Оранж 5: Программатор Orange 5 оригинал

Программатор Orange 5 оригинал

Программатор Orange 5 оригинал

Прибор оригинальный! Обновляемый! Не Китай! Мы официальные дилеры данного прибора на территории РФ!

Прайс на площадки по запросу на эл почту [email protected].

Если Вам нужен профессиональный программатор для работы с микросхемами EEPROM, TMS, MCU, то программатор Orange 5 это то что Вы ищите. Купив Orange5 Вы сможете полноценно работать с микросхемами используемыми в автомобильной электронике: в иммобилайзерах, магнитолах, модулях подушек безопасности и прочих блоках автомобиля.

 

К программатору Orange 5 выпускается дополнительный софт таким образом по мере совершенствования своих навыков Вы сможете приобрести к нему дополнительные программные модули позволяющие работать с иммобилайзером, раскодированием магнитол, чтением защищенных микроконтроллеров

и многим другим. Программное обеспечение поддерживает работу под Windows XP/7 32bit.

​

Технические характеристики программатора Orange 5:
– подключение и питание программатора Orange5 осуществляется через интерфейс USB2.0/3.0.
– наличие высокоскоростных двунаправленных пин-драйверов с регулировкой выходного уровня (2.0-5.0V).
– наличие генератора тактового сигнала с настройкой частоты (до 24 MHz) и выходного уровня (2.0-5.0V).
– программатор Orange 5 имеет универсальную панель с нулевым усилием ZIF16 для использования при работе с EEPROM.
– возможность контроля контактов в панельке.

– наличие 2 режимов питания программатора с автоматическим определением: стандартный (USB) и усиленный (USB+внешний блок питания).
– наличие 3 источников напряжения с ограничением по току и контролем уровня: напряжения питания (регулируемый 2. 0 – 5.0V) напряжения программирования (регулируемый 2.0 – 21.0V) дополнительный нерегулируемый 10V используется для микроконтроллеров.
– наличие 2 разъемов расширения: Orange4, и Omega MTRK.
– наличие защиты от перегрузок по току.
– наличие защиты от перегрузок по напряжению.
– наличие возможности функциональной эмуляции USB-устройств класса CDC.
– наличие встроенной 32-разрядная виртуальной машины.

Программатор Orange5 подддерживает следующие интерфейсы:
– I2С
– JTAG
– UART
– BDM
– SPI
– MicroWire

– ISO7816
– K-LINE (через адаптер)
– CAN (через адаптер).

Комлпект поставки программатора Orange5:
– Программатор Orange 5 Корпусное исполнение.
– USB кабель

Orange5 (базовая версия – оригинал)

Orange5 является профессиональным программатором памяти и микроконтроллеров предназначен для работы с автомобильной электроникой, микросхем EEPROM, TMS, MCU используемых в иммобилайзерах, магнитолах и других электронных устройствах автомобиля.

С использованием дополнительного программного обеспечения приобретаемого отдельно, программатор позволит выполнять работы с иммобилайзером, раскодированием магнитол, чтением защищенных микроконтроллеров.

Технические характеристики программатора Orange5

• Подключение и питание через интерфейс USB2.0 / 3.0.
• Универсальная панель с нулевым усилием ZIF16 для EEPROM.
• Контроль контактов в панельке.
• 2 разъема расширения: Orange4, и Omega MTRK.
• Защита от перегрузок по току.
• Защита от перегрузок по напряжению.
• 2 режима питания программатора с автоматическим определением: стандартный (USB) и усиленный (USB+внешний блок питания)
• 3 источника напряжения с ограничением по току и контролем уровня: напряжения питания (регулируемый 2.0…5.0V) напряжения программирования (регулируемый 2. 0…21.0V) дополнительный нерегулируемый 10V для микроконтроллеров.
• Высокоскоростные двунаправленные пин-драйвера с регулировкой выходного уровня (2.0…5.0V).
• Генератор тактового сигнала с настройкой частоты (до 24 MHz) и выходного уровня (2.0…5.0V).
• Возможность функциональной эмуляции USB-устройств класса CDC.
• Встроенная 32-разрядная виртуальная машина.
• Поддержка интерфейсов I2С, SPI, MicroWire, JTAG, UART, BDM, ISO7816, K-LINE (через адаптер), CAN (через адаптер).
• Корпусное исполнение.
• Программное обеспечение под Windows XP/7 32bit.

Дополнительные адаптеры для Orange5

Адаптер	Cтоимость (EUR)
Адаптер для микросхем SOIC8/DIP8 Expert	42
Адаптер для микросхем SOIC8/DIP8	–
Адаптер для микросхем SOIC8_14_93Cxx (пайка)	3
Адаптер для микросхем SSOP8/DIP8 (пайка)	2
Кабель с прищепками SOIC8 & DIP8	62
Адаптер для микроконтроллеров ST62xx PQFP52/82 (пайка)	4
Адаптер для микросхем MDA206X/O5	4
Адаптер для микроконтроллеров 05L28/05B	12
Адаптер для микроконтроллеров 908AS60/AZ60 QFP64 (пайка)	5
Адаптер для микроконтроллеров 68HC(7)05P3/E6 (пайка)	5
Адаптер для микросхем 05B/X_705B/X QFP64 V2 (пайка)	6
Адаптер для микросхем 11PA8/11E9 QFP64 (пайка)	5
Адаптер для микроконтроллеров 68HC05h22	5
Адаптер для микроконтроллеров 68HC11EA9	6
Адаптер для микроконтроллеров 908AS60	5
Адаптер для микросхем 9S12Dxx (пайка)	5
Адаптер для микросхем 912Dxx (пайка)	5
Адаптер для микросхем 9S12X (пайка)	5
Адаптер для микросхем 912B32 QFP80 (пайка)	5
Адаптер для микросхем 68HC11F1	6
Адаптер для микросхем 68HC11L6	6
Адаптер для микросхем 68HC11KA4 (пайка)	6
Кабель 05B6 WDT VW immo внутристемый	10
Кабель 11E9(20) с питанием	10
Кабель для EWS3 с маской 0D46J	10
Кабель 11KA4 с питанием	10
Кабель 912 (9S12) внутрисхемный	5
Кабель 908 (08) внутрисхемный	5
Кабель 705E6 внутрисхемный	5
Адаптер для микросхем TMS374C003A (пайка)	6
Экстрактор для микросхем PLCC	5
Адаптер ISO keycard	N. A.
Адаптер для микросхем 68HC11KA4 PLCC68	6
Адаптер для микросхем NDM457 для Orange-5	6
Адаптер для микросхем NAND FLASH для Orange-5 (пайка)	6
Адаптер для микросхем PICAVR	25
Адаптер для микросхем 908JL (пайка)	5
Адаптер для микросхем PCF7941 (пайка)	6
Адаптер универсальный MSP430F (пайка)	10
Адаптер для микроконтроллеров 9S12XE (пайка)	5
Адаптер для микросхем SPI Flash 25Fxx (в корпусах SOIC8/16) (пайка) НОВЫЙ	3

Дополнительное программное обеспечение (пакеты) для Orange5

Пакет	Cтоимость (EUR)
Immo HPX 8V0	300
Renesas SRS by CAN HPX НОВЫЙ	400
RCDtools	130
CarRadio Nissan LCN	400
ST92Fxxx	60
M35080 Eraser (без V серии)	20
NDM457	10
NEC V850ES/SJ3 V850ES/SG3 UART	60
NEC V850E2 НОВЫЙ	60
Unlock13 Ford Visteon	25
ISO keycard reader	10

Дополнительные лицензии для Orange5

Лицензия	Cтоимость (EUR)
Лицензия MTRK (Включена в стоимость базы)	0
Лицензия TMS (Включена в стоимость базы)	0
Лицензия для программирования M08V НОВАЯ	50

Все дополнительные функции возможно приобрести в любое время по требованию.

