренцию за один и тот же сайт, UBL не действует, вытесняя Usp14 из частиц, поскольку инкубация очищенного 26S с высокой концентрацией GST-UBL из Usp14 не диссоциирует связанный Usp14 от протеасомы ( SI Приложение , рис. .S6). Кроме того, наш метод очистки протеасом использует GST-UBL из Usp14 или hHR23B в качестве аффинного лиганда (55), но не может вытеснить Usp14 из протеасом, и до и после этого этапа примерно от 20 до 30% частиц содержат Usp14 ( 25, 50). Это прочное связывание ингибирующего Usp14 с 26S может объяснить, почему стимуляция различных активностей добавленным UBL постоянно выше в протеасомах, лишенных Usp14, чем в WT. Следовательно, стимуляция общего протеолиза в клетках за счет экспрессии UBL, вероятно, будет включать эти Usp14-дефицитные частицы.

Мы не можем исключить альтернативную возможность того, что связывание цепи Ub с ингибирующим доменом USP Usp14 может также вносить вклад в повышенный гидролиз АТФ и пептидов, временно обращая вспять базальное ингибирование этих процессов (27). Однако, основываясь на настоящих доказательствах, мы поддерживаем единый общий механизм действия UBL на протеасомы, лишенные Usp14, и те, где домен UBL Usp14 опосредует активацию убиквитинированными субстратами.

Скорее всего, домен UBL активирует вход субстрата в 20S, гидролиз АТФ и Rpn11, вызывая конформационные изменения в Rpn1, поскольку Usp14 взаимодействует с Rpn1 через свой домен UBL (26, 32, 42).Действительно, UBL Usp14 не смог усилить пептидазную активность дрожжевого 26S, имеющего мутацию AKAA в сайте T2 Rpn1, где связывается UBL Ubp6 (32), но нормально активировался в 26S, мутированном в сайте связывания T1 (фиг. 1 G ). Поскольку эти три протеасомные функции, активируемые UBL, катализируются субъединицами, расположенными на некотором расстоянии от Usp14, Rpn1 должен опосредовать эти аллостерические действия, поскольку он взаимодействует как с АТФазами, так и с доменом UBL (54). Более того, одни и те же активности зависят от шести субъединиц АТФазы, которые скоординированно функционируют в протеолизе и в 20S-гейтинге (56).Следовательно, Rpn1-опосредованное усиление активности АТФазы может быть ответственным как за активацию входа субстрата, так и за Rpn11.

В дополнение к активирующей роли UBL, полноразмерный Usp14 выполняет ингибирующие функции через взаимодействия своего домена USP с частицей, которые не являются общими для домена UBL (25). Это аллостерическое ингибирование, наблюдаемое с протеасомами in vitro, объясняет большую деградацию клеточных белков в клетках Usp14KO MEF, чем в WT (25). Интересно, что UBL увеличивал расщепление протеасомами как Ub ₅ -DHFR (рис.3 E ) и неубиквитинированный белок Sic1 (рис. 2 B ). Усиление общего протеолиза за счет экспрессии EGFP-UBL в клетках HeLa (рис. 4 C ), скорее всего, является результатом активации протеасом, поскольку оно сопровождалось падением уровней Ub-конъюгата. Эта стимуляция протеолиза особенно поразительна, потому что сверхэкспрессия UBL, как ожидается, будет конкурировать со связыванием переносящих факторов с 26S и ингибировать протеолиз, как мы фактически наблюдали с более высокими уровнями экспрессии.

Домены UBL в других белках также могут стимулировать протеасомную активность.

Подобно домену UBL Usp14, домены UBL hHR23 и hPLIC1 также стимулировали активность протеасомной пептидазы, хотя и в разной степени. UBL hHR23B имел такой же высокий стимулирующий эффект, как и Usp14, тогда как эффект hPLIC1 стимулировал в меньшей степени (фиг. 4 A ). Интересно, что филогенетический анализ показал, что UBL hHR23A / B или Rad23 эволюционно ближе к Usp14 ( SI Приложение , рис.S4). Но UBL hPLIC1 больше напоминает структуру Ub, который не оказывает стимулирующего эффекта как свободный мономер (21). Таким образом, помимо того, что он служит «фактором перемещения», который доставляет конъюгаты Ub в протеасому, hHR23 может также активировать протеасомы через свой домен UBL, функционируя аналогично Usp14 при связывании с субстратом. Такая активация протеасомы при доставке субстрата с помощью hHR23 может быть особенно важной для активации большинства клеточных 26S-частиц, в которых отсутствует Usp14 (26, 50).

