Б5 71: Б5-71 источник питания постоянного тока

Содержание

ООО “Радиоспектр Плюс” | Б5-71/2МС

Б5-71/2МС

Источник питания постоянного тока.Обозначение при заказе-ЦГИУ. 571001.001 ТУ BY 190949966.001-2014. Начало выпуска- 2014 год

Цена: 1 640 BYN / 39 500 ₽ Цена поверки: 56 BYN / 2 500 ₽

Гарантия 18 месяцев

Два диапазона- 0-30,00 вольт/ 0-10,00 ампер, 0-60 вольт/0-5,00 ампер. Максимальная постоянная выходная мощность -300 ватт. Низкие пульсации напряжения – 0,5-0,6 мВскз.

Регулировка напряжения грубо/ плавно
Регулировка напряжения по току грубо/плавно
Светодиодные цифровые измерительные приборы: вольтметр и амперметр

Быстрое отключение и подключение нагрузки к источнику с помощью кнопки отключения выходного напряжения на клеммах не отключая источник от сети
Защита силовых элементов от перегрева
Защита нагрузки от превышения установленного тока
Защита схемы источника от поражения статическим электричеством
Возможность работы источника в режиме стабилизации напряжения или стабилизации тока

Уважаемые потребители, производственная фирма «Радиоспектр Плюс» оставляет за собой право внесения изменений в конструкцию, комплектацию и электрическую схему прибора без предварительного уведомления сохраняя заявленные характеристики, соответствие нормам по электробезопасности, пожаробезопасности и санитарным требованиям.

Актуальность важных для Вас параметров, не входящих в вышеупомянутые требования, уточняйте в службе технической поддержки.

Контакты
220070 г.Минск, ул. Радиальная, 11а, помещение 7, офис 4.
Техподдержка-тел. +375-29-6559940,
факс +375-17-3469169,
бухгалтерия-тел/факс +375-17-2359940.
Электронная почта [email protected]

Б5-71 КИП, Импульсный источник питания 0-50V; 10A; 1xLED, Россия

Описание

Б5-71 КИП предназначен для питания радиотехнических электротехнических устройств нормированным по характеристикам, стабилизированным напряжением постоянного тока или постоянным током. Источник питания может, применяться при производстве и ремонте радиоэлектронной аппаратуры различного назначения, при научных и экспериментальных исследованиях в лабораторных и цеховых условиях.

Б5-71 КИП может применяться при проведении поверки измерительных приборов и иной аппаратуры. Так же источник питания имеет возможность последовательного и параллельного включения с однотипными источниками.

Преимущества источника питания постоянного тока Б5-71КИП:
Источник питания Б5-71КИП является переносным, выполнен в пластмассовом корпусе, в настольном исполнении, рассчитан на длительный режим работы.
Лабораторный источник питания Б5-71КИП – это прибор, построенный на современной элементной базе по инверторной схеме с линейным регулятором, имеющий в своей основе высокопроизводительный микроконтроллер – что позволило добиться превосходных параметров, таких как:

Минимальный уровень пульсаций;
Оптимальный режим энергосбережения;
Высокая скорость и точность установки значений, не достижимые в ранее выпускаемых моделях источников питания данной ценовой категории, в том числе и зарубежных производителей;
Высококонтрастный LCD дисплей с мягкой подсветкой и энкодер обеспечивают дружественный интерфейс, позволяющий максимально повысить удобство в работе с источником питания;
Внутренний высокостабильный источник опорного напряжения и прецизионный АЦП обеспечивает прекрасную долгосрочную стабильность выходных параметров при изменяющейся нагрузке.

Комплект поставки Б5-71КИП

Источник питания Б5-71КИП

Встроенный интерфейс RS-232

Кабель питания сетевой PC-186

Диск с ПО CD-R

Кабель интерфейсный DB9F-DB9M 1.8 м

Руководство по программированию

Руководство по эксплуатации

Ящик картонный

Технические параметры

Тип источника	импульсный
Выходное напряжение, В	50
Выходной ток, А	10
Госреестр РФ	да
Вес, кг	2

Техническая документация

ПрофКиП Б5-71/1 источник питания лабораторный — Полная Информация на Официальном Сайте: Цена, Описание, Инструкции.

Назначение источника питания лабораторного ПрофКиП Б5-71/1

Источник питания лабораторный ПрофКиП Б5-71/1 предназначен для проведения работ в процессах наладки, ремонта и лабораторных исследований. Источник питания лабораторный ПрофКиП Б5-71/1 обладает низкими значениями нестабильности при изменении нагрузки, а также низким уровнем шумов в нагрузке. Конструкция источников обеспечивает защиту от перегрузок и короткого замыкания на выходе.

Особенности и преимущества источника питания лабораторного ПрофКиП Б5-71/1

▪ Количество каналов: 1

▪ Выходное напряжение: 0 В … 30 В

▪ Выходной ток: 0 А … 10 А

▪ Выходная мощность: до 300 Вт

▪ Высокий КПД

▪ Режим стабилизации тока и напряжения

Основные технические характеристики источника питания лабораторного ПрофКиП Б5-71/1

Параметры	Значения
Количество каналов	1
Выходное напряжение	0 В … 30 В
Выходной ток	0 А … 10 А
Выходная мощность	до 300 Вт
Пределы допускаемой абсолютной погрешности воспроизведения напряжения постоянного тока	±1% х Uуст + 5 мВ
Нестабильность напряжения на выходе при изменении напряжения питания	0. 05% + 1 мВ
Нестабильность напряжения на выходе при изменении нагрузки	0.1% + 5 мВ
Уровень пульсаций выходного напряжения (СКЗ)	±10 мВ
Пределы допускаемой абсолютной погрешности воспроизведения силы постоянного тока	±1% х Iуст + 10 мА
Нестабильность силы тока на выходе при изменении напряжения питания	0.05% + 10 мА
Нестабильность силы тока на выходе при изменении нагрузки	0.1% + 10 мА

Условия эксплуатации источника питания лабораторного ПрофКиП Б5-71/1

▪ Температура окружающего воздуха: 10°С … 30°С

▪ Относительная влажность: 30% … 80%

▪ Атмосферное давление: 630 мм.рт.ст. … 795 мм.рт.ст.