Orange 5 (Копия – Полный комплект)

Программатор Orange5 является профессиональным инструментом для программирования памяти и микроконтроллеров. Уникальной особенностью программатора является встроенный макроязык для разработки собственных протоколов, что дает возможность быстро и легко добавлять новые типы микросхем, выполнять требования производителей для алгоритмов чтения/записи.

• Версия программного обеспечения: V1.34, (не обновляется).
  
• Поддерживает Русский язык
  
• Работает на ОС Windows XP, 7, 8

Программные лицензии, поставляемые с этой версией Orange5:

• MTRK (включена в базовую версию Orange-5).
• TMS (включена в базовую версию Orange-5).
• M08V NEW.
• Immo HPX 9V0.
• NEC V850ES/SJ3 V850ES/SG3 UART.
• NEC V850E2 NEW.

Характеристики программатора Orange5:

• Питание от USB (USB2.0/3.0)
• Универсальная панель ZIF16 для подключения EEPROM
• Контроль контактов в разъёме для программирования
• Дополнения совместимые с Orange4 и Омега МТРК
• Защита от перегрузок
• Защита от перегрузки по напряжению
• Два вида питания: Стандартное (USB) и усиленное (USB кабель + внешний источник питания)
• Три вида регулировок питания по напряжению, току: Напряжение для блока питания (2.0…5.0В), напряжение для программирования (2.0…21.0В), дополнительное статическое напряжение (10.0В) для микроконтроллеров
• Высокоскоростные двунаправленные драйвера контактов с регулировкой напряжения (2. 0…5.0 Вольт)
• Генератор волнового цикла на частоте (до 24 Мгц) и регулирование выходного напряжения (2.0…5.0В).
• Возможности функциональной эмуляции USB-устройств класса CDC
• Встроенная 32-разрядная виртуальная машина
• Поддержка интерфейсов: I2C, SPI, MicroWire, JTAG, UART, BDM, ISO7816, K-линии (через адаптер), шины CAN (через адаптер).
• Программатор поставляется в функциональном корпусе и поддерживает работу программного обеспечения и драйверов для операционных систем Windows XP, 7, 8

Функции программатора Orange5:

• Для работы с терминальными COM портами использует программу CnCterm.
• Поддержка COM портов, в том числе до 20 виртуальных.
• Поддерживает режимы работы, текстовый (ASCII) и шестнадцатеричный HEX-режим.
• Поддерживает создание списка команд, который позволяет редактирование и быструю отправку.
• Точная настройка скорости обмена.
• Сохранение файлов включая команды и параметры порта.
• Сохранение получаемых данных в двоичные файлы
• Передача файлов через последовательный порт.
• Настройки задержки для передачи данных (байт, блоков).
• Терминальный Режим “Эхо”
• Настройки задержки между получаемыми данными
• Управление DTR, цепочками RTS, визуализация DSR, CTS, CD, RI
• Программное обеспечение не нуждается в установке
• Поддержка программатора Orange 5 в режиме эмуляции.

Комплектация программатора Orange 5:

1. Программатор Orange-5 – 1шт.
2. Адаптер питания – 1шт.
3. Кабель USB – 1шт.
4. Внутрисхемные провода – 10шт.
5. Адаптер экспертный SOIC8/DIP8 – 1шт.
6. Адаптер SOIC8/DIP8 – 1шт.
7. Адаптер SOIC8_14_93Cxx – 1шт.
8. Адаптер SSOP8/DIP8 – 1шт.
9. Прищепка SOIC8 & DIP8 – 1шт.
10. Адаптер 05L28/05B – 1шт.
11. Адаптер 908AS60/AZ60 QFP64 – 1шт.
12. Адаптер 68HC(7)05P3/E6 – 1шт.
13. Адаптер 05B/X_705B/X QFP64 V2 – 1шт.
14. Адаптер 11PA8/11E9 QFP64 – 1шт.
15. Адаптер 68HC05h22 – 1шт.
16. Адаптер 68HC11EA9 – 1шт.
17. Адаптер 908AS60 – 1шт.
18. Адаптер 9S12Dxx – 1шт.
19. Адаптер 912Dxx – 1шт.
20. Адаптер 9S12X – 1шт.
21. Адаптер 912B32 QFP80 – 1шт.
22. Адаптер 68HC11F1 – 1шт.
23. Адаптер 68HC11L6 – 1шт.
24. Адаптер 68HC11KA4 – 1шт.
25. Прищепка с питанием 11E9(20) – 1шт.
26. Прищепка для EWS3 0D46J – 1шт.
27. Адаптер TMS374C003A – 1шт.
28. Адаптер MSP430F – 1шт.
29. Адаптер 68HC11KA4 PLCC68 – 1шт.
30. Адаптер 908JL – 1шт.
31. Адаптер PCF7941 – 1шт.
32. Адаптер 9S12XE – 1шт.

Список поддерживаемых микросхем Orange-5 для версии 1.34 [Ноябрь 2015]

Мы обсуждаем и исследуем работу с каждым прибором, диагностическим сканером, программатором, делимся опытом использования, обсуждаем исправления и доработки, делаем инструкции и производим консультации на форуме автомобильных диагностов и электриков CARTELL.RU

Обсуждение и отзывы по работе программатора Orange 5 Копия (Полный комплект) доступны по ссылке Программатор Orange 5 Копия (Полный комплект)

Программатор Orange 5 для работы с микросхемами EEPROM, TMS, MCU

Аналог программатора Orange 5 для работы с микросхемами EEPROM, TMS, MCU. Благодаря программатору Orange5 Вы сможете полноценно работать с микросхемами используемыми в автомобильной электронике: в иммобилайзерах, магнитолах, модулях подушек безопасности и прочих блоках автомобиля. Программное обеспечение поддерживает работу под Windows XP/7 32bit.

Калькуляторы работают! NEC читает-пишет!

Технические характеристики программатора Orange 5:

– подключение и питание программатора Orange5 осуществляется через интерфейс USB2.0/3.0.

– наличие высокоскоростных двунаправленных пин-драйверов с регулировкой выходного уровня (2.0-5.0V).

– наличие генератора тактового сигнала с настройкой частоты (до 24 MHz) и выходного уровня (2.0-5.0V).