Эти находки также предполагают, что стимуляция протеасомной активности может быть общим свойством, общим для широкого диапазона белков, содержащих UBL-домены. Например, факторы челночного хода, такие как hHR23 и hPLIC1, могут не только помочь протеасомам 26S связывать конъюгаты Ub, но также могут помочь активировать протеасомы для эффективной деградации субстратов. Помимо этих факторов челночного перемещения, другие белки, содержащие домен UBL, как известно, выполняют различные каталитические функции, такие как лигирование Ub с помощью Parkin (57), дефосфорилирование с помощью UBLCP1 (58) и протеолиз с помощью Ddi2 (59).Фактически, в наших продолжающихся исследованиях мы получили четкие доказательства того, что некоторые такие UBL-содержащие белки также обладают способностью стимулировать активность протеасом.

Материалы и методы

Очистка белков.

GST-UBL с доменом UBL, полученным из Usp14 (аминокислоты от 2 до 79), hHR23A (аминокислоты от 2 до 82), hHR23B (аминокислоты от 2 до 82) или hPLIC1 (аминокислоты от 38 до 111), был экспрессирован в Escherichia coli и очищали с помощью GSH-сефарозы, как описано ранее (55).Слитый с GST Usp14 (WT и мутант C114A активного сайта) также экспрессировался в E.coli и очищался с использованием GSH-сефарозы, как описано (16). Связанный со смолой Usp14 обрабатывали тромбином, чтобы отрезать GST от Usp14. Остаточный тромбин очищали от Usp14 с помощью бензамидин-сефарозы. His-UIM, полученный из домена UIM2 S5a (55), His-tagged PY-Sic1 (60), и His-tagged Usp14 UBL, был экспрессирован в E.coli и очищен с помощью смолы Ni-NTA. Ub ₅ -DHFR был любезным подарком от Takeda Pharmaceuticals.

Очистка 26S протеасом.

Эмбриональные фибробласты мыши

WT и Usp14KO (16), выращенные в среде DMEM (с добавлением 10% FBS и 1% пенициллина / стрептомицина), объединяли для аффинной очистки протеасом 26S с использованием ранее описанного метода (61). Вкратце, клеточные лизаты, приготовленные обработкой ультразвуком (15 секунд шесть раз при 18 Вт), центрифугировали в течение 1 часа при 100000 × г . Растворимые экстракты инкубировали при 4 ° C с GST-UBL, полученным из hHR23B, и соответствующим количеством GSH-сефарозы.Суспензию, содержащую 26S протеасомы, связанные с GST-UBL, выливали в пустую колонку и промывали с последующей инкубацией с His-UIM. Элюат собирали и инкубировали с агарозой Ni-NTA в течение 20 мин при 4 ° C. Связанный с Ni-NTA His-UIM центрифугировали при 3000 × g , а оставшийся супернатант содержал очищенные 26S протеасомы. Концентрацию белка определяли с помощью реактива Брэдфорда. Молярность частиц протеасомы 26S рассчитывалась на основе молекулярной массы дважды закрытой частицы 26S, равной 2.5 МДа.

Протеасомы дрожжей 26S очищали, как описано ранее (32), с модификацией из SY1214 (Mata ProA-TEV-Rpt1 :: HIS3 rpn13-pru :: natMX rpn10-uim :: kanMX), SY1210 (MATa ProA-TEV-Rpt1: : HIS3 rpn1-ARR :: TRP1 rpn13-pru :: natMX rpn10-uim :: kanMX) и SY1724 (MATa ProA-TEV-Rpt1 :: HIS3 rpn1-AKAA :: TRP1 rpn13-pru :: natMX rpn10-uim: : kanMX). Протеасомы 26S очищали с использованием смолы IgG (Life Technologies) и использовали для анализа пептидазы без элюирования.

Антитела.

Поликлональные кроличьи анти-Ub (А-100) были от Boston Biochem, а анти-Sic1 (sc-50441) были от Santa Cruz Biotechnology.Моноклональные мышиные анти-DHFR (sc-74594) были от Santa Cruz Biotechnology. Вторичные антитела, конъюгированные с HRP, были от Promega.

Иммуноблот-анализ.

