Осциллограф осу 10а: Осциллограф ОСУ-10A и ОСУ-10B | Электроника для всех

Осцилограф осу-10 а

Структурная схема электронно-лучевого осциллографа приведена на рис 6. Назначение каналов приведено выше.

Рис 8.Внешний вид осциллографа ОСУ 10 А

ВНИМАНИЕ! Студентам разрешается подсоединить пробник-делитель ко входу Y. Включить питание осциллографа с помощью клавиши ВКЛ. По окончании экспериментов выключить питание с помощью клавиши ВЫКЛ, и отсоединить пробник –делитель.

Студентам запрещается касаться других органов управления. Настройку прибора осуществляет ведущий преподаватель.

Студентам рекомендуется теоретически изучить назначение органов управления осциллографом.

Технические данные тракт вертикального отклонения

X-y режим

ОБЩИЕ ПАРАМЕТРЫ

Прибор обеспечивает свои технические характеристики в пределах норм после времени прогрева, равного 15 минутам.

Параметры прибора соответствуют техническим характеристикам при питании от сети, напряжением 220 В ±10% частотой 50±2 Гц с содержанием гармоник до 5%.

СОСТАВ ИЗДЕЛИЯ

УКАЗАНИЯ МЕР БЕЗОПАСНОСТИ

К работе с прибором допускаются лица, ознакомившиеся с техническим описанием и инструкцией по эксплуатации прибора, а также прошедшие инструктаж по технике безопасности. В приборе имеются напряжения, опасные для жизни.

Общие требования по технике безопасности

Соблюдение следующих правил безопасности значительно уменьшит возможность поражения электрическим током.

1. Старайтесь не подвергать себя воздействию высокого напряжения – это опасно для жизни. Снимайте защитный кожух и экраны только по мере необходимости. Не касайтесь высоковольтных конденсаторов сразу, после выключения прибора.

2. Постарайтесь использовать только одну руку (правую), при регулировке цепей, находящихся под напряжением. Избегайте небрежного контакта с любыми частями оборудования, потому что эти касания могут привести к поражению высоким напряжением.

3. Работайте по возможности в сухих помещениях с изолирующим покрытием пола или используйте изолирующий материал под вашим стулом и ногами. Если оборудование переносное, поместите его при обслуживании на изолированную поверхность.

4. При использовании пробника, касайтесь только его изолированной части.

5. Постарайтесь изучить цепи, с которыми Вы работаете, для того, чтобы избегать участков с высокими напряжениями. Помните, что электрические цепи могут находиться под напряжением даже после выключения оборудования.

6. Металлические части оборудования с двухпроводными шнурами питания не имеют заземления. Это не только .представляет опасность поражения электрическим током, но также может вызвать повреждение оборудования..

7. Никогда не работайте один. Необходимо, чтобы в пределах досягаемости находился персонал, который сможет оказать вам первую помощь.

Внимание! Для предотвращения преждевременного выхода из строя или снижения наработки ЭЛТ необходимо перед включением (выключением) прибора устанавливать ручку регулировки яркости в крайнее положение.

НАЗНАЧЕНИЕ ОРГАНОВ УПРАВЛЕНИЯ

1). Расположение и назначение органов управления (передняя панель)

1. Выключатель сетевого питания. Когда этот выключатель нажат (питание включено – слева загорается индикатор).

2. Яркость. Регулирует яркость изображения.

3. Фокус. Регулировка фокуса изображения.

4. Выход калибратора. Выход сигнала 1 кГц калибратора делителя.

5. < ►(положение). Перемещает изображение по горизонтали.

6. Уровень. Регулировка уровня синхронизации.

7. БЛК. Блокировка регулятора уровня синхронизации.

8. ВРЕМЯ /ДЕЛ. устанавливает коэффициент развёртки от 0,1 мке/дел до 0,1 с/дел 19 ступенями.

9. Вход X (основной).

10. Внеш./ Внутр. Развёртка синхронизируется внутренним или внешним сигналом.

11. Сеть. (плавно) Плавное изменение коэффициента развёртки с перекрытием не менее чем в 2.5 раза в каждом положении переключателей время/дел.

2) Установите желательную яркость и фокус изображения с помощью ручек ЯРКОСТЬ и ФОКУС.

3). Подайте на вход осциллографа сигнал с КАЛИБРАТОРА через пробник 1:1.

4). Установите переключатель 15 (AC/DC) в положение «Перем» (отжат). На экране должно наблюдаться изображение сигнала соответствующее рисунку.

5). Отрегулируйте четкость изображения ручкой ФОКУС

6). С помощью переключателей В/ДЕЛ и ВРЕМЯ/ДЕЛ установите желаемые размеры сигнала.

7). Совместите с помощью переключателей изображение сигнала с линиями шкалы, так чтобы можно было легко рассчитать амплитуду (Vp-p) и период (Т).

Синхронизация

Выбор синхронизации необходим для эффективных действий с осциллографом. Пользователь должен быть полностью знаком с функциями переключателей режимов и источников синхронизации.

Назначение переключателя (13):

(Авто) Выбор автоматического режима работы развертки осуществляется установкой переключателя в положение Авто (автоматический). Генератор развертки работает в автоколебательном режиме без сигнала синхронизации. Как только появится сигнал синхронизации генератор развертки будет работать синхронно с входным сигналом. Режим Авто удобно использовать при включении прибора для наблюдения луча и входного сигнала и последующего включения других режимов работы прибора. При установке органов управления в необходимые положения можно вернуться в режим Ждущ. Режим Авто должен использоваться при исследовании постоянных напряжений и сигналов с малыми амплитудами когда нет синхронизации развертки.

(Ждущ) Генератор развертки не будет запускаться до тех пор, пока не будет установлен необходимый уровень запуска развертки ручкой «УРОВЕНЬ» (6). Генератор развертки формирует только один ход луча и в дальнейшем активируется только при поступлении другого сигнала синхронизации. В режиме Ждущ на экране не будет отображения луча, до тех пор пока не будет синхронизации.

ТВ Перевод переключателя (12) в положение ТВ позволяет выделять строчные синхроимпульсы из полного видеосигнала. Синхронизация строчными импульсами позволяет наблюдать ТВ строки. При этом коэффициент развертки желательно установить в положение 10 мке/дел. Более удобный размер изображения можно установить ручкой (22) «плавно».

Синхронизация возможна только “-” полярностью, это означает что синхросигнал должен быть отрицательным и видео сигнал положительным. Как показано на рис.

Рис.9

Функции переключателей (10,11):

Переключатель (10) используется для выбора источника синхронизации.

Внутр (отжат): сигнал предусилителя, который используется, как сигнал синхронизации наиболее часто.

Внеш (нажат): развёртка запускается внешним сигналом, который подаётся на внешний вход. Так как развёртка синхронизируется одним и тем же сигналом это позволяет исследовать сигналы различной амплитуды, частоты и формы без перестройки регулировок синхронизации.

(11) Сеть (нажат): сигнал с частотой сети переменного тока используется как сигнал синхронизации. Этот метод эффективен, когда измеряемый сигнал имеет временное соотношение с частотой сети.

Выбор уровня запуска и полярности:

Запуск развертки осуществляется при установке определенного уровня запуска. Вращение ручки приводит к изменению начальной точки запуска генератора развертки. При вращении ручки в область «+» запуск будет происходить положительной полуволной, при вращении ручки в область «-» запуск будет происходить отрицательной полуволной, когда ручка находится в центральном положении запуск развертки будет осуществляться с нулевой линии.

Вращая ручку Уровень (6), установите необходимый уровень запуска. При исследовании синусоидального сигнала начальная фаза может быть изменена. Вращением ручки Уровень можно добиться синхронизации сигнала от пика до пика. (19) Этот выключатель выбирает полярность сигнала синхронизации, как показано на рис..

Когда переключатель (19) находится в положении “+”, развёртка запускается положительной частью синхронизирующего сигнала.

Установка времени развертки.

Установите переключатель время/дел в такое положение при котором на экране отображается необходимое число периодов сигнала. Если периодов много уменьшите время развертки. Если на экране отображается только линия развертки, попробуйте увеличить время развертки. Когда время развертки достаточно малое при наблюдении части сигнала, особенно прямоугольной формы, на экране будет видна прямая линия.

Режим X-Y.

Установите переключатель (17) в нажатое положение для установки режима наблюдения фигур Лисажжу. Входы распределятся следующим образом:

Х-ось (горизонтальная).Вход внешней синхронизацииY-ось (вертикальная) Вход Y осциллографа

Внимание: Когда сигналы высокой частоты наблюдают с помощью X-Y режима, следует обратить внимание на полосу частот и различие фаз между X и Y-осью.

Режим X-Y используется для измерений, которые не могут быть проведены в обычном

Рис.10

режиме (измерение отношений частот, температуры, скорости и т.д.).

Установите переключатель (17) в нажатое положение. Вход внешней синхронизации станет осью X и Вход Y осциллографа станет осью Y.

Ручками положения луча по горизонтали и вертикали установите изображение в необходимую часть экрана.

Переключателем В/дел установите необходимый размер изображения по оси Y.

Размер изображения по оси Y регулировать невозможно, оно всегда составляет 0,5В\дел.

Калибровка делителя.

Как объяснено предварительно, делитель расширяет диапазон измерений. Если компенсация делителя не должным образом выполнена, отображенная форма сигнала будет искажена и приведёт к ошибкам в измерениях.