– программатор Orange 5 имеет универсальную панель с нулевым усилием ZIF16 для использования при работе с EEPROM.

– возможность контроля контактов в панельке.

– наличие 2 режимов питания программатора с автоматическим определением: стандартный (USB) и усиленный  (USB+внешний блок питания).      

– наличие 3 источников напряжения с ограничением по току и контролем уровня: напряжения питания (регулируемый 2.0 – 5.0V) напряжения программирования (регулируемый 2.0 – 21.0V) дополнительный нерегулируемый 10V используется для   микроконтроллеров.

– наличие 2 разъемов расширения: Orange4, и Omega MTRK.

– наличие защиты от перегрузок по току.

– наличие защиты от перегрузок по напряжению.

– наличие возможности функциональной эмуляции USB-устройств класса CDC.

– наличие встроенной 32-разрядная виртуальной машины.

Программатор Orange5 поддерживает следующие интерфейсы:

– I2С

– JTAG

– UART

– BDM

– SPI

– MicroWire

– ISO7816

– K-LINE (через адаптер)

– CAN (через адаптер).

Комплект поставки программатора Orange5:

– основное устройство программатор Orange 5.

– USB кабель

– диск с ПО
– полный Full комплект адаптеров (как на фото)

ВНИМАНИЕ!
Запрещено обновлять и использовать стороннее ПО из интернета.
Если вы произведете обновление – программатор выйдет из строя и это будет не гарантийный случай.

19 причин покупать / не покупать Orange Five (октябрь 2021 г.)

Сводка обзоров

Мы прочитали все обзоры экспертов и пользователей о Orange Five. В общем, так думают велосипедисты.

13 причин купить

• Five быстро разгоняется – и сохраняет невероятную скорость.

• Эта буровая установка имеет широкий спектр применения; трассы, скоростной спуск и эндуро.

• «Flickable» – это термин, который часто используется для обозначения быстрой манеры Five.

• Благодаря конструкции с одним шарниром, Five было легко обслуживать и чистить.

• Улучшена функция Anti-приседания, что означает меньшее покачивание при вращении педалей.

• Шарнир был расширен на 5 мм с каждой стороны, что повысило жесткость.

• Для неукротимого алюминиевого зверя Five – легкий.

• Ход подвески был увеличен по сравнению с предыдущими моделями.

• Обновленная геометрия имеет более слабый угол наклона головы 65 °.

• Размеры трубок соответствуют размеру рамы.

• Прокладка кабелей была переосмыслена, чтобы она выглядела более аккуратно.

• У Orange Five теперь есть выступы для бутылок на нижней стороне нижней трубы.

• Задний амортизатор Fox Float DPX2 Factory диаметром 210 мм имеет на 5 мм больше, чем у предыдущей модели.

6 причин не покупать

• Гонщики испытали отдачу педали на очень пересеченной местности.

• Блокировку нужно было использовать на квартирах с более жестким педалированием.

• Из-за того, что бобышки находились на нижней стороне нижней трубы, бутылки становились грязными.

• Один обозреватель посчитал, что Five был дорогим для легкосплавного велосипеда.

• Относительно небольшой угол наклона подседельной трубы утомлял одного эксперта при длительных подъемах.

• Пятерка требовала пристального внимания всадника, чтобы избежать неумолимой реакции на разрозненных трассах.

Нижняя линия

Orange’s Five сохраняет культ последователей почти 20 лет. Профи и энтузиасты-любители любят байк за то, что он быстрый, веселый и увлекательный. Но это «взаимодействие» требует определенной цены. По мнению экспертов, на борту «Пятерки» вам нужно внимательно сконцентрироваться, если только вы не хотите испытать какие-то последствия в виде отдачи. Несмотря на то, что блокировку заднего амортизатора необходимо было использовать на плоских участках с быстрым вращением педалей, большинство гонщиков не возражали, потому что в целом он предлагал дополнительный комфорт.Это последняя модель с простым, быстрым и высокопроизводительным дизайном, которая продолжает радовать и впечатлять любителей острых ощущений.

www.scorpio-lk.com

	Immo HPX V10 (декабрь 2017 г.) НОВЫЙ Программное обеспечение покажет вам больше секретов о том, как полностью использовать программатор Orange-5 для чтения EEPROMS, TMS, MCU, анализа данных и быстрого решения проблем с иммобилайзером. Подробный список здесь.
	Автомобильные радиоприемники HPX V8.0 (февраль 2019 г.)
	Лицензия M08V (ноябрь 2015 г. ) Лицензия M08V для программатора Orange-5 в настоящее время поддерживает сканирование SS и работу со следующими типами контроллеров Motorola / Freescale: 908AB32 908AP32A 908GP32 908KX2 908LJ12 908LJ24 908LK24 908QC16 908GR16A 908GR48A 908GZ60
	Renesas / NEC V850 UART V2.0 (июнь 2015) Тип подключения Orange-5 <-> UART, 5 проводов, программирование в схемной системе (GND RESET FLMD0 RXD TXD VCC) Показывает тип микросхемы, состояние безопасности чтения включено. Чтение, запись, стирание. Активация защиты от чтения. Работа с кварцем 2,50 – 16,00 МГц. Подробный список здесь
	Renesas / NEC V850E2 FLUR0RTX V3.0 (сентябрь 2019) Тип подключения Orange-5 <-> FLUR0RTX Показывает тип микросхемы, состояние безопасности чтения включено. Чтение, запись, стирание. Активация защиты от чтения. Работа с кварцем 4,00 – 16,00 МГц. Подробный список здесь
	Поддерживаемые процессоры: ST92F120V1Q7 ST92F120V9Q7 ST92F124V1QB ST92F150CV1QB ST92F250CV2QB Характеристики модуля: Программирование в схемотехнической системе Чтение / запись / стирание FLASH Чтение / запись / стирание EEPROM OTP read Locked EEPROM read, write, erase if Flash is Unlocked!
	FD2500, FD3000, FD4000, FD4500, FD5000, FD6000, FD7000, Mercedes TruckLine
	M35080 Ластик (без серии V) M35080 Ластик (без серии V)

Округ Ориндж сообщает о первой связанной с COVID-19 смерти ребенка младше 5 лет – NBC, Лос-Анджелес,

В пятницу официальные лица подтвердили, что через год после первого летального исхода среди несовершеннолетних от COVID19, еще один ребенок скончался от осложнений от коронавируса, но этому подростку было меньше 5 лет.

Должностные лица не разглашали возраст или пол ребенка, но сказали, что юноша был младше 5 лет и имел серьезные проблемы со здоровьем.

Наблюдатель округа Ориндж Катрина Фоли, работавшая над повышением осведомленности о влиянии очень заразного варианта Дельта на детей в округе, сказала, что ей сказали, что у ребенка уже были заболевания с рождения и он был инфицирован взрослым.