Образцы для иммуноблотов обрабатывали на 4-12% гелях Bis-Tris (WG1403BOX10; Life Technologies) с буфером Mes (NP0002). Белки анализировали после SDS / PAGE и переносили на 0,45 мкм мембраны из ПВДФ (Whatman). Иммуноблоты блокировали и инкубировали с соответствующими первичными и вторичными антителами. Мембраны проявляли с помощью реагента с усиленной хемилюминесценцией (субстрат Immobilon Western HRP и реагент Luminol WBKLS0500; Millipore) на рентгеновскую пленку.Программа ImageJ (NIH; https://imagej.nih.gov/ij) использовалась для количественной оценки сигнала от пленки.

Анализы активности протеасом.

Как указано, протеасомы обычно инкубировали с доменом UBL, казеином, линейными гекса-Ub цепями или ингибиторами DUB при комнатной температуре в течение 15 мин до начала реакций. Гидролиз пептидов протеасомами MEF 26S измеряли с помощью 10 мкМ LRR-amc (Boc-Leu-Arg-Arg-amc), LLVY-amc (Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-amc) или nLPnLD-amc (Ac- Nle-Pro-Nle-Asp-amc) (Bachem) (λ _ex 380 нм; λ _em 460 нм) и 1 нМ 26S протеасомы при 37 ° C.Активность протеасомы рассчитывали от 30 до 60 мин после начала реакции. Реакционная смесь состояла из 50 мМ Трис (pH 7,6), 100 мМ KCl, 0,1 мМ АТФ или ATPγS, 0,5 мМ MgCl ₂, 1 мМ DTT и 25 нг / мкл БСА (Sigma). Расщепление PY-Sic1 (100 нМ) 26S протеасомами (2 нМ) проводили в присутствии 50 мМ трис-HCl (pH 7,6), 5 мМ MgCl ₂, 1 мМ АТФ, 1 мМ DTT и 10 мМ. мкг / мл БСА (Sigma) в течение указанного времени (от 0 до 4 ч) при 37 ° C и измерено вестерн-блоттингом с антителом против Sic1.Расщепление Ub ₅ -DHFR 26S протеасомами проводили в тех же условиях в течение 20 минут при 37 ° C и измеряли вестерн-блоттингом с антителом против DHFR. Гидролиз АТФ протеасомами измеряли с помощью анализа малахитового зеленого (62). Деубиквитинирование частицами 26S (5 нМ) анализировали с цепями тетра-Ub (368 нМ) в 25 мМ буфере Hepes (pH 7,6), содержащем 100 мМ KCl, 5 мМ MgCl ₂, 1 мМ DTT и 1 мМ АТФ или ATPγS. при 37 ° C в течение 20 мин. После реакции продукты анализировали вестерн-блоттингом с антителами против Ub.

Usp14 Competition Assay.

26S протеасомы из клеток MEF инкубировали с GST-UBL, полученным из Usp14 и GSH-сефарозы. Несвязанные белки удаляли с использованием промывочного буфера (50 мМ Трис, pH 7,6, 100 мМ KCl, 0,1 мМ АТФ или ATPγS, 0,5 мМ MgCl ₂, 1 мМ DTT и 25 нг / мкл BSA). Протеасомы элюировали тем же буфером, содержащим увеличивающиеся концентрации Usp14 (WT или мутант C114A). Элюированные фракции использовали для измерения активности пептидазы.

Деградация долгоживущих клеточных белков.

Общие скорости деградации долгоживущего белка в клетках HeLa определяли, как описано ранее, после трансфекции pEGFP-C1 (контроль) или pEGFP-UBL ^hHR23A (25). UBL hHR23A (аминокислоты от 2 до 82) субклонировали в вектор pEGFP-C1 для конструирования pEGFP-UBL ^hHR23A.

Благодарности

Мы благодарны Меган ЛаШанс за ее ценную помощь в подготовке рукописи, Дэну Финли и Бьюн Хун Ли за предоставленные клетки и реагенты, а также компании Takeda Pharmaceuticals за предоставление Ub ₅ -DHFR.Эта работа была поддержана грантами Национального института общей медицины (R01 GM51923) и Target ALS Foundation.

Сноски

Вклад авторов: H.T.K. и A.L.G. спланированное исследование; H.T.K. проведенное исследование; H.T.K. внесены новые реагенты / аналитические инструменты; H.T.K. и A.L.G. проанализированные данные; и H.T.K. и A.L.G. написал газету.
Рецензенты: G.D., Техасский университет; и AM, Калифорнийский университет, Беркли.
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Эта статья содержит вспомогательную информацию на сайте www.pnas.org/lookup/suppl/doi:10.1073/pnas.1808731115/-/DCSupplemental.