Подключите делитель 1:10 к входу осциллографа, и установите переключатель Вольт/Дел. в положение 10 мВ. Подсоедините делитель к выходу калибратора и с помощью переменного резистора установите оптимальное изображение сигнала. См. рис. 11

Рис.1

Измерительные приборы фирмы Velleman Instruments

Осцилографы фирмы MCP Модель Макс. частота сигнала Кол-во каналов Примечание CQ5010A (ОСУ-10А) 10 МГц 1 Одноканальный аналоговый осциллограф. CQ5010B (ОСУ-10Б) 10 МГц 1 Одноканальный аналоговый осциллограф. CQ5010D 10 МГц 1 Одноканальный аналоговый осциллограф. Техническое описание на ОСУ-10А Осциллограф CQ5010A Полоса пропускания осциллографа: 0…10 МГц Чувствительность осциллографа: 5мВ/дел. … 5В/дел. Входной импеданс 1MΩ 30pF ТВ синхронизация Развертка внешним сигналом (режим X-Y) Высокая стабильность параметров Встроенный калибратор Габариты 130х190х280мм, вес 3 кг Экономичная замена осциллографу С1-94 Лучший выбор для использования в школах и для радиолюбительства Осциллограф CQ5010B Полоса пропускания осциллографа: 0…10 МГц Чувствительность осциллографа: 5мВ/дел. … 5В/дел. Входной импеданс 1MΩ 30pF ТВ синхронизация Развертка внешним сигналом (режим X-Y) Высокая стабильность параметров Встроенный калибратор Габариты 130х190х280мм, вес 3 кг Экономичная замена осциллографу С1-94 Лучший выбор для использования в школах и для радиолюбительства Осциллограф CQ5010D Полоса пропускания осциллографа: 0. ..10 МГц Чувствительность осциллографа: 5мВ/дел. … 5В/дел. Входной импеданс 1MΩ 30pF ТВ синхронизация Развертка внешним сигналом (режим X-Y) Встроенный калибратор Обновленный дизайн Электронный переключатель обеспечивает высокую стабильность параметров Габариты 140х196х290мм, вес 3 кг Экономичная замена осциллографу С1-94 Лучший выбор для использования в школах и для радиолюбительства

Hantek 1008A, 8 каналов, программируемый генератор на базе ПК, частота дискретизации в реальном времени 2,4 Мвыб / с, вертикальное разрешение 12 бит – Купить онлайн в Брунее на brunei.desertcart.com. ProductId: 49216242.

• Высокоэффективный и экономичный.
• 8-канальный осциллограф для тестирования автомобилей.
• 2,4 MSa / s частота дискретизации в реальном времени, разрешение по вертикали 12 бит.
• Функция карты DAQ.
• 8-ми канальный программируемый генератор аналоговых сигналов коленчатого, распределительного и т. Д.

Акустическая коммуникация для животных | SpringerLink

Об этой книге

Введение

Последние десятилетия привели к значительному увеличению исследований акустической коммуникации у животных.Публикация научных статей как по эмпирическим, так и по теоретическим аспектам этой темы значительно увеличилась, и новый журнал «Биоакустика» полностью посвящен таким статьям. Наряду с этим увеличением объема работы есть признание того, что многие из текущих вопросов лучше всего подходят к междисциплинарной перспективе, требуя технических и теоретических вкладов из ряда областей исследования, которые традиционно были разделены. За заметным исключением сборника, отредактированного Льюисом (1983), было немного томов, в основном посвященных техническим вопросам сравнительной биоакустики, которые продолжали ранние работы под редакцией Ланьона и Таволги (1960) и Буснела (1963).Огромный рост экспертных знаний c :() по этой теме, в частности, послужил первоначальным стимулом для организации этого тома, который пытается представить фундаментальную информацию как из теоретических, так и из прикладных аспектов текущих исследований в области биоакустики. Хотя полностью всесторонний обзор был бы непрактичным, этот том предлагает базовое рассмотрение широкого спектра тем, направленных на обеспечение концептуальной основы, в рамках которой исследователи могут решать свои собственные вопросы. Каждая презентация предназначена для использования как можно более широким кругом исследователей, включая как тех, кто в настоящее время работает в любой из множества и разнообразных дисциплин биоакустики, так и других, которые могут быть новыми для таких исследований.

Ключевые слова

Bioakustik Ethologie Pet Tiere Vergleichende Psychologie Verhalten akustische Kommunikation анатомия акустическая коммуникация животных поведение животных биоакустика классификация сравнительная психология этология рост

Редакторы и сотрудники

• Стивен Л.Хопп
• Майкл Дж. Оурен
• Кристофер С. Эванс

1. org/Organization”> 1.Отдел. экологии и эволюционной биологии, Университет Аризоны, Таксон, США,
2. 2. Отдел. психологии, Корнеллский университет, Италия, США,
3. , 3. Кафедра психологии, Университет Маккуори, Сидней, Австралия,
,

Библиографическая информация

• Название книги Акустическая коммуникация животных
• Подзаголовок книги Надежный анализ и методы исследования
• Редакторы Стивен Л.Хопп
  Майкл Дж. Оурен
  Кристофер С. Эванс
  
• DOI https://doi.org/10.1007/978-3-642-76220-8
• Информация об авторских правах Springer-Verlag Berlin Heidelberg 1998
• Имя издателя Шпрингер, Берлин, Гейдельберг
• электронные книги Архив книг Springer
• ISBN в твердом переплете 978-3-540-53353-5
• ISBN в мягкой обложке 978-3-642-76222-2
• электронная книга ISBN 978-3-642-76220-8
• Номер издания 1
• Число страниц XXI, 421
• Количество иллюстраций 0 ч / б иллюстраций, 0 иллюстраций в цвете
• Темы Компьютерное приложениенаук о жизни
  Экология
  Физиология животных
  
• Купить эту книгу на сайте издателя

Электромагнитные поля изменяют подвижность метастатических клеток рака молочной железы

Клеточные линии и реагенты

MDA-MB-231 Клетки аденокарциномы молочной железы, стабильно экспрессирующие GFP ⁵⁷ (предоставлены Luker Lab, Университет Мичигана, Анн-Арбор) культивировали в DMEM (Life-Technologies, 11995073) с добавлением 1% пенициллина-стрептомицина-глутамина (100 мкг мл ^-1 , Life Technologies, 10378016) и 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS) (Atlas Biologicals, EF-0500-A, E27D17A1). Клетки MCF10A (подарок от Ostrowski Lab, Государственный университет Огайо, Колумбус, Огайо) культивировали в DMEM-F12 (Corning, 10-103-CV) с добавлением 1% пенициллина-стрептомицина (100 мкг / мл ^-1 , Life Technologies , 15140122) и 5% лошадиной сыворотки (Life-Technologies, 16050-122, 1783307). В культуральную среду для клеток MCF10A также добавляли 0,1% инсулин (10 мкг / мл ^-1 , Sigma-Aldrich, I1882), 0,05% гидрокортизон (0,5 мг / мл ^-1 , Sigma-Aldrich, H0888), 0,02% фактор роста эпителия (20 нг / мл ^-1 , Peprotech, AF-100-15) и 0.01% холерный токсин (100 нг / мл ^-1 , Sigma-Aldrich, C8052). Третья линия клеток, клетки инвазивной протоковой карциномы молочной железы MCF10CA1a (Dr Ramesh Ganju Lab, Университет штата Огайо, Колумбус, Огайо), культивировалась в DMEM-F12 (Life-Technologies, 11330032) с добавлением 1% пенициллина-стрептомицина (100 мкг / мл). ^-1 , Life Technologies, 15140122) и 5% лошадиной сыворотки (Life-Technologies, 16050-122, 1783307). Во всех наших экспериментах в питательную среду добавляли 0,1% FBS вместо 10% FBS.Мы называем эти СМИ миграционными. EGF (25 нг / мл ^-1 ) или ингибитор Akt MK2206 (2,5 мкМ) были дополнительными добавками к этой среде на основе желаемых экспериментальных условий.

Катушка Гельмгольца

Конструкция: Катушка Гельмгольца была специально разработана для применения iEF с использованием микроскопа Nikon Eclipse TE2000-U (Nikon Instruments Inc.) для создания покадровых изображений клеток, расположенных внутри шестиугольника. лунка культурального планшета (рис. 1a – c). Каркас катушки был спроектирован так, чтобы поместиться в тот же держатель многолуночных планшетов, уже изготовленный для столика микроскопа.Конденсор микроскопа ограничивал вертикальный диапазон катушки, в то время как фокусное расстояние объектива ограничивало толщину катушки. Кроме того, чтобы визуализировать клетки внутри лунок, секции змеевика были разделены для создания окон для изображения шести лунок. Это потребовало зазоров между обмотками, что привело к созданию катушки Гельмгольца, как видно на рис. 1. Прямоугольное поперечное сечение катушки было спроектировано таким образом, чтобы в ее отверстие можно было легко вставить многолуночную пластину.С этими ограничениями окончательно спроектированная катушка состояла из четырех отдельных сегментов в серии с расстоянием между смотровыми окнами 12 мм. Каждый сегмент имел высоту 22 мм и ширину 91 мм. Глубина внешнего и внутреннего сегментов составляла 18 мм и 28 мм соответственно (дополнительный рис. 11B). Каждый сегмент катушки имел ~ 10 слоев, причем внешние (дополнительный рисунок 11A, вспомогательная катушка 1 и вспомогательная катушка 4) сегменты имели 25 витков на слой, а внутренний (дополнительный рисунок 11A, вспомогательная катушка 2 и вспомогательная катушка 3) ) сегментов по 40 витков на слой.