Общие данные источника питания лабораторного ПрофКиП Б5-71/1

▪ Питание: 210 В … 220 В, 50 Гц /60 Гц

▪ Габаритный размеры: 310х290х100 мм

▪ Вес: 2. 0 кг

Комплект поставки источника питания лабораторного ПрофКиП Б5-71/1

Наименование	Количество
Источник питания лабораторный ПрофКиП Б5-71/1	1 шт.
Кабель питания	1 шт.
Руководство по эксплуатации	1 шт.

71/1М | Источники питания Б5

Нестабильность	≤ 0,001% + 0,5мВ (Б5-71), ≤ 0,1% + 50мВ (Б5-71/х) при изменении напряжения питания, ≤ 0,02% + 2мВ (Б5-71), ≤ 0,2% + 20мВ (Б5-71/х) при изменении тока нагрузки
Уровень пульсаций	≤ 1 мВ_ср.кв.
Время установления	≤ 100мс (при 90%-изменении тока нагрузки)
Нестабильность	≤ 0,02% + 2мА (Б5-71), ≤ 0,2% + 50мА (Б5-71/х) при изменении напряжения питания, ≤ 10мА при изменении напряжения на нагрузке
Уровень пульсаций	≤10 мА_{ср. кв.}
Диапазон напряжений	0…100В
Погрешность измерения	±(1% + 200мВ)
Входное сопротивление	100кОм
Тип индикаторов	СД-индикаторы
Погрешность индикации	±200мВ/±40мА (Б5-71), ±200мВ/±100мА (Б5-71/х)
Количество индикаторов	1 (совмещённый вольтметр/амперметр, Б5-71) 2 (вольтметр, амперметр, Б5-71/х)
Корпус – выход	≥ 20МОм (700В)
Корпус – сеть	≥ 20МОм (700В)
Корпус – земля	≤ 0,5Ом
Напряжение питания	220В ±10%, 50Гц
Габаритные размеры	240×133×340мм (Б5-71) 254×184×314мм (Б5-71/х)
Масса	6кг (Б5-71) 5кг (Б5-71/х)

ПрофКиП Б5 71-2 источник питания лабораторный обзор / Видео / Элек.

ру

10 ноября 2017 г. в 14:50
32

Поделиться
Пожаловаться

ПрофКиП Б5-71/2 предназначен для лабораторных исследований и питания радиоэлектронных и электротехнических устройств постоянным стабилизированным напряжением от 0 В до 60 В, и током от 0 А до 5 А, общей выходной мощностью до 300 Вт.

Источник питания лабораторный ПрофКиП Б5-71/2М имеет защиту нагрузки от превышения величины выходного напряжения заданного уровня и величины выходного тока заданного уровня. Так же имеет защиту от перегрузок, коротких замыканий на выходе прибора и обрывов нагрузки, а также допускает соединение любой выходной клеммы с корпусом. Источник имеет низкую нестабильность выходного напряжения и тока и сохраняет свои технические характеристики при длительной непрерывной работе.

Источник питания лабораторный ПрофКиП Б5-71/2М снабжен терморегулированием системы вентиляции. При невысоких температурах внутри корпуса для снижения акустического шума выбрана низкая скорость работы вентилятора системы вентиляции. При повышении температуры элементов схемы прибора вследствие работы на высоких мощностях при высоких окружающих температурах осуществляется регулирование числа оборотов вентилятора вплоть до максимального значения.

Так же источник снабжен системой термозащиты. Если в случае неудовлетворительных условий вентиляции температура внутри корпуса превысит безопасный порог, произойдет автоматическое отключение выходного напряжения (тока). При снижении температуры внутри прибора до приемлемых значений силовая часть прибора включится автоматически.

ВКонтакте
Facebook
Twitter
Pinterest

Какое масло заливать в АКПП (автоматическую коробку передач)?

Один из элементов такого обслуживания – замена жидкости в АКПП. И вот тут возникает дилемма: какое масло заливать – оригинальное или универсальное?

Выбираем жидкость для АКПП

Оригинальные масла более дороги, но зато с ними нет проблемы выбора: какое указано в инструкции по эксплуатации, такая жидкость для АКПП подходит машине стопроцентно. А если автомобиль находится на гарантии, то и вопрос выбора стоять не должен. Но если нет препятствий к заливке универсального масла, зачем переплачивать? Важно не ошибиться в марке жидкости.

Подбор осуществляем, основываясь на рекомендации производителя. Разработчики авто учитывали свойства жидкости, которая она показывает в процессе эксплуатации агрегата. В автомобильной химии «трансмиссионка» имеет наиболее сложный состав, куда включены модификаторы трения, антиоксиданты, ингибиторы коррозии, разнообразные присадки – температурные, вязкостные, антиизносные, моющие и т.д.

Всегда руководствуйтесь инструкцией к автомобилю при выборе ATF для АКПП

Главным критерием, пожалуй, назовем вязкость. Масла различаются на густые, средней вязкости и синтетические (полусинтетические). Что указал производитель в инструкции по эксплуатации? Вот и приобретаем жидкость для автоматической коробки передач только такого типа.

Другой не мене важный фактор – температурный диапазон применения жидкости. Определив максимальную температуру воздуха в настоящий период эксплуатации, определяем минимальную температуру обеспечения смазочных свойств. И, исходя из этого, подбираем класс масла.

Подбор масла АКПП по марке автомобиля

Какое масло заливать в АКПП KIA и Hyundai?

Уверен, что владельцы этих автомобилей знают, что в большинстве на них устанавливаются надежные и неприхотливые коробки от Mitsubishi. На текущий момент компания начинает устанавливать в свои автомобили агрегаты собственного производства. В основном это седаны бизнес класса. Чаще всего рекомендации по применению жидкостей ориентированы на MMC ATF SP, иногда Toyota.

В качестве примера на Hyundai IX35, I50, Santa Fe где устанавливается АКПП A6MF/LF рекомендуется применять оригинальную жидкость Hyundai ATF SP-IV.

Что касается старших модификаций коробок (A4A/B, F4A, A4C), то туда заливают Hyundai ATF SP-III и Diamond ATF SP-III. Главное придерживаться стандарта SP-III.