Вопрос об автозаполнении UBL: 3Dprinting

Я использую UBL на моем Ender 3, SKR 1.4, BLtouch.

Когда я запускаю

  G29 P1 T

Я получаю такую сетку:

  Отчет о топографии кровати:
    (1234) (234 234)
        0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
 9 | .. . . . . . . . . |
 8 | . -0,060 -0,053 -0,135 -0,183 -0,202 -0,258. . . |
 7 | . -0,050 -0,067 -0,123 -0,223 -0,143 -0,228. . . |
 6 | . -0,075 -0,065 -0,077 -0,090 -0,103 -0,207. . . |
 5 | . +0,030 +0,017 -0,090 -0,087 -0,138 -0,200. . . |
 4 | . -0,003 +0,022 -0,050 -0,120 -0,155 -0,163. . . |
 3 | .+0,007 -0,035 -0,098 -0,100 -0,163 -0,220. . . |
 2 | . -0,010 -0,048 [-0,113] -0,140 -0,125 -0,185. . . |
 1 | . -0,038 -0,075 -0,135 -0,123 -0,138 -0,173. . . |
 0 | . . . . . . . . . .

Когда я пытаюсь выполнить автозаполнение несколько раз, чтобы заполнить всю сетку

  G29 P3 T

Я получаю это:

  Отчет о топографии кровати:
    (1234) (234 234)
        0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
 9 | -0.060 -0,060 -0,038 -0,135 -0,142 -0,202 -0,258 -0,258 -0,258 -0,258 |
 8 | -0,060 -0,060 -0,053 -0,135 -0,183 -0,202 -0,258 -0,258 -0,258 -0,258 |
 7 | -0,033 -0,050 -0,067 -0,123 -0,223 -0,143 -0,228 -0,228 -0,228 -0,228 |
 6 | -0,075 -0,075 -0,065 -0,077 -0,090 -0,103 -0,207 -0,207 -0,207 -0,207 |
 5 | +0.043 +0.030 +0.017 -0.090 -0.087 -0.138 -0.200 -0.200 -0.200 -0.200 |
 4 | -0,003 -0,003 +0,022 -0,050 -0,120 -0,155 -0,163 -0,163 -0,163 -0,163 |
 3 | +0.050 +0,007 -0,035 -0,098 -0,100 -0,163 -0,220 -0,220 -0,220 -0,220 |
 2 | +0,028 -0,010 -0,048 [-0,113] -0,140 -0,125 -0,185 -0,185 -0,185 -0,185 |
 1 | 0,000 -0,038 -0,075 -0,135 -0,123 -0,138 -0,173 -0,173 -0,173 -0,173 |
 0 | 0,000 -0,038 -0,075 -0,135 -0,105 -0,138 -0,160 -0,160 -0,160 -0,160

У меня проблема с столбцами 7, 8 и 9, которые кажутся просто копиями столбца 6. Я думал, что G29 P3 будет использовать другие значения и экстраполировать их, как кажется в некоторых местах, но столбцы 7,8 и 9 не экстраполируются.Есть ли что-то, что нужно настроить, чтобы изменить это, или мне следует вручную установить эти значения?

Как естественным образом очистить любую стиральную машину – Clean Mama

10 июля 2014 г.

Если вы когда-нибудь задумывались, почему ваша стиральная машина пахнет странно, или нужно ли ее чистить, вам нужно ее почистить. Если вы никогда не задумывались об очистке этого трудолюбивого прибора, вам все равно нужно его почистить. Добавьте этот простой шаг в процесс стирки, и у вас будет свежее пахнущее белье И стиральная машина без запаха.

Машину с верхней или фронтальной загрузкой можно мыть белым уксусом или отбеливателем. Я предпочитаю использовать белый уксус ИЛИ нехлорированный отбеливатель, потому что это безопасные, полностью натуральные растворы, но некоторые производители стиральных машин рекомендуют использовать только хлорированный отбеливатель. Самое главное, следуйте инструкциям для вашей конкретной машины или попробуйте один из этих естественных методов.

с верхней загрузкой

Очистить стиральную машину с верхней загрузкой очень просто, все, что вам действительно нужно, это белый уксус и несколько тряпок для очистки.Обеспокоены тем, что ваша прачечная будет пахнуть маринадом? После завершения цикла полоскания запах уксуса исчезнет.