Изготовление: Каркас змеевика был разработан в SolidWorks и напечатан на 3D-принтере с использованием акрилонитрилбутадиенстирола в качестве материала. Катушка была намотана вручную изолированным медным проводом 32 AWG (диаметр 0,202 мм). Витки были разделены, чтобы предотвратить увеличение импеданса катушки по переменному току из-за эффекта близости. Концы намотанного провода припаивались к кабелю BNC с проволочными выводами.

Характеристики: Индуктивность и сопротивление катушки были измерены с помощью измерителя LCR (Keysight U1733C) на частоте 100 кГц.Емкость была определена из измерения резонансной частоты катушки, как определено из частотной характеристики ¹¹ . Разработана простая схемотехническая модель катушки с измеренными и расчетными параметрами ¹¹ . Эта модель использовалась для определения тока проводимости через катушку Гельмгольца. Используя геометрию катушки, векторный потенциал был рассчитан в зависимости от положения и времени и аналитически дифференцирован по времени для расчета iEF.Магнитная индукция ( B ) была рассчитана с использованием ротора векторного потенциала A и расчетного тока проводимости в катушке I (t) . Расчетные значения магнитной индукции были подтверждены по результатам измерений B с использованием феррозондового датчика (Magnetic Sciences, Model # MC162). Датчик размещался в центре катушки, и след магнитной индукции регистрировался на осциллографе (Agilent DSO-X 2014A). Пиковое поле составляет ∼100 мкВ см ⁻¹ , что по крайней мере на четыре порядка меньше, чем исследовалось ранее.Поскольку рассеиваемая мощность определяется выражением σE ² , где σ – проводимость среды, а E – напряженность электрического поля, рассеиваемая мощность с нашими полями по крайней мере на 10 ⁸ порядков меньше. чем в других исследованиях, поэтому нагрев никогда не является проблемой для нашей установки.

Анализ MBDM

Дизайн: Анализ MBDM был разработан таким образом, чтобы иметь три порта, разделенных массивами параллельных микротреков длиной 700 мкм (рис.1г). Размер каждого порта составлял 50 мм × 15 мм. Клетки высевали в центральный порт, а верхний и нижний порты обозначали как порт для сбора клеток и / или порт резервуара для источника хемокинов, в зависимости от условий эксперимента. Микроканалы были разработаны с квадратным поперечным сечением 20 мкм × 20 мкм. Размеры поперечного сечения были того же порядка, что и размеры отдельных клеток, и имитировали размеры ранее существовавших микротреков, доступных для клеток in vivo ⁴² . Более того, эти миграционные пути являются репрезентативными для физиологически релевантного матриксного металлопротеиназного независимого режима миграции раковых клеток во время метастазирования ^1,2,20,58 .Двунаправленный дизайн этого анализа позволяет клеткам мигрировать в любом направлении от порта посева и обеспечивает лучшее понимание и количественную оценку направленного смещения внешних сигналов, таких как градиенты хемокинов, и направленных эффектов применяемых iEF. Большие порты для посева клеток обеспечивают равномерную плотность посева, отличную жизнеспособность клеток и повторяемость.

Изготовление: проекты масок прозрачности были созданы с помощью AutoCAD-2014, а окончательные маски были напечатаны с разрешением 25000 точек на дюйм (CAD / Art Services, OR).Для изготовления кремниевых мастеров использовался стандартный процесс фотолитографии ^59,60,61,62 , в котором слой SU-8 2025 толщиной 20 мкм (скорость вращения: 3000 об / мин; время вращения: 90 с) был нанесен центрифугированием на Пиранья очищенная силиконовая пластина для испытаний (University Wafer). Пластина с покрытием затем подвергалась воздействию УФ-света через маску прозрачности, что приводило к сшиванию фоторезиста, запечатлевшего рисунок на пластине. Мы обработали открытые пластины проявителем SU-8, который смыл мягкий несшитый SU-8, что привело к формированию на пластине отрицательного рисунка требуемой геометрии микроканалов.Затем пластину очищали раствором изопропилового спирта и пассивировали в течение 30 мин в вытяжном шкафу тридекафтор-1,1,2,2-третагидрооктил) -1-трихлорсиланом (United Chemicals Ltd, T2492-KG). Засоление пассивирует поверхность пластины и предотвращает ее прилипание к полидиметилсилоксану (ПДМС). Вся обработка до этого этапа проводилась в чистом помещении класса 100. Метод, называемый формованием реплик, был использован для получения окончательного анализа миграции на основе микротреков от силиконового мастера ⁶⁰ .Раствор 10: 1 базового эластомера и сшивающего агента PDMS (силиконовый эластомер Sylgard 184, Dow Corning Corporation) выливали на пластину, дегазировали и отверждали при 65 ° C в течение 2 часов. Отвержденный ПДМС отделяли от силиконового эталона и разрезали на квадратные кусочки размером 20 мм × 20 мм. Для изготовления посевных и сборных портов в устройствах мы пробили отверстия с помощью 4-миллиметрового биопсийного перфоратора; Затем эти устройства были окислены плазмой и необратимо связаны с отвержденным PDMS в шестилуночных культуральных планшетах. Шестилуночный культуральный планшет стерилизовали высокоинтенсивным УФ-светом, каждое устройство обрабатывали 10 мкг / мл ^-1 фибронектина и инкубировали при 37 ° C в течение 90 мин; ПДМС поглотил фибронектин и сделал поверхность способствующей прикреплению и росту клеток.

Характеристика EGF-градиента: для характеристики профиля биомолекулярного градиента в анализе MBDM, 10 кДа FITC-конъюгированный декстран использовали в качестве суррогатного флуоресцентного индикатора для EGF, который имеет молекулярную массу ~ 6 кДа ⁶³ . FITC-декстран получали в 1 × фосфатном буферном солевом растворе (PBS) до концентрации 1 мг / мл ^-1 . Посевной и нижний порты для сбора на устройстве были заполнены 1 × PBS, а верхний порт (в данном случае порт для хемокинов) был заполнен 1 мг / мл раствора FITC-декстрана ^-1 , при этом гарантируя отсутствие потока жидкости. от верхнего порта к среднему или нижнему порту, чтобы установить градиенты, основанные исключительно на массопереносе (диффузии).Затем устройство контролировали под стереомикроскопом (Nikon Instruments Inc.) в течение 12 часов с интервалами 5 минут между каждым кадром (дополнительный рисунок 2A). Затем профили градиента и коэффициенты диффузии были количественно определены с использованием численного моделирования конечного объема в COMSOL Multiphysics 5.3a и NIH ImageJ Image Processing Software (дополнительный рис. 2B – H, дополнительные уравнения 7–9).

Посев и миграция клеток: клетки промывали в культуральных планшетах 1 × раствором PBS, обрабатывали 0.05% раствор трипсин-ЭДТА (Sigma-Aldrich), а затем подсчитывают с помощью гемоцитометра. Клетки (2 × 10 ⁵ ), суспендированные в среде для миграции, высевали в средний порт (порт посева) с чрезвычайно малым потоком из портов сбора в порт посева, который уравновешивался менее чем за 15 мин. Затем клетки внутри устройств инкубировали в течение 12 часов в среде для миграции, после чего среду аспирировали и заменяли новой средой в зависимости от условий эксперимента. Для экспериментов со стимуляцией фактора роста в среду для миграции добавляли EGF (25 нг / мл ^-1 ) и вводили только в один из двух портов сбора.Устройства инкубировали еще 36 часов в питательной среде и обновляли каждые 12 часов. Затем миграцию клеток наблюдали с помощью покадровой камеры в камере с живыми клетками в течение 12 часов. В случае экспериментов с ингибитором Akt в среду добавляли 2,5 мкМ MK2206 непосредственно перед 12-часовым промежутком времени.

Анализ миграции через лунки.

Проницаемые опоры Transwell, которые имеют вставки из поликарбонатной мембраны диаметром 6,5 мм с размером пор 8 мкм (Corning, CLS3422), были использованы в описанных здесь экспериментах.Каждую вставку Transwell покрывали 80 мкл 10 мкг раствора фибронектина ^-1 (в 1 × PBS, Corning Inc., 354008) и оставляли сушиться на 12 часов. Одновременно клетки голодали по сыворотке в среде для миграции в течение 12 часов. После этого этапа клетки удаляли с использованием 0,05% раствора трипсина-0,02% EDTA (Sigma-Aldrich, 59417 C) и обрабатывали исключительно в среде для миграции. Были приготовлены клеточные суспензии с концентрацией 1 × 10 ⁶ клеток, мл ^-1 и 150 мкл этой среды (1.5 × 10 ⁵ клеток) помещали в верхнюю камеру каждой вставки Transwell, а нижнюю камеру заполняли 600 мкл миграционной среды или миграционной среды с добавлением EGF (100 нг / мл ^-1 EGF). Через 8 ч клетки фиксировали с использованием стандартного набора растворов HEMA 3 (Fisher Scientific, 23-123869) и отображали с помощью стереомикроскопа (Leica Microsystems Inc.). Затем количественно оценивали числа миграции клеток с использованием настраиваемого сценария MATLAB, как описано в разделе «Получение и обработка изображений».Миграция клеток без факторов роста и без iEF служила контролем, и все другие условия были нормализованы по отношению к этим контролям.