Не забудем мы и о новейших 8-ми ступенчатых коробках корейского концерна. Используйте SP-IV-RR

Какое масло заливать в АКПП Volkswagen (Skoda, SEAT)?

Для автоматических коробок Фольксваген применяют масло G 052 025 (A2), Esso Type LT 71141 (наиболее распространенное). Для DSG (мокрого типа) применяют G 052 182 A2. Для сухого типа DSG7 (0am, DQ200) G052512A2. Из аналогов для классических АКП используют жидкости с допуском Toyota T-IV (идет в оригинале), а для роботизированных SWAG, Febi, Motul DCTF.

Какое масло заливать в АКПП Audi?

В АКПП автомобилей Ауди заливается чаще всего Esso Type LT 71141. Номер оригинального масла в зависимости от модификации коробки G 052 182 A2 (S-Tronic) и G 055 005 (классическая АКП). В роботизированные коробки (7 передач, мокрое сцепление) используется масло G052182A2. Для классических 6 и 8 ступенчатых (ZF) используется ZF LIFEGUARD 6 и 8 соответственно.

Какое масло заливать в АКПП Toyota?

Для коробок A540H и A241H используется TYPE T TT. В 1990-х годах появляется TYPE T (II модификация), применяется для АКПП с электронным управлением, а так же FLU. Позже, в 96 году жидкость меняется на TYPE T (III модификация) и TYPE T (IV модификация). Обращаем Ваше внимание, что эти типы масел отличаются друг от друга, имеющие различные рабочие свойства. В большинстве случаев расклад следующий: в 4 ступенчатые агрегаты заливают Toyota T4, а в 6 и 8 ступенчатые Toyota ATF WS.

На данный момент в новые автомобили концерна TOYOTA заливается жидкость Toyota ATF WS.

Какое масло заливать в АКПП Ford?

В автоматические коробки передач Форд заливается ATF, которая соответствует типу MERCON V. К примеру для Ford Focus 2 – WSS-M2C919-E.

Какое масло заливать в PowerShift?

Номер оригинального масла: 1 490 763 (1L) и 1 490 761 (5L). Заменители: SWAG 10 93 0018, Ford WSS-M2C-936-A

Какое масло заливать в АКПП Mercedes?

Допуски масел DEXRON II – 236.1, 236.5, 236.6, 236.7. К DEXRON III – 236.9. Последние модификации АКПП используют Fuchs ATF 3353. Номер оригинального масла для АКПП 722.9 до 2010 года (допуск 236.14) – А001 989 68 03. Заменители Shell ATF 134, Mobil ATF 134, Fuchs Titan EG ATF 134.

Автомобили выпущенные после 2010 года (акпп 722.9). Жидкость в коробке может быть другая. Используется допуск 236.15. Оригинальное масло – A 001 989 77 03, A 001 989 78 03. Заменители Fuchs TITAN ATF 7134 FE, Shell ATF 134FE, Shell Spirax S6 ATF 134ME

Какое масло заливать в АКПП BMW?

На автомобили БМВ устанавливаются автоматические коробки передач от производителя ZF. Для 5-и ступенчатых АКПП используют оригинальное масло Mobil LT 71 141 (оно же ESSO LT 71 141). Для 6-и ступенчатых ZF используется Shell М1375.4, так же в 6-ступки (ZF6HP) используется масло ZF LIFEGUARD 6, а в современные 8-ступенчатые ZF LIFEGUARD 8 зеленого цвета. Жидкость, которая продается в канистрах БМВ – имеет дополнительную наценку, но по факту компания НЕ производит трансмиссионные масла, а лишь разливает продукцию партнеров.

Какое масло заливать в АКПП Volvo?

Для автоматических коробок Вольво реккомендуется использовать жидкость ATF Volvo T-IV, номер 1161540-8. Аналог Mobil ATF JWS 3309. С 2010 года льют Toyota WS.

Какое масло заливать в АКПП Peugeot?

На большинство автомобилей Пежо (Ситроен) устанавливается коробка AL4 (DP0). В таком случае оптимальным вариантом будет Mobil ATF LT 71141. Так же можно использовать Dexron VI, Mercon V. В 6-ступки можно использовать допуск Mobil 3309.

Какое масло заливать в АКПП Opel?

Рекомендованное ATF для автомобилей Опель в зависимости от года является DEXRON III, DEXRON VI, MERCON V. Номер оригинального масла Opel 19 40 184. В 4-ступенчатые заливается масло по-допуску Toyota Type TIV, в 6 ступенчатые (6T серия) масло с допуском Dexron VI.

Какое масло заливать в АКПП Chevrolet?

Как и в случае с маркой Opel – Шевроле использует в качестве смазочной жидкости для АКПП DEXRON VI, Mercon V. В зависимости от года выпуска для более старших моделей используется DEXRON III.

Какое масло заливать в АКПП Mitsubishi?

Азиатский рынок использует рекомендацию по заливке MMC ATF SP. Выше мы уже писали, что Hyundai (устанавливает коробки Mitsubishi на свои автомобили) использует свою собственную спецификацию Genuine. На американском рынке используется и именуется – Mopar 7176. Для АКПП выпуска 1992-1995 годов используется ATF SP, 1995-1997 заливается ATF SP II, и после SP III. Так же, жидкость J3 применяется для 6-и ступенчатых автоматических коробок Mitsubishi.

Для вариаторов используется масло FLUID-J1. Она же Nissan NS2.

Какое масло заливать в АКПП Nissan?

Автомобильный концерн Nissan (Infiniti) рекомендует применять в качестве ATF оригинальную жидкость “Nissan Matic”, которая в свою очередь имеет несколько модификаций. Для вариаторных трансмиссий используются масла линейки NS2 и NS3. Последний допуск используется с 2012 года.

Какое масло заливать в АКПП HONDA?

До 1994 года автоматические коробки Хонда не отличались ни в обслуживании, ни в выборе спецжидкости. Как и для большинства автомобилей с АКП рекомендовали заливать жидкость типа DEXRON II. Все поменялось после 94 года, когда концерн заявил о разработке VTEC, позволяющий выдавать высокую мощность из маленького объема движка. Не будем описывать все нюансы, скажем лишь, что японцы разработали агрегат, способный переваривать высокую мощность, при этом имеет значительно бОльшую рабочую температуру масла.