Для начала настройте стиральную машину на максимальную температуру, максимальную производительность и самый длительный цикл.
Добавьте четыре стакана белого уксуса в горячую воду, закройте крышку и дайте ему встряхнуться в течение нескольких минут.
Откройте крышку или приостановите / остановите машину и дайте ей постоять в течение часа, чтобы уксус успел избавиться от бактерий, плесени и грибка, а также от шлангов вашей машины.

После того, как вы выполнили полный цикл с раствором уксуса, вы можете повторить процесс, если ваша стиральная машина сильно загрязнена. Уксус отлично удаляет любые налеты, не говоря уже о размягчении мыльной пены и других остатков, которые могут быть в стиральной машине и шлангах. Дайте машине взбалтывать раствор в течение нескольких минут и откройте крышку.

Оставив раствор на час, пора заняться внешней стороной стиральной машины, а также резервуарами для смягчителя ткани и отбеливателя.Используя тряпку или салфетку из микрофибры, окуните ее в раствор уксуса и отожмите. Протрите внешнюю поверхность, крышку и панель управления, стараясь не намочить их слишком сильно. Снимите резервуар с отбеливателем и протрите место, где обычно собираются пена и грязь. Прополощите ткань и выньте резервуар для смягчителя из машины, а также протрите его снаружи и изнутри. Закройте крышку и дайте стиральной машине завершить цикл.

(HE) с фронтальной загрузкой или (HE) с верхней загрузкой

Стиральные машины с фронтальной загрузкой являются относительно новыми на рынке бытовой техники и быстро завоевали популярность благодаря своей эффективности и чистящим способностям.Несмотря на все преимущества, которые они могут предложить, есть одна общая жалоба, которая, кажется, беспокоит владельцев: вонючее белье. Протирание внутренней части стиральной машины очистителем, использование дополнительного моющего средства или запуск всего в самом длинном и самом горячем цикле не помогает рассеять запах. Однако одна простая задача очистки не только устранит проблему, но и сохранит вашу стиральную машину в идеальном состоянии.

Стиральные машины

HE потребляют меньше воды и энергии, что, в свою очередь, может привести к увеличению количества плесени, плесени, остатков моющих средств и отложений в стиральной машине.Некоторые стиральные машины имеют в качестве опции отдельный цикл очистки – у меня он есть на моей стиральной машине, и я запускаю этот цикл после того, как стираю тряпки каждую неделю. Я почти уверен, что в этом секрет стиральной машины HE без запаха.

Лучший способ очистить стиральную машину с фронтальной загрузкой – это просто:

Выберите настройку горячей воды. Если в вашей кофемашине нет настройки горячей воды, выберите настройку цикла «белый» или «пятно».
Выберите опцию «дополнительное полоскание», если у вашей стиральной машины есть такой выбор.
Добавьте стакана белого уксуса ИЛИ стакана нехлорированного отбеливателя (не оба!) В дозатор отбеливателя или заполните его до максимального уровня.
Подождите, пока цикл не завершится.
Чтобы убедиться, что в стиральной машине не осталось уксуса, выберите вручную дополнительный цикл полоскания, если в стиральной машине нет выбора второго цикла полоскания.

После того, как вы закончили мыть внутреннюю часть стиральной машины, потратьте пару минут на очистку дозаторов отбеливателя и смягчителя ткани.Их можно легко очистить, просто сняв и промыв в теплой мыльной воде, чтобы удалить любые остатки, или протерев их белым уксусом о чистящую ткань. Тщательно промойте и высушите их, прежде чем вставлять снова.

Не забудьте протереть резиновое уплотнение дверцы, так как это идеальное укрытие для плесени и грибка. Осторожно отодвиньте резиновую прокладку и проверьте, нет ли у вас плесени, грибка или носков (как в случае с моим). Тщательно протрите пораженный участок белым уксусом и мягкой белой тканью для очистки.Промойте тканью, смоченной водой, и тщательно вытрите насухо чистой тканью, чтобы предотвратить накопление влаги.

После очистки этих трех зон вы можете протереть внешнюю поверхность и панель управления мягким универсальным чистящим спреем, чтобы удалить скопившуюся пыль и грязь. Поддерживать чистоту стиральной машины и избавиться от неприятного запаха белья просто.