«Это просто душераздирающе», – сказал Фоули. «Но на самом деле единственный выход из этой пандемии – и вы слышали, как я говорил это тысячу раз – это сделать вакцинацию.«

Доктор Клейтон Чау, главный санитарный врач округа и директор Агентства здравоохранения округа Ориндж, выступил с заявлением, в котором говорилось: «Я очень люблю его семью, потерявшую драгоценную молодую жизнь. Это срочное напоминание о том, что мы должны делаем все возможное, чтобы защитить наших малышей, детей и младенцев в нашем сообществе, которые еще не имеют права на вакцинацию ».

В пятницу в округе погибло еще четыре человека, все из которых произошли в августе. В августе число погибших составляет 110 человек, что намного больше, чем в июле погибло 20 человек.

Еще один смертельный случай в связи с COVID-19 среди несовершеннолетних в округе произошел в августе прошлого года.

Жертвой стала девочка-подросток с серьезными сопутствующими заболеваниями.

Восемь жителей в возрасте от 18 до 24 лет скончались от COVID-19, а 64 человека относятся к возрастной группе от 25 до 34 лет.

Четыре человека со смертельным исходом, зарегистрированные в пятницу, увеличили общее число погибших до 5299 человек.

За сентябрь пока нет сообщений о смертельных случаях.

Число погибших в июне составило всего 17, 23 мая, 45 в апреле, 199 в марте, 615 в феврале, 1578 в январе – самом смертоносном месяце пандемии – и 975 в декабре, следующем по смертоносности.

Число госпитализаций из-за вируса в пятницу продолжило снижаться.

Число пациентов с COVID-19 снизилось с 432 в четверг до 426, а количество пациентов в отделениях интенсивной терапии упало со 132 до 130.

В округе имеется 21,8% коек интенсивной терапии и 64% аппаратов ИВЛ.

Эндрю Ноймер, эпидемиолог и профессор Калифорнийского университета в Ирвине, занимающийся вопросами здоровья населения и профилактики заболеваний, считает, что снижение было незначительным. «Это все еще движется в правильном направлении.«

Ноймер сказал, что тенденции в округе Ориндж отражают то, что происходит в округе Контра-Коста, что, по его словам, аналогично.

«Мы видим это также в округе Контра-Коста – инфекция снижается», – сказал Ноймер. «Похоже, наша летняя волна идет на спад, но у нас будет зимняя волна. Мы еще не закончили с Covid».

Неизвестно, будет ли всплеск в связи с собраниями ко Дню труда. Ноймер указал на Пасху в прошлом году, когда официальные лица ожидали всплеска, но не получили его.

Если будет всплеск Дня труда, это, вероятно, станет очевидным где-то на следующей неделе.

По данным Агентства здравоохранения округа Ориндж, большинство пациентов округа Ориндж не вакцинированы. По данным OC HCA, последний раз полностью вакцинированный пациент был госпитализирован 21 августа.

OCHCA также добавило на свой веб-сайт новые показатели заболеваемости на 100 000 жителей в различных возрастных группах, которые распределяются следующим образом: – Среди младенцев до 3 лет показатель заболеваемости составляет 6.3;

– для детей 4-9 лет – 12,9;

– для 10-12 лет – 13,5;

– для 13-14 лет – 16,1;

– для 15-18 лет – 15,7;

– для 19-24 лет – 17,7;

– для 25-34 лет, это 19;

– для возраста 35-44 лет, это 17 лет;

– для 45-54 лет, это 14 лет;

– для 55-64 лет – 11,9;

– для 65-74 лет – 8,5;

– для 75-84 лет – 9,4;

– для лиц старше 85 лет – 7.6.

Во вторник еженедельные показатели случаев заболевания COVID-19 и положительных результатов в округе значительно снизились, что дает дополнительные доказательства того, что округ выходит из летнего всплеска.

Средний дневной уровень заболеваемости в округе на 100 000 жителей упал с 18,6 на прошлой неделе до 16, а показатель положительных результатов тестирования упал с 6,8% до 5,4%.

Уровень справедливости в отношении здоровья в округе, который измеряет воздействие пандемии на неблагополучные сообщества, снизился с 7,3% до 5.8%.

Согласно данным, опубликованным в четверг, в округе проживает 2 043 693 полностью вакцинированных жителя из 3,2 миллиона населения.

Это число включает 1 908 595 человек, получивших двухдозовую вакцину от Pfizer или Moderna, и 135 098 человек, получивших однократную вакцину Johnson & Johnson. 288 020 жителей получили хотя бы одну дозу вакцин Pfizer или Moderna.

В округе 455 692 ребенка в возрасте 11 лет и младше, которые еще не имеют права на вакцинацию.

Уровень заболеваемости в округе среди полностью вакцинированных жителей по состоянию на субботу, по последним имеющимся данным, составлял 4,4 на 100 000, но 26 на 100 000 среди непривитых.

В пятницу OCHCA сообщило о 563 новых случаях инфицирования, в результате чего общее число случаев с момента начала пандемии увеличилось до 289 798 случаев.

Некоторые эксперты обеспокоены сезоном гриппа в этом году, так как все больше учеников вернулись в классы. В прошлом году предупреждения о «твиндемии» не оправдались, и некоторые эксперты заявили, что это произошло из-за широко распространенной маскировки, но тогда большее количество студентов обучались с помощью удаленных программ из дома.

«В прошлом году это было сильно преувеличено», – сказал Ноймер о прогнозах «твиндемии».

Ноймер сказал, что термин «твиндемия подразумевает кризис, так что это очень панический термин».

Он добавил: «еще неизвестно», сколько людей заразились гриппом в этом году.

«Я думаю, что у нас будет больше гриппа, чем в прошлом году», – сказал Ноймер, добавив, что «это будет похоже на обычный сезон гриппа».

Ноймер сказал, что так называемый вариант Mu «определенно вызывает беспокойство в лаборатории, но в реальном мире он не мешает мне спать по ночам, но мы продолжаем следить за этим.«

Вариант Mu возник в Колумбии.

«В лаборатории кажется, что у него есть способность уклоняться от вакцины, но еще неизвестно, сбьет ли он Delta с места», – сказал Ноймер.

Дельта зарекомендовала себя гораздо более заразной, чем другие варианты, и считается такой же заразной, как ветряная оспа. Пока не известно, насколько трансмиссивен Му.

Ноймер похвалил последние распоряжения о вакцинах, принятые федеральным правительством, но раскритиковал сообщения.

«Я думаю, это имеет смысл», – сказал Ноймер.

Для тех, кто возражает против предписаний: «Существует возможность тестирования, поэтому никто, кто категорически возражает против вакцинации, не будет вакцинирован против их воли», – сказал Ноймер.

По словам Ноймера, вакцинацию требуют не только федеральные и местные органы власти, но и частные компании.

«Совершенно очевидно, что организации могут требовать этого по закону, поэтому я полностью за это, но я не думаю, что это правильная риторика – бросать непривитых под автобус, как это сделал (президент Джо Байден)», – сказал Ноймер.

RunCam 5 Orange Руководство пользователя

RunCam 5 оранжевый

Схема инструкции

Зарядка

Порт Micro USB поддерживает источник питания постоянного тока 5-15 В. Рекомендуется зарядное устройство постоянного тока 5 В, 1 ~ 2 А. Красный светодиод загорится во время зарядки и выключится, когда зарядка будет завершена. Полная зарядка занимает около 2 часов.