Специально для этого была разработана жидкость Honda ATF Z1. Впрочем владельцы автомобилей могли наблюдать на щупе надпись DEXRON II, что вводило их в заблуждение о рекомендованной трансмиссионке. На самом деле это значило лишь то, что автовладелец может использовать последнее, но только для короткого промежутка времени. В 2010 году выпустила усовершенствованную версию жидкости – Honda ATF DW-1

Особенности технологии замены жидкости в автомате

Агрегаты различаются на два типа: обслуживаемые и необслуживаемые. В обслуживаемых коробках есть горловины, щупы, то есть все предусмотрено для замены. Но в некоторых последних моделях производитель, считая замену масла в АКПП необязательной, не предусматривают подобного.

Состояние масла в АКПП можно определить по цвету

Срок замены в обслуживаемых АКПП указан в мануале. Но! Не стоит забывать, что российские условия эксплуатации приравнены к тяжелым, поэтому стоит менять жидкость в два раза чаще. Пример: если производитель указывает срок замены каждые 60 тыс. км пробега, то рекомендуется менять уже на 30 тысячах. Уровень жидкости в АКПП легко определить по щупу.

Второй нюанс – это замена в необслуживаемых агрегатах. Здесь объем определить не получится. Поэтому замену масла осуществляем по принципу: объем слитого масла должен быть равен залитому. Только все операции нужно производить на «холодном» масле, так как при нагреве рабочая жидкость автоматической коробки передач расширяется и объемы могут различаться.

Как проверить состояние масла в АКПП Видео

границ | Глобальное распространение субгенотипа B5 EV-A71 и филогеографический анализ событий китайской миграции

Введение

Энтеровирус A71 (EV-A71) – это быстро распространяющийся патоген, вызывающий ящурно-ягодичную болезнь рук (HFMD), которая ложится серьезным бременем на детей и младенцев во всем мире. Сообщается, что он также может вызывать асептический менингит, энцефалит, острый вялый паралич и тяжелые респираторные заболевания, среди прочего (Griffiths et al., 2012; Apostol et al., 2019). Хотя считается, что он был впервые выделен в Калифорнии в 1967 году, некоторые данные, представленные в 2009 году, предполагают, что он мог появиться несколько раньше в Нидерландах в период 1963–1966 годов (Schmidt et al. , 1974; Van Der Sanden et al. ., 2009). Семь генотипов (A – G) и 14 субгенотипов были обнаружены с момента создания метода молекулярного типирования генотипа и субгенотипа EV-A71, основанного на полных последовательностях VP1 (Laxmivandana et al., 2013; Bessaud et al., 2014; Saxena et al., 2015). Было показано, что некоторые субгенотипы сильно связаны со вспышками или тяжелыми случаями (Wang et al., 2002; Ji et al., 2019). В дополнение к межгрупповым генетическим различиям, которые использовались в качестве стандартного метода генотипирования, по-видимому, существует сильная взаимосвязь между географическим происхождением. Таким образом, можно выделить географические подгруппы даже в условиях продолжающейся миграции.

Субгенотип C4 служит хорошим примером локализации, а также миграции.Более того, субгенотип C4, который впервые был классифицирован в Китае в 2004 г., также является важным кластером, состоящим из повторно появляющихся патогенов (Nagata et al., 2004), а крупномасштабная вспышка в Китае, как было установлено, связана с «C4a». эволюционная ветвь »- селективная клада субгенотипа C4 (Zhang et al., 2009; Zhang, Xu, 2013). Фактически, эта ветвь, возможно, существовала в течение 10 лет, а субгенотип C4 – в течение 14 лет [время последнего общего предка (T _MRCA) эволюционной ветви C4a: 1998.4; T _MRCA субгенотипа C4b: 1994.1] до вспышки, которая привела к 353 тяжелым случаям и 22 смертельным исходам в китайской провинции Аньхой в 2008 г. (Zhang et al., 2010, 2011). Впоследствии эволюционная ветвь C4a рассматривалась как преобладающий тип, вызывающий HFMD в Китае, особенно приводящий к тяжелым и смертельным случаям (Ji et al., 2019). На сегодняшний день он распространился по всему миру, и предыдущие исследования признали его ответственным за вспышки в Камбодже, Вьетнаме и Дании (Fischer et al., 2014; Duong et al., 2016; Duy et al., 2017).

Субгенотип B5, который был обнаружен через несколько лет после открытия C4, также считается преобладающим генотипом, циркулирующим аналогично субгенотипу C4 (Huang et al., 2008; Mirand et al., 2015) . Впервые он был описан во время вспышки, произошедшей в Сараваке, Малайзия (Podin et al., 2006). С тех пор он вызвал несколько вспышек и стойких эпидемий в Сингапуре, Японии и Таиланде (Wu et al., 2010; Puenpa et al., 2011; Мизута и др., 2014). В настоящее время субгенотип B5 стабильно циркулирует в Юго-Восточной Азии и часто распространяется в соседние страны.

Большинство полевых последовательностей EV-A71, а также многие последовательности, представленные в Genbank, основаны на данных системы эпиднадзора за случаями HFMD некоторых стран, из которых можно получить дополнительную информацию о субгенотипе B5 EV-A71. Однако традиционные исследования, связанные с молекулярной эпидемиологией EV-A71, были сосредоточены на эволюции и динамическом составе субгенотипов и редко описывали систематическое распространение или изменения в структуре популяции.Может быть полезно определить, играло ли импортированное население важную роль в динамическом составе местных кластеров. Можно также выполнить оценку риска мигрирующих штаммов. Особенно в Китае хорошо известно, что субгенотипы C4a представляют собой локализованные постоянно циркулирующие клады (Zhang et al., 2011). Для других субгенотипов необходимо проанализировать больше доказательств.

Филогеографический анализ используется для отслеживания миграции и прогнозов. Ранее он широко использовался при таких заболеваниях, как бешенство, грипп и желтая лихорадка (Beck et al., 2013; Dellicour et al., 2019; Мино и др., 2019). В настоящем исследовании сделана попытка проиллюстрировать состояние распространения субгенотипа B5 EV-A71. Кроме того, мы попытались понять миграционные события в китайской провинции Юньнань и исследовали взаимосвязь между недавними миграционными событиями.