Мой совет по обслуживанию номер один? Обязательно оставляйте дверцу открытой, чтобы предотвратить накопление влаги между загрузками, и очищайте ее внутри и снаружи каждый месяц.

Ищете лучшие товары для дома? Загляните в Clean Mama Home!

(PDF) Белки рецептора убиквитина UBL / UBA связывают общую цепочку тетраубиквитина

Вестерн-блот-анализ

GST-меченные Rad23 и hHR23a были получены из

векторов экспрессии pGEX-2T и pGEX-6P-1

(A ), соответственно, путем клонирования их кДНК

в рамке считывания с глутатион-S-трансферазой (GST).

Каждый белок экспрессировали и очищали, как описано

, и Rad23 отделяли от GST расщеплением

тромбином.0,1 нмоль очищенного His-меченного Rad23 или

Ddi1 или очищенного GST-меченного hHR23a связывали с

20 мл предварительно промытой смолы Ni-NTA или смолы глутатиона

S-сефарозы соответственно. Каждой смоле давали

смешиваться при 48 ° C в течение ночи с K48-связанным тетраубиквитином

(Boston Biochem Inc.), а затем тщательно промывали буфером A

(20 мМ фосфат натрия (pH 6,5), 100 мМ

NaCl, 0,5% (об. / Об.) Тритон Х-100). Смолы Ni-NTA были

, затем инкубировали либо с GST-Rad23, либо с GST-hHR23a в течение

1 час при 48 ° C, так как смолу глутатиона S-сефарозы смешивали

с немаркированным Rad23 в тех же условиях.Каждую смолу

осаждали и затем тщательно промывали буфером

A или буфером B (50 мМ Трис-HCl (pH 8,0), 100 мМ

NaCl, 20 мМ имидазол, 10% (об. / Об.) Глицерин). Белки

, которые оставались на смоле, были фракционированы электрофорезом

, перенесены на мембрану PVDF,

и исследованы поликлональным антиубиквитином (Boston

Biochem Inc.), анти-Rad23,

или антитело против GST (Santa Cruz

Biotechnology).Визуализацию выполняли

с использованием пероксидазы кролика и хрена и ECL.

Благодарности

Мы благодарны Кейси Личке и

Жаннет Зинггелер за помощь с пробоподготовкой

. Мы также благодарим доктора Леонарда

Banaszak за то, что он позволил нам использовать его динамический прибор для светорассеяния

. Данные ЯМР

были получены на установке ЯМР Университета

Миннесоты, и мы благодарим доктора Дэвида Лайва и

доктора Беверли Островски за их техническую помощь.Приборы для ЯМР были предоставлены на средства

от NSF (BIR-961477), Университета

Медицинской школы Миннесоты и Медицинского фонда Minne-

sota. Обработка данных и визуализация

выполнялись в вычислительной лаборатории Basic

Sciences Университета

суперкомпьютерного института Миннесоты. Работа

финансировалась за счет грантов Национального института здоровья

CA097004-01A1 (К.JW)

и CA099033 (для DJC), а также

Академического центра здоровья Университета Миннесоты –

ter Seed Grant (для KJW) и специальный грант

от Онкологического центра Университета Миннесоты

(для KJW). и DJC).

Ссылки

1. Цехановер А. (1994). Убиквитин-протеасома

протеолитический путь. Ячейка, 79, 13–21.

2. Шуберт, У., Антон, Л. К., Гиббс, Дж., Норбери, К. К.,

Юделл, Дж.В. и Беннинк, Дж. Р. (2000). Быстрая деградация

большой фракции вновь синтезированных белков

протеасомами. Природа, 404, 770–774.

3. Рок, К. Л., Гольдберг, А. Л. (1999). Деградация

клеточных белков

и образование пептидов, представленных MHC класса

I. Анну. Rev. Immunol. 17,

739–779.

4. Конавей Р. К., Брауэр С. С. и Конавей Дж. У. (2002).

Новые роли убиквитина в регуляции транскрипции

.Science, 296, 1254–1258.

5. Муратани М. и Танси У. П. (2003). Как система убиквитин-протеасома

контролирует транскрипцию.

Nature Rev. Mol. Клетка. Биол. 4, 192–201.

6. Ямагути Р. и Датта А. (2000). Ингибиторы протеасомы

изменяют упорядоченное развитие синтеза ДНК

во время S-фазы в клетках HeLa и приводят к репликации

ДНК. Expt. Cell Res. 261, 271–283.