Предупреждения о низком заряде батареи

При включении, если заряд менее 25%, синий светодиод будет продолжать мигать в течение 3 секунд.

Основные операции с камерой

Карта MicroSD

Вставьте карту microSD, как показано значком рядом с гнездом для карты. Используйте фирменные карты памяти (продаются отдельно), отвечающие следующим требованиям:

• MicroSD, microSDHC или microSDXC
• Рекомендуется U3 (2.7K50 / 2.7K60 1080P120 требуется U3 или выше; для других разрешений требуется U1 или выше)
• Емкость до 128 ГБ

ВНИМАНИЕ:

Соблюдайте осторожность при обращении с картами памяти.Избегайте жидкостей, пыли и мусора. В качестве меры предосторожности выключите камеру, прежде чем вставлять или извлекать карту. Ознакомьтесь с инструкциями производителя относительно использования в приемлемых температурных диапазонах.

Ненормальное состояние SD-карты:

Если синий индикатор продолжает быстро мигать после включения, это означает, что SD-карта не вставлена, заполнена или не может быть распознана.

Подключение к компьютеру

После включения камеры подключите ее к компьютеру через USB-кабель, она будет распознана как съемный диск.

УВЕДОМЛЕНИЕ:

Если камера не распознается компьютером после подключения, убедитесь, что карта microSD вставлена ​​правильно. Если информация на карте microSD не читается нормально, попробуйте использовать другой кабель micro USB или порт USB на компьютере.

Обновление прошивки

Для обеспечения оптимальной работы камеры используйте последнюю версию прошивки. Метод обновления здесь: https://runcam.com/download/runcam5or.

Битрейт видео и кодек

Параметр

Техническая поддержка

Посетите: https: // support.runcam.com

RunCam 5 Orange Руководство пользователя – Загрузить [оптимизировано]
RunCam 5 Orange Руководство пользователя – Загрузить

Orange Five 2020 отпраздновал 20-летие более продолжительного капитального ремонта

С 20-летней историей Orange Five является одной из самых легендарных платформ для горных велосипедов. Хотя его форма все еще была знакома тем, кто был рядом с ним, когда он был впервые выпущен, это совсем не так, потому что идеология Orange – эволюция, а не революция, удержала эту рабочую лошадку на вершине тенденций в области горных велосипедов.
Five остается универсальным трейловым байком Orange на 2020 год, но он претерпел такую ​​же переделку, как и Alpine 6, чтобы создать предположительно лучшую езду. Заголовок здесь – увеличение хода задней части на 5 мм до 145 мм. Задний амортизатор теперь метрический, а кривая немного изменена для большей прогрессии. Orange также немного уменьшил антиприседания, чтобы мотоцикл выглядел более живым, когда вы опускаете педали.
Ремесленники из Orange также изменили геометрию Five.Угол наклона головы теперь уменьшился на 65 градусов, в то время как BB на 5 мм ниже, нижние перья увеличились на 7 мм, а вылет увеличился на 10 мм (размер L). В то время как рулевые колонки на больших и больших байках были укорочены в результате обратной связи с гонщиками.
Как и его стабильный собрат Alpine 6, Orange внес изменения в размеры и для Five. XS был исключен из ассортимента, в то время как они добавили XXL на другом конце шкалы и укоротили подседельную трубу на XL.

Наконец, Orange поработал над более мелкими деталями.Капитальный ремонт прокладки кабеля проще для глаз и сводит к минимуму образование больших петель. Все детали с ЧПУ на раме, верхних и нижних опорах амортизаторов, дропаутах и ​​корпусах подшипников претерпели изменения.

2020 Orange Five Details
• Предполагаемое использование: трейл
• Совершенно новая алюминиевая рама монокока 6061-T6, произведенная в Великобритании
• Пятилетняя гарантия на раму
• Конструкция подвески с одним шарниром
• Изменена более длинная и более расслабленная геометрия плюс измененная кривая подвески
• 150 мм ход спереди / 145 мм сзади
• Boost 148, расстояние между ступицами сзади
• Четыре уровня спецификации
• Цены от: 3900 фунтов стерлингов (5130 долларов США.74USD)
• orangebikes.co.uk/


С сегодняшнего дня Five будет доступен в четырех модификациях:

Five Pro по цене от 3900 фунтов стерлингов

Five RS от 4850 фунтов стерлингов

Five Factory (вверху) от £ 5700.

Five XTR по цене 6700 фунтов стерлингов.

Каждый из этих велосипедов доступен в 10 цветах. Оранжевый и черный всегда бесплатные, а остальные восемь стоят дополнительно 100 фунтов стерлингов. Также есть три варианта наклеек на выбор.

Как обычно, доступны все остальные варианты обновления.Подробности см. На веб-сайте Orange.

Идентификация двойного фоторецептора оранжевого / дальнего красного и синего света из океанического зеленого пикопланктона

Прогнозирование генов

CRY и идентификация организма-хозяина

Мы использовали собранные данные морского метагенома, собранные в заливе Сендай и на западе. субарктический Тихий океан 2012–2014 (http://marine-meta.healthscience.sci.waseda.ac.jp/crest/metacrest/graphs/) и проверил белковые домены с помощью InterProScan v5.40-77,0 ³⁴ . Белки определялись как кандидаты CRY, если они имели следующие три домена: «N-концевой ДНК-фотолиаза (IPR006050)», «Россман-подобная альфа / бата / альфа-сэндвич-складка (IPR014729)» и «Криптохром / ДНК-фотолиаза, FAD- связывающий домен (IPR005101) », следуя методу dbCRY ³⁵ . Мы также исключили известные CRY, которые совпадали с базой данных NCBI nr ³⁶ с помощью быстрого поиска ³⁷ . Чтобы найти организм-кандидат-хозяин, мы применили бласт-поиск по данным MMETSP (Проект последовательности транскриптомов морских микробов эукариот) ³⁸ .Культурный штамм P. provasolii NIES-2893 был получен из Национального института экологических исследований Японии.

Филогенетический анализ областей Phy и Cry DUC1

Для филогенетического анализа DUC1 мы разделили его на участки Phy (1–3087 нуклеотидов) и Cry (3143–5073 нуклеотидов). Наборы данных регионов Phy и Cry состояли из 54 операционных таксономических единиц (OTU) и 96 OTU, соответственно, включая доступные гомологи из официальных баз данных.Эти последовательности были выровнены с использованием mafft v7.453 ³⁹ с опцией linsi, а неоднозначные области были обрезаны с использованием v1.4.rev15 ⁴⁰ с опцией automatic1. Обрезанный набор данных содержал 457 и 353 аминокислот для областей Phy и Cry соответственно. Модельный тест проводился с помощью ModelTest-NG v0.1.5 ⁴¹ . Анализ максимального правдоподобия был выполнен с использованием RAxML-NG v0.9.0 ⁴² с 200 повторениями начальной загрузки.