Материалы и методы

Сбор проб

Мы собрали образцы стула из мазков из зева и стула 5-летних детей с диагностированным HFMD в дозорной больнице в провинции Юньнань в Китае.Это исследование было проведено в соответствии с рекомендациями «Китайской национальной программы эпиднадзора за случаями HFMD – издание 2009 г.», и протокол, использованный в этом исследовании, был одобрен Вторым комитетом по этике Национального института по контролю и профилактике вирусных заболеваний, Китай. Центр по контролю и профилактике заболеваний. Все субъекты дали письменное информированное согласие в соответствии с Хельсинкской декларацией .

Изоляция вирусов

и секвенирование

VP1

Мы обработали образцы стула в соответствии со стандартным протоколом и инокулировали их на клеточные линии рабдомиосаркомы (RD) (Xu and Zhang, 2016).Мы собирали вирусы из линии клеток RD в соответствии с техническим протоколом, установленным для Китайской национальной программы наблюдения за случаями HFMD (издание 2009 г.). Мы экстрагировали вирусную РНК с помощью набора QIAmp RNA Mini Kit (Qiagen, США) и хранили их при температуре ниже -20 ° C. Мы использовали специфические праймеры (Zhang et al., 2009) для амплификации всей области VP1 с помощью набора PrimeScript One Step RT-PCR Kit (Takara, Dalian, China). Мы очищали продукты ПЦР с помощью набора для очистки QIAquick PCR (QIAgen, Германия) и секвенировали их с помощью генетического анализатора ABI 3130 (Applied Biosystems, Фостер-Сити, Калифорния, США) с помощью метода терминации дидезокси-цепи.Мы собрали оба результата из каждой цепочки с помощью Sequencher v5.0.

Набор данных и очистка данных

Мы загрузили и интегрировали все последовательности EV-A71 из Genbank и нашей локальной базы данных. Мы выровняли каждую последовательность с полной последовательностью VP1 (891 нуклеотид) штамма-прототипа BrCr (инвентарный номер AB204852) и урезали до той же длины в 891 нуклеотид. Мы составили филогенетическое дерево с моделью замещения композита максимального правдоподобия, распределенного по Гаме (ML + Γ4), чтобы четко классифицировать все последовательности по различным серотипам, и мы сохраняем все последовательности, принадлежащие субгенотипу B5, как необработанный набор данных с использованием MEGA 6.06 с начальной репликацией, установленной на 1000 (Tamura et al., 2013). Мы также классифицировали последовательности субгенотипов и проверили их через веб-сайт пула генотипирования энтеровирусов (Kroneman et al., 2011).

Для необработанного набора данных мы использовали не синхронизированное филогенетическое дерево и проанализировали регрессию расстояния от корня до кончика от времени выборки с помощью TempEst v1.5.1 (Rambaut et al., 2016). Одновременно мы подготовили новый набор данных, в котором были сохранены оптимизированные данные, чтобы уменьшить недопустимый размер выборки.Мы сосредотачиваемся на последовательностях с сильными эпидемическими данными. Разрозненные данные часто представляют собой последовательности с ошибками аннотаций или смещениями, даже если сокращенные данные могут помочь найти больше взаимосвязей, в том числе с низким уровнем доверия. Мы используем оба набора данных для дальнейшего анализа.

Вывод о статусе популяции и динамическом распределении

Мы вывели динамику численности населения в два этапа. Сначала мы оценили динамику популяций субгенотипа B5, используя байесовский метод Skyride (Drummond et al., 2002, 2005). Одновременно мы рассчитали тест Tajima D и тест Fu, используя DNASP версии 6, чтобы определить статус популяций (Rozas et al., 2017). Кроме того, мы использовали метод распределения рассогласования, который использовался для оценки популяции, это включало использование алгоритма подбора кривой через Arlequin v3.5.2 (Excoffier and Lischer, 2010). Во-вторых, был реконструирован T _MRCA для всего набора данных. Мы провели байесовский ассоциированный анализ с использованием программы Beast v1.10 пакетов (Suchard et al., 2018). Были выбраны модель постоянного размера и некоррелированные логнормальные молекулярные часы. Для выбора модели замещения использовался пакет Jmodel test 2.0 (Darriba et al., 2012). Общая обратимая во времени модель с вариацией, распределенной по Гаме (GTR + Γ4), считалась лучшей моделью, доступной в пакетах Beast v1.10, из-за меньших значений байесовского информационного критерия (BIC) и Akaika. информационный критерий (АПК). Мы подвергли необработанный набор данных тем же процедурам для сравнения и во избежание предвзятости при отборе данных.

Анализ рекомбинации

Последовательности кодирующих областей P2 и P3 субгенотипа B5 геномов EV-A71 были проанализированы с использованием сервера BLAST для сравнения их идентичности с последовательностями из GenBank. При сходстве последовательностей более 90% эти последовательности считались потенциальными родителями и были загружены из GenBank. После проверки всех потенциальных доноров мы использовали небольшой набор данных открытого считывающего фрагмента (ORF), включая семь геномов, идентифицированных в этом исследовании.Программа SimPlot (версия 3.5.1) использовалась для выполнения графиков сходства и анализа загрузочного сканирования с 200-нуклеотидным окном, перемещающимся с 20-нуклеотидными шагами. Анализ загрузочного сканирования проводился с использованием метода объединения соседей (Salminen et al., 1995).

Филогеографическая реконструкция субгенотипа B5

Алгоритм Монте-Карло и байесовская статистика обеспечили основу для исследования миграционных событий во времени и пространстве. Мы использовали модель дискретной пространственной диффузии и модель некоррелированных логнормальных молекулярных часов.Мы реализовали процедуру выбора байесовской стохастической поисковой переменной (BSSVS) для построения теста байесовского фактора (BF), который определяет наиболее экономное описание процесса филогеографической диффузии (Lemey et al., 2009). Вкратце, BSSVS позволяет одновременно определять ненулевые скорости перемещения между парами местоположений и эффективно определять географического предка. Кроме того, мы использовали метод расчета BF, чтобы сделать выводы о миграции. С помощью метода BF были рассчитаны значение BF и среднее апостериорное значение, чтобы сделать вывод о возможном пути миграции между двумя регионами (по крайней мере, BF> 3 и среднее апостериорное значение> 0.5, путь миграции считается действительным). Миграция между регионами измеряется параметром «средняя скорость» в анализе BSSVS.