7. Хик, Л. (2001). Новый билет для входа в почку

везикул-убиквитин.Cell, 106, 527–530.

8. Кацманн Д. Дж., Одорицци Г. и Эмр С. Д. (2002).

Понижающая регуляция рецепторов и мультивезикулярная сортировка

. Nature Rev. Mol., Cell Biol. 3, 893–905.

9. Hoege, C., Pfander, B., Moldovan, G. L., Pyrowolakis,

G. & Jentsch, S. (2002). RAD6-зависимая репарация ДНК

связана с модификацией PCNA убиквитином и

SUMO. Природа, 419, 135–141.

10. Спенс, Дж., Садис, С., Хаас, А.Л. и Финли, Д. (1995).

Мутант убиквитина со специфическими дефектами ДНК

репарация и мультиубиквитинирование. Мол. Клетка. Биол. 15,

1265–1273.

11. Чен Л. и Мадура К. (2002). Rad23 способствует нацеливанию

протеолитических субстратов на протеасомы.

Мол. Клетка. Биол. 22, 4902–4913.

12. Эльзассер С., Чандлер-Милителло Д., Мюллер Б., Ханна Дж.

и Финли Д. (2004). Rad23 и Rpn10 служат в качестве

альтернативных рецепторов убиквитина для протеасомы.

J. Biol. Chem. 279, 26817–26822.

13. Клейнен, М. Ф., Ши, А. Х., Чжоу, П., Кумар, С.,

Социо, Р. Э., Кедерша, Н. Л. и др. (2000). Белки hPLIC

могут обеспечивать связь между механизмом убиквитина-

и протеасомой. Мол. Ячейка, 6,

409–419.

14. Саеки Ю., Сайто А., Тох-э А. и Йокосава Х. (2002).

Убиквитин-подобные белки и Rpn10 играют кооперативную

роли в убиквитин-зависимом протеолизе.Biochem.

Biophys. Res. Commun. 293, 986–992.

15. Каплун, Л., Циркин, Р., Бахрат, А., Шабек, Н.,

Иванцив, Ю., Раве, Д. (2005). Повреждение ДНК –

индуцибельный белок UbL – UbA Ddi1 участвует в

Mec1-опосредованной деградации эндонуклеазы Но.

Мол. Клетка. Биол. 25, 5355–5362.

16. Верма Р., Оаниа Р., Грауманн Дж. И Деше Р. Дж.

(2004). Рецепторы мультиубиквитиновых цепей определяют слой

субстратной селективности в системе убиквитин-протеасома

.Cell, 118, 99–110.

17. Уилкинсон, К. Р., Сигер, М., Хартманн-Петерсен, Р.,

Стоун, М., Уоллес, М., Семпл, К. и Гордон, К.

(2001). Белки, содержащие домен UBA, способны

связываться с мультиубиквитиновыми цепями. Nature Cell Biol. 3,

939–943.

18. Бертоле Б. Л., Кларк Д. Дж., Вольф М., Уотсон М. Х.,

Хенце М., Дивита Г. и Рид С. И. (2001). UBA

доменов белков, индуцирующих повреждение ДНК, взаимодействуют

с убиквитином.Структура природы. Биол. 8, 417–422.

19. Ван, К., Го, А. М., Хоули, П. М. и Уолтерс, К. Дж.

(2003). Распознавание убиквитина посредством репарации ДНК

белка hHR23a. Биохимия, 42, 13529–13535.

20. Hiyama, H., Yokoi, M., Masutani, C., Sugasawa, K.,

Maekawa, T. et al. (1999). Взаимодействие hHR23 с

S5a. Убиквитин-подобный домен hHR23 обеспечивает взаимодействие

с субъединицей S5a 26S протеасомы.

Дж.Биол. Chem. 274, 28019–28025.

1034 Белки UBL / UBA связывают общий тетраубиквитин

Kikunan Onsen UBL Hotel $ 132 ($ ̶2̶5̶3̶). Кумамото: спа-курорты и отзывы

Юката (японский халат)

Электрочайник

Услуга пробуждения

Интернет

Ежедневная уборка

Факс / ксерокопирование

Семейные номера

Подушка пуховая

Огнетушитель

Сувенирный магазин

Прачечная

Телевизор с плоским экраном

Конференц-зал / банкетный зал

Бесплатные туалетные принадлежности

Дымовая сигнализация

Отопление

Специальные диетические меню (по запросу)