Конструирование плазмиды для спектральной характеристики PpPHY и PpCRY

Для клонирования ДНК использовали штаммы Escherichia coli Mach2 T1 ^R (Thermo Fisher Scientific) и DH5α (TaKaRa).Эти клетки выращивали на агаровой среде Lysogeny Broth (LB) при 37 ° C. Трансформированные клетки отбирали 20 мкг мл ^-1 канамицина или 100 мкг мл ^-1 ампициллина.

Область PpPHY (1-1986 п.н. в PpDUC1 ) была клонирована в сайты Nde I и Bam HI вектора pET28a с N-концевым His-тегом (Novagen) с использованием системы сборки Гибсона ( Биолаборатории Новой Англии, Япония). Фрагмент ДНК области PpPHY амплифицировали с помощью ПЦР с использованием смеси KOD One ^TM PCR Master Mix (Toyobo Life Science) с оптимизированным по кодонам синтетическим геном для экспрессии в E.coli (Genscript) и соответствующий набор нуклеотидных праймеров (дополнительная таблица 2). Вектор pET28a амплифицировали с помощью ПЦР с использованием ДНК-полимеразы с матричной ДНК и подходящего набора нуклеотидных праймеров (дополнительная таблица 2).

Область PpCRY (3115–5073 п.н. в PpDUC1 ) была клонирована в сайты EcoR I и Xba I вектора ДНК pCold GST с N-концевой GST-меткой (TaKaRa) с использованием рестрикции. ферменты и лигаза. Фрагмент ДНК области PpCRY амплифицировали с помощью ПЦР с использованием ДНК-полимеразы PrimeSTAR Max (TaKaRa) с геномной ДНК из P.provasolii и соответствующий набор нуклеотидных праймеров (дополнительная таблица 2). Все плазмидные конструкции были проверены нуклеотидным секвенированием (FASMAC).

Экспрессия и очистка PpPHY, слитого с His-tag

Штамм E. coli C41 (Cosmo Bio) был использован для экспрессии His-меченного PpPHY (положения аминокислот 1–662 в PpDUC1) через pKT270, pKT271 и pKT272 конструирует как синтетические системы биливердина IXα (BV), фикоцианобилина (PCB) и фитохромобилина (PΦB) соответственно ^11,43 .Бактериальные клетки выращивали в среде LB, содержащей антибиотики (20 мкг мл ^-1 канамицин и 20 мкг мл ^-1 хлорамфеникола) при 37 ° C. Для экспрессии белка после того, как клетки достигли оптической плотности 0,4–0,8 при 600 нм, добавляли изопропил-β-d-1-тиогалактопиранозид (IPTG) (конечная концентрация 0,1 мМ) и клетки культивировали при 18 ° C в течение ночи. .

После инкубации культуральный бульон центрифугировали при 5000 × g в течение 15 минут для сбора клеток.Клетки ресуспендировали в буфере для лизиса A (20 мМ HEPES – NaOH, pH 7,5, 100 мМ NaCl и 10% (мас. / Об.) Глицерина) с 0,5 мМ трис (2-карбоксиэтил) фосфина, а затем разрушали с использованием Emulsiflex C5 high- гомогенизатор под давлением 12000 фунтов на квадратный дюйм (Avestin). Гомогенаты центрифугировали при 165000 × g в течение 30 минут, а затем супернатанты фильтровали через мембрану из ацетата целлюлозы 0,8 мкм перед загрузкой на никель-аффинную колонку HisTrap HP (GE Healthcare) с использованием системы ÄKTA pure 25 (GE Healthcare). .Колонку промывали с использованием буфера для лизиса, содержащего 100 мМ имидазола, и затем, меченный His PpPHY, включенный в каждый хромофор, элюировали линейным градиентом буфера для лизиса, содержащего от 100 до 400 мМ имидазола (1 мл мин. ^-1 , всего 15 мин). После инкубации с 1 мМ EDTA в течение 1 ч, His-меченный PpPHY диализовали против лизисного буфера с 1 мМ дитиотреитолом (DTT) для удаления EDTA и имидазола ^44,45 . Очищенные белки диализовали против буфера для лизиса А, содержащего 1 мМ дитиотреитол (DTT).Концентрацию белка определяли по методу Брэдфорда.

Экспрессия и очистка PpCRY, слитого с GST-тегом

Штамм E. coli C41 был использован для экспрессии GST-меченного PpCRY (положения аминокислот 1039–1690 в PpDUC1) через конструкцию pG-KJE8 в качестве шаперона. система (TaKaRa) ¹³ . Бактериальные клетки выращивали в среде LB объемом 8 л, содержащей 500 мкг мл ^-1 l-арабинозы и антибиотики (5 нг мл ^-1 тетрациклин, 100 мкг мл ^-1 ампициллин и 20 мкг мл ^-1 хлорамфеникола. ) при 37 ° С.Для экспрессии белка, когда оптическая плотность клеток при 600 нм достигала 0,4–0,8, добавляли IPTG (конечная концентрация 1 мМ) и клетки культивировали при 15 ° C в течение ночи.

После инкубации культуральный бульон центрифугировали при 5000 × g в течение 15 минут для сбора клеток. Их ресуспендировали в буфере для лизиса B (20 мМ HEPES – NaOH, pH 7,5, 500 мМ NaCl, 5 мМ DTT и 10% (мас. / Об.) Глицерина), а затем разрушали с использованием гомогенизатора при 12000 фунтов на квадратный дюйм. Гомогенат центрифугировали при 165000 × g в течение 30 минут и супернатант фильтровали через мембрану перед загрузкой на колонку с глутатион-сродством GSTrap HP (GE Healthcare).Колонку промывали буфером для лизиса B для удаления несвязавшихся белков, а затем GST-меченный PpCRY элюировали буфером, содержащим 10 мМ восстановленного глутатиона. Концентрацию белка определяли по методу Брэдфорда. С экстрагированным белком обращались в темноте.

Анализ электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия для очищенных PpPHY и PpCRY

Очищенные белки разбавляли 60 мМ DTT, 2% (мас. / Об.) SDS и 60 мМ Tris-HCl, pH 8,0, а затем денатурировали при 95 ° C в течение 3 мин.Эти образцы подвергали электрофорезу при комнатной температуре с использованием 10% (мас. / Об.) Полиакриламидных гелей с SDS. Гели замачивали в дистиллированной воде на 30 мин с последующим мониторингом полос флуоресценции для обнаружения хромофоров, ковалентно связанных с белками ⁴⁶ . Эти полосы были визуализированы через фильтр длинного пути 600 нм при возбуждении синим ( λ _макс = 470 нм) и зеленым ( λ _макс = 527 нм) светом через фильтр короткого пути 562 нм. с использованием машин WSE-6100 LuminoGraph (ATTO) и WSE-5500 VariRays (ATTO).После мониторинга гели окрашивали кумасси бриллиантовым синим R-250.