Мы реализовали этот процесс с помощью хорошо зарекомендовавшей себя пространственно-временной модели с помощью пакетов Beast v1.10 вместе с Beagle (Bielejec et al., 2014). Мы выполнили алгоритм Монте-Карло цепи Маркова (MCMC) для двух независимых процессов 120 миллионов поколений, с выборкой, происходящей каждые 8000-е поколение. Мы использовали Tracer v1.5 для диагностики процессов смешения, а также для оценки эффективного размера выборки (ESS).Чтобы быть точным, параметр с ESS более 200 должен учитываться, чтобы результат был достоверным.

Мы аннотировали дерево максимального доверия (MCC) в Tree Annotator, игнорируя первые 1500 деревьев, в которых были суммированы апостериорные узлы, а визуализация была выполнена с помощью FigTree. Чтобы смоделировать динамический процесс миграции, мы преобразовали дерево MCC в файл на языке разметки (KML), пригодный для просмотра в Google Планета Земля.

Результаты

Распространенность субгенотипа B5 у EV-A71 разделена на две стадии

Мы собрали 519 последовательностей, принадлежащих субгенотипу B5 из 7 012 последовательностей, содержащих всю область VP1 EV-A71, из которых 5 последовательностей были идентифицированы в случаях HFMD в Китае.Филогенетическое дерево (рис. 1C) всего набора данных проиллюстрировало большое количество последовательностей, идентифицированных во время прошлых вспышек. Попарные расстояния между этими последовательностями, рассчитанные с использованием моделей P-расстояний, обычно были <0,005. Эпидемии EV-A71 субгенотипа B5 были разделены на два этапа; 2000–2012 и 2008–2017 гг., С промежуточным обменом в 2008–2012 гг. Дивергенция корня к вершине, которая реализовала эвристические модели среднего квадрата остатка, показала, что наборы данных были избыточными и существовали дискретные узлы (рисунок 1A).Эти дискретные узлы обычно указывают на проблемы, связанные с последовательностью, например, связанные с датами отбора проб или ошибками секвенирования. Слишком много дискретных узлов может создать проблему для процессов смешивания образцов, а также для вычисления ресурсов. Поэтому мы уменьшили дискретные узлы. Всего было проанализировано 195 последовательностей. Был показан статус последовательностей представлений из 10 стран и регионов за 17 лет с 2000 года, включенных в набор экономичных данных (Рисунок 1B). Филогенетическое дерево (рис. 1C) показало здесь множество кластеров в зависимости от использованного порогового значения, однако штаммы, вызвавшие недавние эпидемии (после 2012 года), в основном были обнаружены в конце эволюционного дерева.По сравнению с первым кластером, который был просто разбросан по Юго-Восточной Азии, последний кластер был разбросан шире и демонстрировал более сложные взаимосвязи.

Рисунок 1 . Распространенность субгенотипа B5 у EV-A71 делится на два этапа. Инструмент сквозной диагностики с использованием эвристических методов остаточного среднего квадрата предположил, что избыточность данных и дискретные узлы существуют в общем наборе данных (A) и компактном наборе данных (B) ; Филогенетическое древо указывает на то, что недавние эпидемии (после 2012 г.) в основном обнаруживались в конце ветви эволюционного дерева (C) .

Оценка T

_MRCA и динамика популяции для субгенотипа B5 EV-A71

Мы проанализировали 519 последовательностей VP1 и , принадлежащих субгенотипу B5. Мы использовали разные методы для оценки популяции субгенотипа B5, и большинство методов показали, что произошло событие экспансии. Интересно, что хотя значения как теста Таджиамы, так и теста Фу были отрицательными, тест Таджиамы не показал статистической разницы ( P > 0.05). Напротив, результаты рассогласования распределения показали, что смоделированные кривые хорошо согласуются с измеренными (SSD <0,01, R <0,01, P > 0,05) (рисунок 2A). Хотя это указывает на то, что популяция, представленная данным набором данных, имела по крайней мере два расширения, фактическая динамика может быть более сложной. Байесовский график скайрайда предлагает дальнейшие объяснения (рис. 2B). Первое расширение, по-видимому, произошло до 2012 года, хотя в этот период наблюдались множественные колебания.В течение 2010–2013 гг. Мы наблюдали два колебания генетического разнообразия, за которыми следовало быстрое снижение до 2017 г. В заключение, наше исследование предполагает, что динамика популяций и их структура могут потребовать дальнейшего филогеографического анализа.

Рисунок 2 . Оценка T _MRCA и популяционная динамика для субгенотипа B5 EV-A71. (A) Результаты распределения рассогласования, показывающие, что смоделированные кривые хорошо согласуются с измеренными. (B) Байесовский график скайрайда показывает, что произошло больше расширений.

T _MRCA из последовательностей VP1 проиллюстрировал, что субгенотип B5 EV-A71, возможно, дифференцировался в 1994 г. 75 [95% -ная наивысшая плотность вероятности (HPD): 1988.66–1998.97] и что он находился в обращении как минимум 20 лет. Основная скорость нуклеотидных замен составляет 5,6 × 10 ^-3 [95% HPD: 4,83 × 10 ^-3 -6,44 × 10 ^-3]. За исключением нескольких внешних узлов, скорость эволюции немного изменилась в течение эпидемического периода (Таблица 1).Это может улучшить оценку качества образцов для дальнейшего филогеографического анализа. Хотя он может не отражать настоящего предка этого сложного процесса миграции, он может, по крайней мере, идентифицировать самого раннего предка и время его появления.

Таблица 1 . T _MRCA из подгенотипов B5 EV-A71 в разных странах и регионах.

Оценка географического происхождения и распространения субгенотипа B5 EV-A71

Было построено дерево максимального правдоподобия (1000 реплик начальной загрузки), и мы обнаружили, что семь юньнаньских субгенотипов B5 геномов EV-A71 были разделены на две группы, и эти две группы вирусов наиболее похожи на субгенотип B5 вируса EV. -A71 из Таиланда и Вьетнама соответственно (рис. 3A).Когда мы анализируем события рекомбинации юньнаньского субгенотипа B5 EV-A71 с другим субгенотипом B5 последовательностей EV-A71 с использованием семи статистических методов RDP4.0 и графика сходства, никаких значимых межсеротипов или межвидовой рекомбинации были обнаружены события (Рисунки 3B, C). Возможная причина заключается в том, что большинство геномных последовательностей субгенотипа B5 EV-A71 были идентифицированы в странах Юго-Восточной Азии и что предки-доноры редко исследовались.