Иммунофлуоресценция

Визуализация F-актина в анализе микрожидкостных двунаправленных микротреков: клетки в устройствах фиксировали в 3,7 (вес. Объем ^-1 ) растворе параформальдегида в течение 30 мин. Затем их трижды промывали 1 × PBS. Для мечения F-актина мы блокировали клетки на 60 мин в блокирующем буфере (0.1% Triton-X и 5% ослиной сыворотки в 1 × PBS). Затем клетки обрабатывали фаллоидином, конъюгированным с Alexa Fluoro® 488 или 555, в течение 60 минут (1:40, ThermoFisher) с последующей промывкой 1 × PBS (три раза по 10 минут каждая). Наконец, ядра метили 4 ‘, 6-диамидино-2-фенилиндолом (DAPI) (1: 5000, Sigma-Aldridge, D9542). За маркировкой ядер следовала последняя промывка 1 × PBS (три раза по 10 мин каждая), и устройства оставляли на ночь в 1 × PBS при 4 ° C.

Иммунофлуоресцентное окрашивание EGFR и F-актина: В этих экспериментах 1 × 10 ⁴ клеток культивировали на покрытых фибронектином (10 мкг / мл ^-1 ) предметных стеклах № 1 размером 22 мм.Клеткам давали возможность прикрепиться в течение 12 часов в среде для выращивания. Затем клетки голодали по сыворотке в среде для миграции еще на 12 часов. Затем среду заменяли свежей средой для миграции. Для случаев, получавших EGF, в среду для миграции добавляли 25 нг / мл ^-1 EGF. Затем клетки инкубировали с или без iEF в течение 12 часов. Клетки фиксировали 3,7% (по массе ^-1 ) раствором параформальдегида в течение 20 минут, а затем трижды промывали 1 × PBS (по 5 минут каждый). Затем мы заблокировали клетки на 60 минут, используя блокирующий буфер (0.1% Triton-X 100, 5% козьей сыворотки в 1 × PBS). Образцы клеток обрабатывали первичным антителом к ​​EGFR (1: 1000, MA5-13319, Thermo-Fisher, разбавленным блокирующим буфером) и оставляли на ночь при 4 ° C. Затем мы трижды промывали образцы клеток 1 × PBS с добавлением 0,1% Tween-20 (1 × PBST) в течение 15 минут каждый. Затем мы добавили вторичное антитело (Anti-Rabbit Alexa Fluro®488, 1: 2000 в блокирующем буфере) и хранили клетки в темноте при комнатной температуре в течение 60 минут с последующими тремя промывками 1 × PBST по 15 минут каждое.Мы использовали реагент ActinRedTM 555 ReadyProbes® (Thermo-Fisher) в соответствии с инструкциями производителя для маркировки цитоскелета F-актина. Затем мы трижды промывали образцы 1 × PBST по 15 мин каждый. Наконец, ядро ​​клетки окрашивали DAPI (Sigma-Aldrich, 1: 5000 в деионизированной воде, D9542), и образцы трижды промывали 1 × PBST в течение 15 минут каждый. Затем мы установили образцы с помощью Fluoromount-G® (Southern Biotech), дали им высохнуть в течение ночи при комнатной температуре, а затем визуализировали их с помощью LSM 700, лазерного сканирующего конфокального микроскопа высокого разрешения (ZEISS Instruments Inc.).

Вестерн-блот

Для этих экспериментов мы высевали 1 × 10 ⁶ клеток на лунку в шестилуночные планшеты в среде для выращивания на 12 часов, а затем на среду для миграции еще на 12 часов. Свежая миграционная среда была добавлена ​​в три верхние лунки в каждом планшете (1, 2 и 3), в то время как EGF (25 нг / мл ^-1 ) и дополнительная миграционная среда были добавлены в три нижних лунки (4, 5 и 6). Затем один из шестилуночных планшетов, содержащих клетки, обрабатывали iEF в течение 12 часов. Сразу после обработки планшеты помещали на лед и затем каждую лунку трижды промывали 1 × трис-буферным физиологическим раствором (TBS, Corning Inc.) решение. TBS отсасывали и в каждую лунку добавляли 1 мл ледяного буфера для анализа радиоиммунопреципитации (RIPA) с добавлением ингибитора протеазы и ингибитора фосфатазы. Клетки соскабливали с помощью холодного пластикового скребка для клеток и суспензию клеток переносили в предварительно охлажденную микроцентрифужную пробирку. Затем суспензию клеток центрифугировали при 15000 об / мин в течение 20 мин в центрифуге с предварительным охлаждением при 4 ° C. Центрифужные пробирки помещали на лед, а супернатанты переносили в свежие пробирки и хранили на льду.Осадок на дне каждой микроцентрифужной пробирки отбрасывали. Белок в каждой пробирке оценивали относительно стандартного раствора бычьего сывороточного альбумина (BSA) (1,42 мг / мл ^-1 ) с использованием набора для анализа белков DC ^TM Protein Assay Kit II (Bio-Rad, 500-0112). Затем мы собрали 50 мкг общего белка, смешанного с 10 мкл красителя (Invitrogen, NP0007) и 5 ​​мкл восстанавливающего агента (Invitrogen, NP0009) из каждого условия, и загрузили его в гель с градиентом 4–12 (Invitrogen, NP0335BOX). Затем мы поместили гель в рабочий буфер (Invitrogen, NP0001, разведение 1:20 в деионизированной воде) при 120 В на ~ 2 часа.Затем гели помещали в буфер для переноса (Tris / Glycine Buffer, Bio-Rad, 161-0771 ––, разбавленный до 1x 20% метанолом в деионизированной воде) на 5–10 мин, после чего готовили сэндвич для переноса. Сэндвич помещали в передаточный резервуар и прогоняли при 18 В в течение 90 мин. Затем блот промывали 1 × TBST (1 × TBS с 0,1% Tween-20) трижды по 15 мин каждый. Блот блокировали 5% BSA в растворе TBST в течение 1 ч при комнатной температуре. Первичные антитела p-EGFR (1: 1000, Cell Signaling Technology, 4407S, 3777S), p-Akt (1: 2000, Cell Signaling Technology, 9271S), p-FAK (1: 1000, Thermo-Fisher, 700255), т. -EGFR (1: 200, Санта-Крус, sc-03-G), t-Akt (1: 200, Санта-Крус, sc-8312), t-FAK (1: 1000, Cell Signaling Technology, 3285 S) и Затем готовили GAPDH (1: 1000, Cell Signaling Technology, 5174S) в блокирующем растворе (5% BSA в TBST) и оставляли на ночь на качалке при 4 ° C.Мы промывали блоты трижды по 15 мин каждый 1 × TBST раствором. Вторичные антитела (1: 2000, GE Healthcare, LNA934V / AH) получали в блокирующем растворе, и блоты обрабатывали раствором вторичных антител в течение 2 часов при комнатной температуре с последующими тремя 15-минутными промывками раствором TBST. Затем блоты обрабатывали в темноте субстратом для вестерн-блоттинга Pierce® ECL (Thermo Scientific, 32209) в течение 5 минут и затем проявляли с использованием стандартного раствора в рентгеновской комнате в соответствии с протоколом, предоставленным производителем.

Получение и обработка изображений

Цейтраферные видео: Цейтраферные видео были получены с помощью микроскопа Nikon Eclipse TE2000-U (Nikon Instruments Inc.) с 5-минутными интервалами между изображениями в течение 12 часов с использованием 10-кратного объектива (Рис. . 1b). Встроенный инкубатор поддерживал уровни CO ₂ на уровне 5% и температуру 37 ° C в течение всего эксперимента. Цейтраферные видеоролики были проанализированы с использованием плагина MtrackJ ⁶⁴ в Фиджи ⁶⁵ для определения средней скорости ячеек, пройденного расстояния и данных смещения.

Анализ миграции Transwell: Изображения из экспериментов с использованием анализов миграции Transwell были получены с использованием стереомикроскопа (Leica Microsystems Inc.) после фиксации и окрашивания клеток с использованием набора растворов HEMA 3 (Fisher Scientific). Изображения были сделаны с таким увеличением, чтобы вся мембрана Transwell находилась в кадре. Затем изображения были импортированы в MATLAB и проанализированы с использованием специального кода (сценарий MATLAB) (см. Дополнительную информацию). Скрипт разбивает изображения на компоненты RGB и использует метод Оцу ⁶⁶ для установки пороговой интенсивности фона, чтобы ячейку можно было отличить от фона, используя инверсию зеленого канала.Все группы пикселей с связностью не менее восьми пикселей были идентифицированы как отдельные объекты. Чтобы учесть кластеризацию ячеек, площадь каждого объекта была разделена на среднюю площадь ячейки. Среднюю площадь клетки определяли по среднему значению ручных измерений ~ 20 изолированных клеток для каждого случая. Подсчет из каждого кластера был округлен до ближайшего целого числа и суммирован для получения общего количества ячеек. Все нанесенные на график значения нормализованы к контрольным условиям для каждого случая.