УФ-видимый спектроскопический анализ для мониторинга фотоциклов PpPHY и PpCRY

Ультрафиолетовые и видимые спектры поглощения белков регистрировали с помощью спектрофотометра UV-2600 (SHIMADZU) при комнатной температуре (к.т., примерно 20-25 ° C). Генератор оптического спектра (Hamamatsu Photonics, Inc.) использовался для получения монохроматического света с различными длинами волн для индуцирования фотопреобразования.

Определение хромофоров, включенных в PpPHY

Растворы образцов, содержащие нативный PpPHY в темном состоянии и в состоянии фотопродукта, разбавляли в пять раз в 8 M кислой мочевине (pH <2.0). Спектры поглощения записывали при комнатной температуре. до и после 3 мин освещения белым светом. Определение хромофоров проводилось путем сравнения спектров денатурированного PpPHY и стандартных белков ^47,48,49 .

Определение хромофора, включенного в PpCRY

Трихлоруксусную кислоту добавляли к раствору образца, содержащему нативный PpCRY, в темном состоянии до конечной концентрации 440 мМ. Раствор обрабатывали льдом в течение 1 ч при встряхивании со скоростью 200 об / мин.Осадок удаляли центрифугированием при 20000 × g в течение 5 мин, а затем 50 мкл супернатанта вводили в высокоэффективный жидкостный хроматограф (система Prominence HPLC, Shimadzu). Высвобожденный хромофор, включенный в супернатант, элюировали изократически (скорость потока, 1 мл мин ^-1 ) растворителем (MeOH / 20 мМ KH ₂ PO ₄ = 20/80) и разделяли с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ. колонка (InertSustainSwift C18, ВД 4,6 × 250 мм, 5 мкм; GL Sciences) при 35 ° C.Хромофор детектировали по его поглощению при 360 нм. Определение хромофоров производилось на основании их времени удерживания ( t _R ) по сравнению со стандартными соединениями; 5,10-метенилтетрагидрофолат хлорид (хлорид MTHF, Schircks Laboratories), флавинадениндинуклеотид (FAD, Tokyo Chemical Industry), флавинмононуклеотид (FMN, Tokyo Chemical Industry) и рибофлавин (RF, Tokyo Chemical Industry). Образцы и стандартные соединения обрабатывались в темноте.

Белковый блоттинг PpDUC1-GFP и PpDUC1-HA, экспрессированных в растениях

Общий белок экстрагировали из 80 мг целых растений A. thaliana и пластинок листьев N. benthamiana с использованием 240 мкл буфера для экстракции белка, составляющего 50 мМ Трис-HCl (pH 8,0), 150 мМ NaCl, 0,1% 2-меркаптоэтанол, 5% глицерин, 0,5% Triton X-100 и мини-коктейль ингибиторов протеазы cOmplete ^TM (Sigma). После измельчения в буфере для экстракции белка всю суспензию дважды центрифугировали при 12000 об / мин в течение 5 мин для удаления осадков.К десяти микролитрам супернатанта добавляли 5 мкл буфера для загрузки белка и денатурировали нагреванием. Денатурированные образцы загружали в 7,5% SDS-полиакриламидный гель для электрофореза. После электрофореза белки подвергали электроблоттингу на мембране из поливинилидендифторида (PVDF) (Millipore) в буфере для блоттинга, состоящем из 25 мМ Трис, 192 мМ глицина и 20% метанола. Затем мембрану инкубировали в течение 1,5 ч в 1% обезжиренного молока (Nakarai tesque), промывали в течение 10 мин дважды с 1 × TBST, содержащим 137 мМ NaCl, 2.68 мМ KCl, 25 мМ Трис-HCl, pH 7,4, 0,1 мас. / Об.% Твин-20. Для обнаружения PpDUC1-HA мембрану, заблокированную обезжиренным молоком, инкубировали с конъюгатом пероксидазы анти-HA (1201381900, разведение Roche 1: 1000) в течение 1,5 часов. Для обнаружения PpDUC1-GFP заблокированную мембрану инкубировали с кроличьими антителами против GFP (TP401, Torrey Pines Biolabs Inc., 1: 2000) в течение 20 часов. Мембрану промывали трижды с 10-минутными интервалами и инкубировали с протеином А, антителом, связанным с пероксидазой хрена (NA9120, GE Healthcare Corp., 1: 2000) на 30 мин. Обе мембраны промывали три раза по 10 мин каждая с 1 × TBST и после инкубации с реагентами с усиленной хемилюминесценцией (ECL SelectTM Western Blotting Detection Reagents, GE Healthcare Corp.) их обрабатывали с помощью хемилюминесцентного анализатора изображений (Chem Doc XRS plus, БИО-РАД).

Конструкции переходного преобразования в

N. benthamiana

Для инфильтрации в эпидермальные клетки листа N. benthamiana полноразмерные открытые рамки считывания PpDUC1 и части PpPHY (1–3621 п.н. в DUC1 ) и PpCRY (3115 –5070 п.н. в DUC1 ( без стоп-кодона) амплифицировали из P.Provasolii с помощью ПЦР с каждым набором праймеров (дополнительная таблица 2) и клонировали в вектор pDONR207 ENTRY путем рекомбинации BP с использованием фермента BP Clonase II (Invitrogen Corp.). Эти открытые рамки считывания трансформировали в вектор-адресат pEarleyGate 103 ⁵⁰ для слияния в рамке с GFP и 6 × His посредством реакции LR. Синтетический ген Arabidopsis thaliana HY5 ( At5g11260 ), слитый с mCherry (Sequence ID: MH976504.1), был синтезирован Eurofins Genomics.Фрагмент ДНК амплифицировали с помощью ПЦР с праймерами (дополнительная таблица 2), используя синтетический ген в качестве матрицы, и клонировали в плазмидный вектор pSK1 ⁵¹ .

Временная экспрессия и наблюдение PpDUC1-GFP в

листьях N. benthamiana

Каждую конструкцию трансформировали в Agrobacterium GV3101. Эти агробактерии инфильтрировали в эпидермальные клетки листьев N. benthamiana путем элюирования 10 мМ MES (pH 5,6) с 200 мкМ ацетосирингоном в нижнюю часть листьев N.benthamiana растений ⁵² . Микроскоп Zeiss LSM880 Airyscan Fast-mode (Zeiss) с объективами AxioObserver Z1 20X и W40X использовался для обнаружения флуоресценции GFP. Длина волны возбуждения составляла 488 нм, и для излучения GFP использовали полосовой фильтр от 493 до 556 нм. Длина волны возбуждения составляла 561 нм, и для излучения mCherry использовали полосовой фильтр от 578 до 640 нм.