Рисунок 3 .Анализ событий рекомбинации субгенотипа B5 EV-A71. (A) Было построено дерево максимального правдоподобия (1000 повторений начальной загрузки), и семь субгенотипов Юньнань B5 геномов EV-A71 были разделены на две группы; (B, C) не было обнаружено значимых событий межсеротипной или межвидовой рекомбинации.

При географической реконструкции BSSVS оказывает сильное влияние на корень местоположения. Тем не менее, многие местоположения, которые были слабо поддержаны в качестве корневых местоположений, показали незначительную апостериорную вероятность при BSSVS.Интересно, что когда Google Планета Земля использовалась для выявления динамического процесса и рассматривались априоры минимальной скорости конфигурации эпидемиологических связей, было выявлено 50 ветвей, соединяющих 16 местоположений. Показаны миграционные процессы (дополнительное видео в дополнительном материале 1). Эти процессы предполагают, что в последние годы на материковой части Китая могли происходить диффузные множественные миграции. Более того, до сих пор никаких связей между провинциями не наблюдалось, за исключением Тайваня, Китай.Из-за сложности географии и демографии эпидемии субгенотипа B5 на Тайване отличаются от эпидемий на материковой части Китая. Было показано множество связей между Малайзией, Японией, Сингапуром и Индонезией. Были отмечены две миграции: одна в Сямэнь, Китай, в 2009 году, а другая в Цзянсу, Китай, в 2011 году.

Масштабируемое по времени дерево MCC, основанное на всей области VP1 , показало, что все субгенотипы B5 принадлежали к географическому кластеру моно происхождения (рис. 4).Географическая подгруппа Малайзии сыграла важную роль в последующем распространении субгенотипов B5 в течение последних 20 лет. Однако апостериорная вероятность корневого состояния не очень высока (0,4367), и этот разброс из одного источника изменился после 2007 г., и множественное происхождение было избыточным. Большинство субгенотипов B5 распространяются из других географических регионов, таких как Вьетнам и Таиланд, становятся популярными, хотя малазийская подгруппа постоянно играет важную роль в распространении субгенотипов B5.Подобно статистике статуса узла, это указывает на то, что узлы, представляющие Малайзию, Вьетнам и Таиланд, разделяют подавляющее большинство апостериорной массы. Что касается непрерывного распространения, то процесс распространения субгенотипов среди стран Юго-Восточной Азии, а также в западно-тихоокеанском регионе представляется довольно сложным.

Рисунок 4 . Масштабируемое по времени дерево MCC построено на основе всей области VP1 . Масштабируемое по времени дерево MCC показывает, что все субгенотипы B5 EV-A71 происходили из одного географического кластера.Апостериорная вероятность, индикатор филогеографии, показывает эти непрерывные процессы с особым упором на связи между Малайзией и другими странами, такими как Япония, Таиланд и Вьетнам.

Чтобы указать значимые связи, сравнивая априорную и апостериорную вероятности, мы суммировали BF, относящуюся к скоростям миграции, чтобы объяснить характер диффузии (средний Пуассоновский априор = 0,69, смещение = 15). При пороговом значении BF, равном 3,0, и пороговом значении среднего заднего значения, равном 0.5 мы наблюдали значимые связи (рис. 5). Город Пуэр (в провинции Юньнань, Китай) продемонстрировал наибольшее количество связей с Вьетнамом, в то время как самая сильная связь, наблюдаемая с BF в 2611, имела место между Японией и Цзянсу, Китай. Несколько представленных здесь связей, которые были выведены из значений BF, относительно раскрывают динамику передачи субгенотипа B5 в нескольких регионах. Однако для точной оценки миграционных событий между различными регионами требовалось больше доказательств, включая эпидемиологические исследования.

Рисунок 5 . Оценка географического происхождения и распространения субгенотипа B5 EV-A71. (A) Были идентифицированы связи пространственного распространения субгенотипа B5 EV-A71 среди мест отбора проб. Линии, соединяющие разные места, окрашены в соответствии с тепловой картой. (B) На тепловой карте показаны значения байесовского фактора (BF), рассчитанные между двумя географическими точками. Карты основаны на спутниковых снимках, доступных в Google Earth (http: // earth.google.com).

Обсуждение

Обычно классификация энтеровирусов постулирует, что ряд видов, кластеров, генотипов, субгенотипов и клад может быть определен с помощью генетических расстояний или нуклеотидных различий в области VP1 (Brown et al., 1999; Han et al., 2018). Стандартный метод обычно приводит к правильным суждениям по следующим причинам: (i) Сайты в области VP1 представляют большинство антигенных свойств. Таким образом, легко обратиться к тому, что уже известно, чтобы провести необходимые сравнения.(ii) Последовательности на участке VP1 редко упоминаются в связи с рекомбинацией (Mcwilliam Leitch et al., 2012). Напротив, рекомбинация часто происходит в неструктурных областях белка, особенно в области 3CD , и считается важным механизмом, лежащим в основе эволюции энтеровируса (Kyriakopoulou et al., 2015; Muslin et al., 2015; Volle et al. др., 2019). Однако последовательности, несущие события рекомбинации, трудно анализировать с использованием обычных филогенетических методов или методов генетической дистанции, и поэтому такие результаты редко могут быть приняты.(iii) По сравнению с последовательностями генома легче получить полные последовательности VP1 . Кроме того, большое количество последовательностей обеспечивает больший выбор, тем самым предотвращая смещение данных. Таким образом, последовательности VP1 были выбраны для реконструкции миграционных характеристик субгенотипа B5, особенно в Китае.