Иммунофлуоресценция актина в анализе MBDM. Иммунофлуоресцентные изображения актина получали с использованием эпифлуоресцентного микроскопа Nikon TE200 (Nikon Instruments Inc.) под 20-кратным объективом. Иммунофлуоресцентные изображения были количественно определены с использованием пользовательских сценариев MATLAB (дополнительная информация). Пользовательский скрипт MATLAB вычисляет геометрический центр для отдельной ячейки, то есть среднее арифметическое местоположений всех пикселей, составляющих область ячейки. Затем было вычислено расстояние от этого геометрического центра и угол (0 ° ≤ θ ≤ 360 °) каждого пикселя относительно горизонтальной оси ( θ = 0 °).Затем ячейка была разделена на 360 равных секторов, каждый с углом сектора 1 °. \ alpha I_k}, $$

где J – момент интенсивности для отдельного бина, N – общее количество пикселей в бине, r _k – расстояние пикселя k от центроида, α – весовой коэффициент (соотношение сторон ячейки), а I _k – интенсивность пикселя k .Наконец, все 360 отдельных интервалов нормализованы относительно максимального значения суммированных моментов, и нормализованное значение для каждого сектора нанесено на единичный круг, дающий визуальное и количественное представление распределения внутриклеточного актина. Индекс, называемый здесь PR, используется для определения того, распределяется ли внутриклеточный актин предпочтительным образом. PR определяется как отношение количества появлений высоких (≥0,8) нормированных суммарных моментов интенсивностей в секторах 75 ° ≤ θ ≤ 105 ° и 255 ° ≤ θ ≤ 285 °, к общему количеству случаев высокого (≥ 0.\ circ} {N_ \ theta (\ underline J \ left (\ theta \ right)> 0.8) \ ge 1.} \) Таким образом, PR, равный 1, означает, что весь внутриклеточный F-актин в первую очередь локализован в ведущей и / или задние края ячейки, тогда как значение 0 указывает на отсутствие локализации на переднем и заднем краях. PR 0,167 предполагает равномерное распределение актина по клетке. С использованием этого подхода были проанализированы только единичные изолированные клетки, которые мигрировали внутри каналов.

Иммунофлуоресцентное окрашивание EGFR и F-актина: изображения получали с помощью лазерного сканирующего конфокального микроскопа LSM700 (Carl Zeiss Microscopy GmbH., Германия) с масляным объективом 63 ×. Мощность лазера регулировалась путем установки входного напряжения на лазерный источник на 5,0 В, а усиление было установлено на 550 (канал DAPI, ядро), 600 (Alexa Fluor® 488, EGFR) и 600 (Alexa Fluor® 555, Actin). для всех образцов.

Вестерн-блоттинг: Вестерн-блоттинг лизатов проводили, как описано ранее. ⁶⁷ . Отсканированные изображения пятен были импортированы в Fiji ⁶⁵ и преобразованы в 8-битное изображение в оттенках серого. Был нарисован ограничивающий прямоугольник, который охватывал блот наибольшего размера, и измерялась необработанная интенсивность блоттинга в индивидуальных условиях.Необработанную интегральную интенсивность измеряли и нормализовали в каждом состоянии для каждого отдельного белка. Этот процесс также был выполнен для управления загрузкой, которым в данном случае был GAPDH. Затем рассчитывали отношение нормализованных значений белка к нормализованному значению GAPDH для этого состояния.

Статистика и воспроизводимость

Сначала мы проверили для каждого случая, следовало ли распределение средней скорости миграции и персистенции клеток для различных условий для трех клеточных линий нормальному распределению, используя критерий нормальности Шапиро-Уилка, где p – значение <0.05 считалось пороговым для того, чтобы считать набор данных искаженным и нераспространяемым. Было обнаружено, что все наборы данных для скорости и стойкости не соответствуют нормальному распределению. Этот анализ был выполнен в пакете IBM SPSS Statistics 25.

Затем мы сравнили выборочные популяции на средние скорости миграции и персистентность клеток с помощью теста Краскела-Уоллиса (тем самым сняв требование о нормальном распределении набора данных) с последующими попарными сравнениями в случае, если нулевая гипотеза была отклонена, когда p -значение было <0.05. Статистические данные теста были скорректированы на ничьи. Для клеточных линий MDA-MB-231 и MCF10CA1a у нас было 11 степеней свободы (степеней свободы). В случае клеточной линии MCF10A у нас было 5 степеней свободы (IBM SPSS Statistics 25).

Для клеток MDA-MB-231 и MCF10CA1a этот тест привел к отклонению нулевой гипотезы о том, что распределение средних скоростей миграции было одинаковым во всех условиях ( p = 0,000). За этим последовало апостериорное тестирование, при котором значения значимости были скорректированы с помощью поправки Бонферрони для нескольких тестов, где статистические данные теста также были скорректированы с учетом связей.Точки данных на прямоугольных диаграммах представляют минимальное значение, 1-й квартиль, медиана, 3-й квартиль и максимальное значение для каждого условия. Это также верно для клеточной персистенции для обеих этих клеточных линий ( p = 0,000 для теста Краскела-Уоллиса). Было обнаружено, что распределение скоростей и персистентности клеток различается в зависимости от условий для клеток MCF10A, поскольку значение p , как сообщалось, составляло 0,000 для независимых образцов теста Краскела-Уоллиса. За этим последовало апостериорное тестирование, при котором значения значимости были скорректированы с помощью поправки Бонферрони для нескольких тестов, где статистические данные теста также были скорректированы с учетом связей.Опять же, значение p <0,05 считалось порогом статистической значимости (IBM SPSS Statistics 25).

Вестерн-блот анализ включал односторонний дисперсионный анализ с последующим апостериорным непарным двусторонним тестом Стьюдента t . Значение p <0,05 использовали в качестве порога статистической значимости. Точки данных на рисунках представляют собой средние значения, а полосы ошибок отображают стандартную ошибку среднего (SEM). Во всех случаях степенями свободы для дисперсионного анализа было три со значением F <0.0001.

Сравнения внутриклеточного распределения актина были выполнены с помощью теста Краскала-Уоллиса для независимых выборок. Нулевая гипотеза о том, что распределение PR было одинаковым для всех обработок, была отклонена, если значение p было <0,05, которое использовалось в качестве порога статистической значимости. За этим анализом последовало апостериорное тестирование, в котором значения значимости были скорректированы с помощью поправки Бонферрони для нескольких тестов, где статистические данные теста также были скорректированы с учетом связей.Точки данных на прямоугольных диаграммах представляют минимальное значение, 1-й квартиль, медиана, 3-й квартиль и максимальное значение для каждого условия. Для клеток MDA-MB-231 значение p , равное 0,016, было рассчитано для независимых выборок критерия Краскела-Уоллиса с 5 степенями свободы. Для клеток MCF10CA1a значение p , равное 0,008, было рассчитано для независимых выборок в тесте Краскела-Уоллиса с 5 степенями свободы. Для клеток MCF10A значение p , равное 0,636, было рассчитано для независимых выборок в тесте Краскела-Уоллиса с 2 степенями свободы (клетки не мигрируют и не входят в каналы в отсутствие градиентов EGF).Этот анализ проводился с использованием пакета IBM SPSS Statistics 25.

Для анализа через лунки распределение популяции для различных обработок сначала было протестировано с помощью однофакторного теста ANOVA, за которым последовал апостериорный метод Tukey – Kramer HSD. Для клеток MDA-MB-231 и MCF10CA1a степень свободы была 5, а значение F было <0,0001. Для клеток MCF10A степень свободы была 3, а значение F снова было <0,0001. Для апостериорного метода HSD Тьюки – Крамера для попарного сравнения p -значение <0.05 использовался в качестве порога статистической значимости. Этот анализ был выполнен в JMP 14 Pro (SAS).

Краткое изложение отчета

Дополнительная информация о дизайне исследования доступна в Резюме отчета об исследовании природы, связанном с этой статьей.

(PDF) Бесконтактный метод управления электротаксисом

www.nature.com/scientificreports/

11

НАУЧНЫЕ ОТЧЕТЫ | 5: 11005 | DOI: 10.1038 / srep11005

e клетки инкубировали в EGF (100 нг / мл) в течение 1 часа в присутствии или в отсутствие индуцированного электрического поля.Затем клетки промывали ледяным PBS и фиксировали 4% параформальдегидом.

Далее клетки проницались с помощью 0,1% тритона Х-100 в течение 15 минут и окрашивали фаллоидином, конъюгированным с флуорофором Alexa Fluor 568 (1: 300X) (Molecular Probes) в течение 1 часа. Наконец, клетки

были закреплены на жесткой установочной среде VECTASHIELD с DAPI (Vector labs) и визуализированы

с использованием конфокального микроскопа Olympus FV1000.

Статистический анализ.Для достижения статистической значимости в некоторых случаях было проведено три независимых эксперимента

, состоящих из 3 лунок каждый, и репрезентативные данные представлены здесь. В остальных случаях проводили два независимых эксперимента

, состоящие из двух скважин. Данные были рассчитаны как среднее ± стандартное отклонение.

Средние значения групп сравнивались с использованием t-критерия Стьюдента, и p <0,05 считалось значимым.

Статистический анализ выполнен с помощью Microso excel (Microso Corporation, США).Статистическая значимость –

разрушение обозначено на рисунках как «*» (0,01 ≤ p <0,05), «**» (0,001 ≤ p <0,01) и «***» (p <0,001). Где указаны размеры выборки

(N), они обозначают результаты независимых экспериментов. Например, N = 3

относится к трем независимым экспериментам по измерению миграции, например, на «севере» и включает

3 скважины на этой стороне змеевика.

Ссылки

1. Dineur, E. Note sur la sensibilite des leucocytes a l’electricite.Bulletin des Seances Soc. Belge de Microscopie (Брюссель). 18,

113–118 (1892).