Экстракция ДНК, секвенирование генома, сборка и аннотация

Клетки P. provasolii NIES-2893 культивировали в течение 4–6 дней в ~ 20 мл среды IMK (Nihon Pharmaceutical, Токио, Япония) под белым светодиодным светом (~ 50 мкмоль фотонов м ^-2 с ^-1 ) с циклом 14 ч: 10 ч свет: темнота.ДНК экстрагировали, как описано в Suzuki et al. ⁵³ Клетки собирали осторожным центрифугированием и измельчали ​​в предварительно охлажденной ступке с жидким азотом и 50 мг стеклянных шариков 0,1 мм (Bertin, Rockville, MD, USA). Клетки инкубировали с 600 мкл экстракционного буфера CTAB ⁵⁴ при 65 ° C в течение 1 часа. ДНК разделяли смешиванием с 500 мкл хлороформа и центрифугированием при 20 000 × g в течение 1 мин; его концентрировали стандартным осаждением EtOH. Библиотеку парных концов конструировали с использованием набора TruSeq DNA PCR-free Kit (lllumina Inc., Сан-Диего, Калифорния, США), согласно протоколу производителя. Библиотеку матовых пар конструировали с использованием набора Nextera Mate Pair Library Prep Kit (Illumina) в соответствии с протоколом производителя «без геля». Библиотеки парных концов и спаренных пар секвенировали с использованием системы MiSeq (Illumina) с набором реагентов MiSeq v3 (300 п.н. × 2) (Illumina). Для секвенирования нанопор библиотека была сконструирована с использованием набора для быстрого секвенирования (SQK-RAD003, Oxford Nanopore Technologies, Оксфорд, Великобритания). Секвенирование выполняли с использованием MinION с проточной кюветой SpotON (FLO-MIN106).

Мы секвенировали 40 351 502 считывания парных концов (9,7 Гбит / с), 10 652 248 сопряженных пар (1,7 Гбит / с) и 90 971 чтение нанопор (0,50 Гбит / с, N50 = 18,8 Кбит / с). Необработанные чтения были собраны в 47 каркасов (22,9 Мбит / с) с одним пробелом с использованием MaSuRCA 3.3.2 ⁵⁵ . Показания нанопор были скорректированы с использованием CONSENT v1.1.2 ⁵⁶ . Считывание парных концов было исправлено с помощью Trimmomatic версии 0.36 ⁵⁷ . Сборка была повторно обработана каркасом с помощью исправленных считываний нанопор с использованием Fast-SG ⁵⁸ с размером k-мер = 70.Пробелы заполнялись с помощью LR_Gapcloser v1.1 ⁵⁹ с исправленными показаниями нанопор. Наконец, мы сопоставили исправленные парные чтения с помощью BWA версии 0.7.17 ⁶⁰ и отполировали сборку с помощью Pilon 1.22 ⁶¹ . Полировку проводили дважды.

Мы удалили две последовательности полного хлоропластного и митохондриального геномов. Аннотации генома выполнялись с помощью конвейера funannotate v1.5.3 (https://github.com/nextgenusfs/funannotate). Для построения генных моделей мы использовали наши чтения РНК-seq (19 Gbp) при различных условиях освещения (описанных в разделе транскриптома) после коррекции чтения с помощью Trimmomatic ⁵⁷ .Функциональная аннотация была выполнена с использованием веб-сервера eggNOG ⁶² . Чтобы проверить экспрессию генных моделей, мы сопоставили считывания РНК-seq, используемые для построения генной модели, с кодирующими последовательностями (CDS), используя Minimap2 2.17 ⁶³ , и 99,5% и 98,4% предсказанных CDS были картированы с помощью по крайней мере, одно и пять считываний РНК-seq соответственно. Полноту предсказания гена оценивали с помощью BUSCO v2 / v31 через gVolante ⁶¹ .

Анализ транскриптома в монохроматическом свете

Клетки P.provasolii NIES-2893 выращивали при 19,5 ° C со встряхиванием при 120 об / мин при интенсивности света 13 мкмоль · м ^-2 с ^-1 при цикле свет / темнота LD12: 12. Чтобы контролировать экспрессию генов во время облучения монохроматическим светом, клетки синхронизировали с помощью 12-часовой обработки в темноте перед воздействием монохроматического постоянного света. Обработку светом проводили с использованием светодиодов (Nippon Medical & Chemical Instruments Co., Ltd., Япония) с определенной длиной волны при интенсивности 7 мкмоль м ^-2 с ^-1 .Были использованы следующие настройки: для синего света пик был при 447 нм; для оранжевого света – 596 нм, а для дальнего красного света – 697 нм. Ингибитор переноса электронов 3- (3,4-дихлорфенил) -1,1-диметилмочевина (DCMU) был добавлен к образцам перед обработкой в ​​темноте. Клетки обрабатывали 40 мкМ DCMU в 0,1% ДМСО или только 0,1% ДМСО (контроль). После световой обработки в течение 2 ч с добавлением или без добавления DCMU клетки собирали и замораживали жидким азотом. После разрушения клеток с использованием стеклянных шариков суммарную РНК экстрагировали из P.provasolii с использованием реактива TRIzol (Thermo Fisher Scientific Inc, США). Экстрагированную тотальную РНК очищали с помощью наборов RNeasy Plant Mini Kits (QIAGEN, Нидерланды). Библиотеки для анализа РНК-seq были синтезированы с использованием наборов для подготовки образцов многожильной мРНК Illumina® TruSeq® (Illumina Inc, США) и секвенированы на Illumina HiSeq 2000 с использованием технологии направленных парных концов. Секвенированные чтения были сопоставлены с геномом P. provasolii с помощью STAR v2.5.0c ⁶² после обрезки низкокачественных чтений (качество Phred ≤20) с помощью FASTX-Toolkit-0.0.14 (http://hannonlab.cshl.edu/fastx_toolkit/index.html). Счетчики чтения были нормализованы с помощью DESeq 1.42.0 в пакете R ⁶³ . Дифференциально экспрессируемые гены (ДЭГ) были определены как> 1,5-кратные для экспрессии генов со значением q <0,05.

Сводка отчетов

Дополнительная информация о дизайне исследований доступна в Сводке отчетов по исследованиям природы, связанной с этой статьей.

Профессиональный программатор с автоматической коробкой передач оранжевого цвета 5 для автомобилей, вдохновляющих на вождение

Alibaba.com позволяет легко получить доступ к широким категориям. оранжевый 5 программатор , который помогает в точном мониторинге и диагностике отдельных транспортных средств и механизмов. Эти наборы. Программатор orange 5 оснащен модернизированными технологиями и может помочь в максимальной заботе о машинах. Уникальная коллекция. Программатор orange 5 отличается прочностью конструкции и не требует частого обслуживания, что позволяет экономить деньги с течением времени.

Все. оранжевый 5 программатор имеющиеся на сайте спроектированы замысловато.Инструменты очень удобны, сделаны из прочных материалов, таких как железо и нержавеющая сталь, и могут охватывать несколько широко используемых систем. Эти. Программатор orange 5 профессиональный, но достаточно простой, чтобы его могли использовать и любители. Они также могут помочь в ремонте всех видов критически важных систем, таких как трансмиссии, двигатели, тормоза, безопасность, выбросы и так далее. Эти. оранжевый 5 программатор имеют электрическое питание и имеют гарантийный срок.

Алибаба.com имеет широкий выбор. оранжевый 5 программатор , которые доступны в различных моделях, размерах и функциях для конкретных моделей. Эти. Программатор оранжевый 5 оснащен яркими светодиодными дисплеями, которые обеспечивают четкую видимость.