Апостериорная вероятность, индикатор филогеографии, показывает, что непрерывные процессы зародились в Малайзии, с особым упором на связи между Малайзией и другими странами, такими как Япония, Таиланд и Вьетнам.Мы также обнаружили, что в этих местах активны обмены популяциями, которые могли потенциально повлиять на обмен вирусными генотипами. Это согласуется с эпидемиологическими данными, указывающими на то, что эти места были свидетелями многих вспышек HFMD субгенотипа B5 EV-A71 в последние годы (Mizuta et al., 2014; Nhan et al., 2018; Noisumdaeng et al., 2018, 2019 ; Van et al., 2019). Кроме того, апостериорная вероятность предполагает наличие связей от Тайваня до Сямыня и Цзянсу в Китае и от Вьетнама до города Чунцин в Китае, а также между Таиландом, Вьетнамом и провинцией Юньнань в Китае.Однако мы не можем предполагать апостериорную вероятность. Апостериорная вероятность предполагает, что город Пуэр (в провинции Юньнань, Китай) стал новым центром распространения инфекции и сформировал единственную связь с городом Куньмин (в провинции Юньнань, Китай) после миграции из Таиланда. Вероятность распространения в пределах материковой части Китая очень мала, что, в отличие от множественных миграций из активных корней, может потребовать дальнейших исследований. Однако наблюдение за материковой частью Китая в 2017 году не привело ни к каким подобным наблюдениям.Точно так же спорны и два апостериорных вероятностных результата. Первый касается сообщения между Малайзией и Шанхаем, Китай. Необходима дополнительная информация об этом старом миграционном событии, поскольку существует небольшая разница между VP1 областей последовательностей из Шанхая, Китай, в 2011 году, и Малайзии, в 2003 году. Последовательность показала сильный строгий тактовый сигнал, который не был связан с рекомбинация. С другой стороны, открытие самого раннего географического предка и определение коммуникационных отношений между Малайзией и Сингапуром зависит только от апостериорной вероятности и не подтверждается байесовскими критериями значимости.Следующие два аспекта заслуживают внимания. Обширные исследования субгенотипа B5 EV-A71 были проведены только после вспышки в Сараваке, Малайзия, в 2003 году. К тому времени этот субгенотип стабильно циркулировал в Малайзии и даже мигрировал в другие страны. Однако алгоритмы типирования, основанные на расстоянии и расхождении нуклеотидов, часто зависят от количества статистических данных, образцов или последовательностей. Две пробы из Малайзии и Сингапура, 0815-MAA-00 и 5511 / SIN / 00, соответственно, которые были вовлечены во вспышки EV-A71 с субгенотипами B4, усилили этот недостаток (Mcminn et al., 2001; Herrero et al., 2003). Однако мы почти не обнаружили какой-либо существенной связи между Малайзией и Сингапуром с использованием BF. Хотя апостериорная вероятность выявляет потенциальную связь, у нас меньше доказательств того, что корневой субгенотип B5 EV-A71 произошел до вспышки в Малайзии в 2003 году. Единственное эпидемиологическое доказательство циркуляции субгенотипа B4 EV-A71 на полуострове предполагает что это может быть связано с Сингапуром или Сараваком, Малайзия. Фактически, мы могли потерять много эффективных доказательств.

В текущем исследовании, по сравнению с апостериорной вероятностью, BF выявил широкие связи, что привело к большим помехам. Об этом не сообщалось в предыдущем исследовании вируса Коксаки А16 (Hassel et al., 2017). Таким образом, мы предполагаем, что это может быть связано с количеством последовательностей, входящих в анализ, длиной целевых последовательностей, сходством последовательностей и сложностью пространственных процессов. Во-первых, было обнаружено, что расхождение последовательностей обычно составляет <8–10%.Кроме того, по сравнению с последовательностью генома, полные последовательности VP1 имеют меньше динамических сайтов или сайтов однонуклеотидного полиморфизма. Это говорит о том, что использование геномных последовательностей может обеспечить более точные процессы для отслеживания событий миграции. Однако это также указывает на возможность того, что высокочастотная рекомбинация может вводить в заблуждение и может привести к выводам, которые приводят к невероятным процессам. Во-вторых, BF – это алгоритм, который выявляет значимость связей через отношение априорной вероятности к апостериорной вероятности.Мы предполагаем, что на это может повлиять количество относительно консервативных последовательностей. Когда количество последовательностей уменьшается, некоторые данные с низким уровнем достоверности могут исчезнуть. Конечно, иногда мы можем потерять несколько корней одновременно. Следовательно, для точного изучения процесса миграции может потребоваться многократный выбор последовательностей, не только с учетом сигналов часов и динамики популяции, но и с учетом влияния на апостериорную вероятность.

Заявление о доступности данных

Наборы данных, созданные для этого исследования, можно найти в нуклеотидных последовательностях всего генома для семи штаммов, определенных в этом исследовании, депонированных в базе данных нуклеотидных последовательностей GenBank под номерами доступа MN966512-MN966518.

Заявление об этике

Исследования с участием людей были рассмотрены и одобрены Вторым комитетом по этике Национального института контроля и профилактики вирусных заболеваний Китайского центра контроля и профилактики заболеваний. Пациенты / участники предоставили письменное информированное согласие на участие в этом исследовании.

Авторские взносы

KH и YZ задумали и спланировали эксперименты. KH, ZH и YS проводили эксперименты.KH, YZ, DY, DW, SZ и WenbX проанализировали данные. KH и YZ написали основную рукопись. KH подготовил все таблицы и рисунки. Все авторы рецензировали рукопись.

Финансирование

Это исследование было поддержано Национальными программами исследований и разработок в области ключевых технологий Китая (проекты №№ 2017ZX10104001, 2018ZX10711001 и 2018ZX10713002), Пекинским фондом естественных наук (проект № L192014).

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Мы хотели бы поблагодарить сотрудников Центра по контролю и профилактике заболеваний Куньмина и городского центра по контролю и профилактике заболеваний в провинции Юньнань Китая за сбор клинических образцов и проведение эпидемиологических исследований.

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fcimb.2020.00475/full#supplementary-material

Список литературы

Апостол, Л.Н., Симидзу, Х., Судзуки, А., Умами, Р. Н., Цзяо, М. М., А., Тандок, А. III., Сайто, М., и др. (2019). Молекулярная характеристика энтеровируса-A71 у детей с острым вялым параличом на Филиппинах. BMC Infect. Дис. 19: 370. DOI: 10.1186 / s12879-019-3955-x