2. Nuccitelli, . Роль эндогенных электрических полей в заживлении ран. Curr. Верхний. Dev. Bio. 58, 1–26 (2003).

3. Коэн Д. Дж., Нельсон В. Дж. И Махарбиз М. М. Гальванотаксический контроль коллективной миграции клеток в монослоях эпителия. Nat.

материалы 13, 409–417 (2014).

4. Sato, M. J. et al. Взаимосвязь входа-выхода в гальванотактическом ответе клеток Dictyostelium.Биосис. 88, 261–272 (2007).

5. Huang, Y-J., Samorajsi, J., reimer,. И Сирсон, П. К. Влияние электрических полей и соединений на подвижность клеток. PLoS

ONE 8, 1–9 (2013).

6. Li, J. & Lin, F. Микрогидравлические устройства для изучения хемотаксиса и электротаксиса. Тенденции Cell Bio. 21. С. 489–497 (2011).

7. Song, B. et al. Применение электрических полей постоянного тока к клеткам и тканям in vitro и модуляция электрического поля раны в

vivo.Nat. Протокол 2, 1479–1489 (2007).

8. Wu, D., Ma, X. & Lin, F. Электрические поля постоянного тока направляют миграцию клеток рака молочной железы, индуцируют поляризацию EGF и увеличивают внутриклеточный уровень ионов кальция

. Cell Biochem. Биофиз. 67, 1115–1125 (2013).

9. Мессерли, М. А. и Грэм, Д. М. Внеклеточные электрические поля для прямого заживления и регенерации ран. Биол. Бык. 221, 79–92

(2011).

10. Аллен Г. М., Могильнер А. и Шериот Дж.A. Электрофорез компонентов клеточной мембраны создает направленный сигнал, направляющий

гальванотаксис фератоцитов. Cur r. B io. 23. С. 560–568 (2013).

11. Hart, F. X., Laird, M., iding, A. & Pullar, C. E. Гальванотаксис кератиноцитов в комбинированных электрических полях постоянного и переменного тока поддерживает электромеханический механизм измерения трансдукции

. Биоэлектромагнетизм 34, 85–94 (2013).

12. Кортезе Б., Палама И. Э., Д’Амон С. и Джильи Г. Влияние электротаксиса на поведение клеток.Интегр. Биол. 6. С. 817–830 (2014).

13. Hulower, . И. и Гербер, . L. Анализ миграции клеток и инвазии как инструменты для открытия лекарств. Фармацевтика 3, 107–124 (2011).

14. ramer, N. et al. Анализы миграции и инвазии клеток in vitro. Mut. es. 752, 10–24 (2013).

15. Бойден, С. Хемотаксический эффект смесей антитела и антигена на полиморфно-ядерные лейкоциты. J. Exp. Med. 115,

, 453–466 (1962).

16. ostic, A., Lynch, C.Д. и Шитц, М. П. Дифференциальная реакция жесткости матрикса в клеточных линиях рака молочной железы коррелирует с тропизмом ткани

. PLoS ONE 4, 1–11 (2009).

17. Soule, H. D. et al. Выделение и характеристика спонтанно иммортализованной линии эпителиальных клеток молочной железы человека, MCF-10.

Рак. 50, 6075–6086 (1990).

18. Nasser, M. W. et al. Перекрестная связь между хемоинцептором CXC4 и каннабиноидным рецептором CB2 в модуляции груди

Рост и инвазия рака.PLoS ONE, 6, e23901 (2011).

19. oussos, E.T., Condeelis, J.S., Patsialou, A. Chemotaxis in рака. Nat. Ev. Рак 11, 573–587 (2011).

20. Müller, A. et al. Участие хемо-рецепторов в метастазировании рака груди. Nat. 410, 50–56 (2001).

21. im, B.J. et al. Кооперативные поля градиентов SDF-1α и EGF на миграции опухолевых клеток, выявленные с помощью надежной 3D Microuidic

Model. PLoS ONE 8, 1–9 (2013).

22. Duda, D. G. et al.Ингибирование пути CXCL12 (SDF1α) -CXC4 / CXC7: новый сенсибилизатор для противоопухолевой терапии? Clin.

Рак. 17. С. 2074–2080 (2011).

23. Poujade, M. et al. Коллективная миграция эпителиального монослоя в ответ на модельную рану. PNAS 104, 15988–15993 (2007).

24. Лян, К. К., Пару, А. Ю. и Гуан, Дж. Л. Анализ царапин in vitro: удобный и недорогой метод анализа миграции клеток.

in vitro. Nat. Протокол 2, 329–333 (2007).

25. Banerjee, J. et al. Улучшение миграции человеческих фератиноцитов с помощью окислительно-восстановительной биоэлектрической повязки. PLoS ONE 9, e89239,

1–14 (2014).

26. Кирсон, Э. Д. Чередование электрических полей останавливает пролиферацию клеток в моделях опухолей животных и опухолях головного мозга человека. PNAS 104,

10152–10157 (2007).

Благодарности

Эта работа была частично поддержана грантами NIH / NCI R01 (CA109527 и CA1534902) R.K.G, Pelotonia

Fellowship to D.A, премия IBM Faculty Award (V.S.), учрежденная доктором Т.К. Чен и кафедрой

машиностроения и аэрокосмической техники под руководством профессора А. Селамет в Университете штата Огайо

(В.С., Дж. У., Т. Дж., Е. С., Дж. Дж., А. К.). Благодарим за полезные обсуждения с профессором Дж. Сонгом и Д. Сваминатаном.

Вклад авторов

Концептуальный план экспериментов был разработан V.S., J.W., E.S., M.N., D.A., and R.G. Стеклянные колодцы на заказ

были изготовлены Т.Катушки были изготовлены J.W. и Э. Держатели для проб были

, разработанные и изготовленные А.К. и J.J. Измерения токов катушек были выполнены T.J. и