Термальная ванна

Физическое дистанцирование в обеденных зонах

Настольные игры / пазлы

Правила физического дистанцирования

Уборку проводят профессиональные клининговые компании

Спа

Действует процесс проверки здоровья гостей

Доступны смежные номера

Ключ доступа

Видеонаблюдение в общих помещениях

Детское питание

Видеонаблюдение за пределами собственности

Буфет, подходящий для детей

Ресторан

Фен

Шкафчики

Экраны или физические барьеры между персоналом и гостями в соответствующих местах

Использование чистящих химикатов, эффективных против коронавируса

Круглосуточная охрана

С кондиционером

Газеты

Дезинфекция помещений для гостей между приездами

Баня под открытым небом

Жилье опломбировано после уборки

Все тарелки, столовые приборы, стаканы и другая посуда продезинфицированы

Общественная баня

Пресс для брюк

Гости могут отказаться от уборки номера

Бесплатная парковка

Настольный теннис

Персонал соблюдает все протоколы безопасности в соответствии с указаниями местных властей

Кофейня

Собственная ванная комната

Сад

Круглосуточная стойка регистрации

Места для курения

Доступно хранилище

Частная парковка

Свадебные услуги

Спа и оздоровительный центр

Бесплатный Wi-Fi

Доступны номера для некурящих

Повышенная доступность

Постельное белье

Полотенца

Сейф

Гостиный уголок

Лифт

Массаж

Шампунь

Общий туалет

Душ

Шапочка для душа

Можно подняться на лифте

Приспособленная ванна

Тапочки

Аптечка

Диван

Будильник

Звукоизолированные номера

Ванна

Биде

Джакузи

Мыло для тела

Татами (традиционный японский пол)

Люкс

Телефон

Ковровое покрытие

Туалет

Туалетная бумага

Термометры для гостей предоставлены объектом

Сауна

Зубная щетка

Вешалка для одежды

Урны для мусора

телевизор

На верхние этажи можно подняться на лифте

Кондиционер

Рабочий стол

Торговый автомат (напитки)

Торговый автомат (закуски)

Услуги VIP-номера

Гардероб или шкаф

НОВИНКА 72 СТИКЕРЫ И СТИКЕРЫ В ЗОЛОТОЙ ОБОЛОЧКЕ ДЛЯ ТРАНСПОРТА ДЛЯ ДЕТЕЙ ART & FUN UBL

НОВИНКА 72 НАКЛЕЙКИ ДЛЯ ТРАНСПОРТИРОВКИ И СТИКЕРОВ В ЗОЛОТОЙ ОБОЛОЧКАХ KIDS ART & FUN UBL

Home
NEW 72 ТРАНСПОРТНЫЕ СТИКЕРЫ И СТИКЕРЫ С ЗОЛОТОЙ ОБРАБОТКОЙ АЛЬБОМ KIDS ART & FUN UBL

НОВИНКА 72 ТРАНСПОРТНЫЕ СТИКЕРЫ И СТИКЕРЫ В ЗОЛОТОЙ ОБОЛОЧКЕ АЛЬБОМ KIDS ART & FUN UBL.ЗАГРУЗКА блестящих, сверкающих наклеек с золотым ободом и мини-альбом наклеек, в который можно их поместить! Это будет сделано как можно скорее, но в течение 24 часов. хочу разобраться в проблемах. И все это в исключительно загруженном предвкушении Рождества .. Состояние: Новое: Совершенно новый, неиспользованный, неоткрытый и неповрежденный предмет. См. Список продавца для получения полной информации. Просмотреть все определения условий ： Торговая марка: ： UBL ， EAN: ： 5013748010700 ： MPN: ： Не применяется ，

НОВИНКА 72 СТИКЕРЫ ДЛЯ ТРАНСПОРТА В СТИКЕРАХ И СТИКЕРАМИ В ЗОЛОТОЙ оправе KIDS ART & FUN UBL

НОВЫЕ СТИКЕРЫ И СТИКЕРЫ И СТИКЕРЫ И СТИКЕРЫ И СТИКЕРЫ И СТИКЕРЫ ДЛЯ ДЕТЕЙ ART & FUN RED STMICKED & FUN UBL 72 СТИКЕРСКИЕ СТИКЕРЫ ДЛЯ ДЕТЕЙ И все это в исключительно загруженной подготовке к Рождеству, ЗАГРУЗКЕ блестящих, блестящих наклеек с золотым ободом и мини-альбоме наклеек, чтобы поместить их.