Albany Democrat-Herald из Олбани, штат Орегон, 21 мая 1975 г. · 2

RlbanylDcnuicrat-ftralD. Стр. 2, среда, 21 мая 1975 г. АЛЕНДАРЬ i Сегодняшние события 18:30. – Mavericks (Одинокий взрослый! Старше 211, Подземелье Башни. MlONESeconc St .. Corvallis 18:30 PM Ready Roamers Good Sam Club, обед на обед.Хизер Дал (зал отдыха Mobile Park. 950 S Airport Road 6 45 pm – Ливанский деловой и профессиональный женский клуб, ужин по установке. Ресторан DarreU. 1890 S Santiam Hwy. Ливан 19:00 Окружной совет директоров начальной школы McFarland, в школе. Rt. I Коробка 76. Касательная 7 (в 22:30 Торговцы при лунном свете; в 19:30 Общество Одюбона в Корваллисе. Программа и выборы должностных лиц. Первая объединенная пресвитерианская церковь, юго-западная Восьмая улица и Монро-авеню. ‘балетная программа, аудитория средней школы Ливанского союза.17:00 Пятая улица, Ливан, 19:30. Встреча по интересам молодых домохозяек. «Готовим в кемпинге». Аудитория пристройки к зданию суда округа Линн. Четвертая авеню и улица Бродалбин, 19:30 – Laurel Club. Кэтрин Арландсон дома. 618 S. Montgomery St. 8 вечера Ветераны зарубежных войн. Linn Post и вспомогательные, установка офицеров. Зал VFW на шоссе 20. 20:00 – Олбани Джейсис, административное здание Мемориального парка Тимбер Линн Мероприятия в четверг 9:00 – Мужской бассейн, Центр для пожилых людей. 432 S Ferry St 9 а м – Квилтинг.Центр пожилых людей. 432 S Ferry St 9:30 утра – Весонаблюдатели. Кленовая лужайка. 1950 E Salem Ave 10 a m – Изучение Библии для женщин Добрых пастырей. Дом Альверны Клеланд. 2470 SW 34th Ave 10a m io2pm – Ремесла и мастерская для слепых и слабовидящих. Американский Красный Крест округа Линн. 3388 S. Pacific Blvd с 10:30 до 11:15 утра. – Сказочный час. Городской филиал публичной библиотеки Олбани. 302 S Ferry St, 12:30 – клуб «Going Like Sixty», обед. Первая объединенная методистская церковь. 1890 S Вторая ул. Ливанская программа: гавайские фильмы и музыка Джойс Питерс из Портленда с 1:15 до 14:00 – Час рассказов.Публичная библиотека Олбани. 1390 S Waverly Drive 13:30 – Драма. Центр для пожилых людей, 432 S Ferry St. Mountaineer устраивает беседу OSU на горе. Эверест КОРВАЛЛИС-Уильям Ф. Ансулд, бывший преподаватель Университета штата Орегон, который был членом первой американской команды, поднявшейся на гору. Эверест обсудит альпинизм в пятницу в OSU. Его публичный доклад «Восхождение на Эверест и задачи экспедиции» начнется в 15:00. в аудитории домоводства. Ансоелд много лазил по Каскадным хребтам в Орегоне и Вашингтоне, Тетонам, долине Йосемити и в Гималаях.Он работает на факультете Государственного колледжа Эвергрин в Олимпии, штат Вашингтон. Он работал на факультете ОГУ с 1958 по 1962 год. Шкаф для одежды Altrusa, с 9:30 до 11:30 в четверг, ул. С. Лайон, 230. Позвоните миссис Роберту Биллу. для вечерних свиданий. терапия Бассейн для артрита и других заболеваний опорно-двигательного, 4:30 часа дня Четверг, бассейн средней школы Союза Ливана. Пятая улица и аэропорт-роуд, Ливан. Весонаблюдатели, 18:30. Четверг, Maple Lawn Place, 1950 E.Salem Ave. Снимайте фунты разумно, № 19, 19:00, четверг, 855 S.Камерный клуб Чикаго Сент-Олбани, 19:30. Четверг, Публичная библиотека Олбани. 1390 С. Уэйверли Драйв. Albany Camera Club, 19:30. Четверг, Публичная библиотека Олбани, 1390 С. Уэйверли Драйв. Программа: «Этюд в кривых» и «Рассказать историю». Молитвенный завтрак мэра, 7 утра, пятница, T & amp; Ресторан R, 3410 SE Spicer Road. Джек Кейкендалл будет говорить. Социальный клуб пожилых людей Олбани, пятница, 10:00, Центр для пожилых людей, 432 S. Ferry St. rs n: Карьерное образование Фотографии сотрудников Ted Blackmail Все эти взгляды были вознаграждены. Очки школьников класса Hamilton Creek squiniea mio mesaay s Dngni sunsnine, luunmg iur ‘–V! маленький самолет, который играл в прятки с несколькими пушистыми облаками.Но их терпение было вознаграждено – двое студентов Университета штата Орегон спустились на парашютах и ​​приземлились на школьной площадке I в Ливане. Воздушный показ также включал краткий облет вертолета. Он был наложен на то, чтобы завершить карьерные исследования старших школьников в этом учебном году. – Студенты визжат на авиашоу ЛЕВАН – Сотни маленьких глазок прищуриваются от яркого солнца, когда они ищут почти безоблачное небо. “Вот оно!” завизжали десятки голосов, почти в унисон. «Это» был крошечный самолет, круживший все выше и выше над начальной школой Гамильтон-Крик во вторник.Студенты собрались на детской площадке, чтобы посмотреть завершающий показ лекции о парашютном спорте – парашютисты. Они не были разочарованы. По расписанию два парашютиста из Университета штата Орегон спустились на территорию школы, вызвав давку, когда ученики мчались по траве, чтобы лучше рассмотреть. Дик Свит, учитель седьмого класса в Гамильтон-Крик, организовал показ парашютного спорта и выступил в завершение учебной программы года для студентов. Джо Грэм, инструктор по парашютному спорту в штате Орегон, показал оборудование для прыжков с парашютом и фильм о радостях свободного падения с сотен футов.Два парашюта, развернутые в школьном спортзале, показали, насколько большие нейлоновые купола на самом деле и насколько они прочны. Грэм бросил вызов 20 студентам, которые держали раскрытый парашют, словно гигантское одеяло, попытаться его разорвать. Они не могли. Когда студенты нежились на солнышке и оправлялись от волнения, наблюдая за парашютистами, прибыла их вторая авиационная выставка. Вертолет из центра полетов в Олбани пролетел над школой, ненадолго завис, затем увеличился для еще одного прохода на низком уровне, прежде чем улететь в сторону Олбани.Когда все закончилось, Рон МакОлифф, директор школы, заложил руки под подбородок и пробормотал: «Спасибо за солнечный свет». Всего за 24 часа до этого местность прокатилась под дождем, холодным ветром и градом. Ливанские студенты выиграли стипендии на государственном соревновании по шахматам. ЛИВАН. Шахматные ученики из средней школы Ливанского союза выиграли стипендии и расстроили национального эксперта на 10-м ежегодном молодежном индивидуальном чемпионате штата Орегон по шахматам в прошлые выходные в Юджине. А команда из Foster Grade School школьного округа Sweet Home заняла пятое место в турнире.Пол Ньюбери, ученик средней школы Lebanon Union High, расстроил Джеймса Бричера, эксперта с национальным рейтингом. Шахматный рейтинг Ньюбери составляет 1448, а рейтинг Брикера – 2020. Ньюбери занял третье место в турнире среди школьных трофеев. Он и Линдон Т. Джонс делят с двумя другими игроками третье место в ряде игр, выигранных во время турнира. У всех четырех было четыре победы, одно поражение и ни одной ничьей. Каждый получил стипендию Национального банка штата Орегон США. Команда начальной школы Фостера выиграла 94 матча из 20 возможных и стала единственной командой начальной школы, которая заняла окончательное место.Члены команды – Гэри Хаммер. Марк Лерой Дэвид, Перри Санелли и Рэйлин Паулюс. Мисс Паулюс была единственной девушкой на турнире, в котором приняли участие 48 учеников из 15 школ. Шестиклассники Фостера забрали все три трофея начальной школы. Дэвид победил первым, победив двух учеников старших классов и одного ученика старших классов. Hummer обыграл трех учеников средней школы и занял второе место, в то время как Санелли победил двух учеников средней школы и занял третье место вничью. Исследование исследует дефекты кристаллов. CORVALLIS – Большие кристаллы, некоторые из которых совершенно бесцветные, а некоторые красиво окрашены, являются центром химических исследований Университета штата Орегон, которые имеют замечательное отношение к электронике.Аллен Б. Скотт руководит исследованиями с 1961 г. на гранты Национального научного фонда. «Свойства твердотельных материалов, используемых практически во всех электронных устройствах, от телевизоров до компьютеров, часто зависят от контроля срока службы и подвижности электронов. Эти характеристики часто определяются количеством и эффективностью пятен в кристалле, которые могут улавливать электроны и удерживать их в течение некоторого времени », – объяснил Скотт. «Кристаллы галогенидов щелочных металлов уже давно представляют теоретический интерес из-за их сравнительно простой структуры.Кроме того, они имеют практическое применение в качестве детекторов излучения и оптических элементов. Их способность хранить огромные объемы информации в небольшом объеме с помощью улавливания электронов открывает перспективы для ряда сложных приложений. «Наше исследование направлено на ответ на вопрос: как дефекты в кристаллах захватывают электроны с током?» В лаборатории Скотта наиболее интересными кристаллами являются обычная соль (хлорид натрия) и хлорид калия. По словам Скотта, большие кристаллы (размером с мяч для гольфа) можно легко вырастить с хорошим качеством и чистотой.В отличие от многих других технических материалов, в чистом виде они совершенно бесцветны. Изучаемые электроны вводятся в кристалл либо путем нагревания в парах металла, либо путем инжекции острого металлического электрода под высоким напряжением. В результате получается интенсивный фиолетовый цвет для хлорида калия, красный или синий для обычной соли. «Захваченные электроны сильно поглощают видимый свет, цвет которого зависит от природы ловушки», – заметил Скотт. «Многому можно научиться, отслеживая изменения цвета во время воздействия света или термообработки, поскольку с помощью таких схем часто можно заставить электроны перепрыгивать с одной ловушки на другую.”Недавно Алан Томпсон, научный сотрудник, измерил очень небольшие электрические токи, генерируемые, когда электроны на мгновение освобождаются из своих ловушек светом. Используются короткие импульсы (длиной около миллиардной доли секунды) ультрафиолетового света. около одной сотой секунды, анализируются с помощью быстрого осциллографа и дают как время, в течение которого электроны свободны, так и скорость, с которой они движутся. Другой тип экспериментов включает использование примесей для влияния на концентрацию ловушки.два докторанта, Роб Боуэн и Эстер Ли, начинают эксперименты с хлоридом калия, содержащим небольшое количество (около одной части на миллион) оксида. Предыдущая работа в лаборатории Скотта и в Германии предсказывает, что эта примесь должна иметь сильное влияние на электрическую проводимость как неокрашенной, так и окрашенной соли. В средней долине получает стипендию Сотрудник фанерного завода в Олбани компании Simpson Timber Co. получил от компании стипендию в размере 800 долларов. Блейн Л.Bennett, Jr., 29, 2807 S. Oak St .. получит от компании стипендию Марка Э. Рида. Беннетт учится в Университете штата Орегон в Корваллисе и является старшим в области делового администрирования. Следующей осенью он планирует приступить к работе над получением степени магистра. участники мужского хора и певец на роль мясника Лазаря Вольфа. Желающие должны присутствовать на репетициях сегодня в 7:30 в здании школы Святой Марии. 25-я улица и Тайлер-авеню, или четверг в Первой христианской церкви, Седьмая улица и Мэдисон-авеню.Членам хора должно быть от 20 до 30 лет. Спектакль открывается 16 июня в средней школе Crescent Valley. Режиссер Поль Сантос. 1607 NW Beca St., можно связаться для получения дополнительной информации. Ищет певцов-мужчин. Отзывы разрешают CORVALLIS – Для постановки спектакля “Fiddler on the Roof” Театром Corvallis Barn требуется ЛИВАН – Разрешение на сброс сточных вод для фанерного подразделения компании Champion Mid-Valley. Отчет по общественной безопасности Пожар, скорая помощь бежит (с утра вторник до сегодняшнего дня) ОЛБАНИ СКОРОЙ ПОМОЩИ 8, вторник, 44 часа утра – больница общего профиля Олбани – мемориальное отделение больницы Салема, один человек, переезд. Работает I час 34 минуты 10:53 вторник – 925 E Second Aveпоездка без пациентов Работает 47 минут 12:18 Вторник – North Albany Road, поездка без пациентов Работает 12 минут 14:27 Вторник – 3555 Dunlap Ave до больницы общего профиля Олбани, один человек, несчастный случай на дому Работает 55 минут ОЛБАНИ ПОЖАРЫ 10:17 вторник 612 S Maple St. ложная сигнализация коробки Три умти в обслуживании 13 минут. 3: 4a p m вторник – 112 S Maple St. ложная сигнализация коробки Три блока м. Служба II минут 17:15 Вторник – Первая авеню и Гири-стрит, горящий куст. Один блок работает. 12 мес. СКОРОЙ ПОМОЩИ В ЛИВАНЕ 1:14 во вторник – Тейлор-стрит, 123 в общественную больницу Ливана, один человек, больной В обслуживание 45 минут Ki n вторник – Восьмая улица IMS до больницы Lebaoaa Community Hospital, один человек, трансфер до службы 34 минуты 1.15 а п. Вторник – Ливанская больница Conmimtty to больница доброго самаритянина. Корваллис. один человек. передача . la service I hoar 22 mtmrtes Автомобильные аварии (с la m вторник до m сегодня) ПОЛИЦИЯ ALBANY 8 часов вторник, третья авеню и Бейкер-стрит. Водители: Yolanda Castillo 24. Rt 2 Box 243. и Бетти Ян Гортон. 29 Салем Обвиняет Гортона в неспособности уступить дорогу в 15:11 вторник – Элсворт-стрит и Шестая авеню. Пилоты Гарв Рав Гамильтон. II. RT I Box 200. Tangent и Дэвид Ф. Парди. 21. 5158 NE W illamette SI.Корваллис Обвинение: Гамильтон из-за неспособности поддерживать разумный контроль над автомобилем. Аресты, направление traportsdtola сегодня). ПОЛИЦИЯ ОЛБАНИ ​​Олбани, мальчик. 16. во вторник обратился к властям по делам несовершеннолетних округа Линн по делу о предполагаемом грабеже первой степени, обвиненном в помощи в ограблении Уилли С. 66 705 S Lyon St рано в воскресенье ШЕРИФ округа ЛИНН Кевин Джин Стайлз. 20 4310 Airport Road. Милый дом. Обвинение во вторник Нарушение условно-досрочного освобождения по первоначальному пункту обвинения в воровстве первой степени. Возвращено из Техаса. Ограбления, кражи ШЕРИФ округа ЛИНН от Оллы Мэй Симс.RT I Box 465N Ливан. Вторник Теленок двух коров: стоимость 1350 ЛИВАНСКАЯ ПОЛИЦИЯ Родина Роксама Мари Джонсон. 1402 Grove St .. с 10 мая по вторник Снято: Стереосистема: стоимость 1170 International здесь подлежит обновлению. Департамент качества окружающей среды штата Орегон установил 14 июня в качестве крайнего срока для общественных комментариев по мерам контроля, необходимым для предотвращения переполнения пруда из бревен и других сточных вод, сбрасываемых с завода в Ливане в реку Южный Сантиам. Комментарии следует направлять в отдел качества воды государственного агентства, 1234 SW Morrison St.. Portland 97205. По данным компании, промывка сушилки для шпона ливанской фабрики, перекачка пресс-ямы и растворимая масляная и водная смазка попадают в пруд для бревен, а во время сильных дождей пруд выходит из реки. Исправления Albany Democrat-Herald старается быть точным во всех своих новостях Иногда мы ошибаемся, но мы всегда хотим исправить наши ошибки Если вы обнаружите ошибку, сообщите нам об этом. Позвоните в городскую службу в обычные рабочие часы Из-за ошибки в сообщении , имя и адрес человека, цитируемого в статье, опубликованной в газете Albany Democrat-Herald в четверг, были неправильными.Берл В. Эйдсон. Rt. 1 Вставку 30, «Касательную», следовало бы процитировать в рассказе о реакции средней части долины на захват торгового судна камбоджийцами. Из-за ошибки редактирования Салли Уайт была неправильно идентифицирована в подписи к фотографии в газете Albany Democrat-Herald в понедельник. КЛАССИФИЦИРОВАННЫЕ ОБЪЯВЛЕНИЯ DEMOCRAT-HERALD ДЕЙСТВИТЕЛЬНО ПОЛУЧАЮТ РЕЗУЛЬТАТ! ТЕЛЕФОН 926-2211 ДЛЯ ПОЛЕЗНОГО РЕДАКТОРА СЕГОДНЯ. PRO WRESTLING ВОЗВРАЩАЕТ ОРУЖЕЙНУЮ СРЕДУ, 21 МАЯ, 20:00. Матч на смерть команды тегов! Датч Сэвидж и Джимми Снука против «Королевских кенгуру», лорда Джонатона Бойда и Нормана Чарльза III… плюс: Бык Рамос против Бенни Рамиреза и Бойзер Боб Ремус против Рики Хантера …. рефери Шаг Томас. Входной билет … 3,00 доллара на ринге, 2,50 доллара США в целом, 2 доллара США для студентов и 1,50 доллара США для детей. Билеты поступят в продажу в среду в 18:00. j I С Friendly PopU, обслуживающим вас AA ВЫПОЛНИТЕ ЯЙЦА 4 doz $ 100 ОБЫЧНОЕ МОРОЖЕНОЕ, ga, 79 (Все вкусы в закусках) W МУСОР ЧТ-СР: MONTEREY JACK 120 $ I ib. Сохраните свои скидки. Sove on food – покупайте лонгхорн чеддер партиями от 7 до 14 фунтов по цене 1,18 доллара за фунт. HAVE CHEESE -WILL CUT и 225 Broadalbin (рядом с Northwest Natural Cos) VENETIAN Open 6:45 Руководство для родителей ДЛЯ ЗРЕЛЫХ АУДИТОРИЙ $ 150 Все места I Победитель премии Оскар АРТ КАРНИ ЛУЧШИЙ АКТЕР Еще в 1957 году, w.ш. uvi в 55 Olds, любил жевательную резинку, музыку в стиле кантри, грабить заправочные станции и девушку по имени Дикси. BURT RXTSTJOLDS in TUB DCZIE DAUCnXXIlTGQ -CONNY VAN DYKE JERRY REED NED BEATTY DON WILLIAMS MEL TILLIS axit CAEirjinr t … k STEVE SHAGAN NMMh STAN CANTER JOHN AVILDSEN INP. LUUw J AND Funobotfy thinki I VS f- “ffirv p XJfc Jacqueline Bisset Wes Stern Rick Kelman Wink Roberts cotoRbyfciiro United Artwti Egfe ea. Tillamook Chcoso 2ib259 Действующие цены ср., 21 марта – вс., 25 марта ОТКРЫТО – 7:00 – 22:00 – 7 ДНЕЙ В НЕДЕЛЮ una FAE.r.1 1757 East Pacific Blvd. Олбани, Орегон МЫ ПРИНИМАЕМ FOOD STAMPS P6K, проводимую в течение 3-й недели – 19:00. & amp; 9:05 ” ‘по мотивам фильма «АЭРОПОРТ» по роману Артура Хейли. cn KAREM BLACK 1111 GLORIA SWANSQN – IM-IM IIMlffltt! SUM im u u ur ns m in b m mm Mr -an mm wmmoiunnAn men or ha asuii mm. um lAi rYntxai by M.UNH f RYE Itm-iI rwm taaucf ssecmri TI IkoA rVoduw IWINGS WC UNNTRSAL PCIIH TECHftM’IWIWSION ‘v

Измерения с временным разрешением с введением одной капли для исследования эффектов пространственного заряда в масс-спектрометрии плазмы

Abstract

Исследование эффектов пространственного заряда высоких концентраций матричных ионов Pb ⁺ на ионы Li ⁺ аналита в масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой (ICP-MS) представлен с использованием вертикально ориентированного масс-спектрометра с введением одной капли.Более высокая воспроизводимость и стабильность при введении образца от капли к капле с использованием инжектора монодисперсных микрочастиц (MDMI) были достигнуты при вертикальной ориентации. Типичное отклонение (% RSD) времени прибытия от капли к капле и аналитических площадей пиков масс-спектрометрии лучше 5%. С такой точностью получается более количественное описание эффекта пространственного заряда на одиночном облаке ионов. В ионном пучке обнаружены эффекты как радиального, так и осевого пространственного заряда.Радиальные эффекты приводят к потере интенсивности из-за плохого пропускания или столкновений на поверхностях внутри масс-спектрометра. Осевые эффекты изменяют распределение кинетической энергии компонентов фонового ионного пучка (например, ¹⁶ O ⁺ и ⁴⁰ Ar ⁺ ) и выбранных компонентов ионного облака (например, ⁷ Li ⁺ ). Однако аксиальные эффекты, по-видимому, не вызывают значительного уширения облаков ионов, отобранных в масс-спектрометре. В точке разделения зарядов и высокой плотности заряда ионного пучка максимумы ионного облака для Li и Pb не совпадают.Это происходит из-за масс-зависимой диффузии в ICP по мере приближения ионных облаков к отверстию для отбора проб. Потеря ионов, вызванная пространственным зарядом, происходит преимущественно в локализованной области после максимума облака образца Li ⁺ . Когда концентрация Pb в образце достаточно высока, дискретизированный сигнал ⁷ Li ⁺ имеет бимодальную форму пика. Существование провала и его относительное расположение в бимодальном дискретизированном сигнале ⁷ Li ⁺ предполагает, что эффекты пространственного заряда локализованы в области высокой плотности заряда, возникающей сразу после разделения зарядов.

Рекомендуемые статьиЦитирующие статьи (0)

Copyright © 1999 Американское общество масс-спектрометрии. Опубликовано Elsevier B.V.Все права защищены.

Рекомендуемые статьи

Ссылки на статьи

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно.Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, используйте кнопку “Назад” и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом.Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу.Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта.Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.