Sps 3610: SPS-3610, Источник питания импульсный, 0-36V-10A,2хLED (Госреестр РФ), Good Will

Содержание

GW Instek SPS-3610 источник питания

Производитель	GW Instek
Модель	SPS-3610
Гарантия	12 месяцев
Госреестр	20189-07
Технические условия (ТУ)	ТУ изготовителя
Межповерочный интервал	1 год
Технические данные
Тип индикатора	Цифровой
Выходное напряжение	0…36 В
Выходной ток	0…10 А
Стабилизация напряжения
Нестабильность	≤ 5 мВ при изменении напряжения питания, ≤ 5 мВ при изменении тока нагрузки
Уровень пульсаций	≤ 5 мВ ср. кв.;100 мВ пик в диапазоне 20Гц…20МГц
Время установления	≤ 500 мкс (50%-изменение нагрузки, мин. ток 0,5 А)
Температурный коэффициент	10^-4 / °С
Стабилизация тока
Нестабильность	≤ 3 мА при изменении напряжения питания, ≤ 3 мА при изменении напряжения на нагрузке
Уровень пульсаций	≤ 5 мА ср. кв.
Цифровой индикатор
Формат индикации	4 разряда, СД индикаторы
Дискретность индикации	100 мВ 10 мА
Погрешность измерения	± (0,5 % +2 ед. мл. разряда )
Количество индикаторов	2 (вольтметр, амперметр)
Изоляция
Корпус – выход	≥ 20МОм (500В)
Корпус – сеть	≥ 30МОм (500В)
Общие данные
Напряжение питания	115 / 230 В (±15 %), 50 / 60 Гц
Глубина	285 мм
Ширина	128 мм
Высота	145 мм
Вес	3,2 кг
Комплект поставки	Источник питания GW Instek SPS-3610 Шнур питания Тестовый провод GTL-203A Инструкция по эксплуатации
Варианты написания в сети Internet	GW Instek-SPS-3610, GW Instek SPS 3610, GW Instek SPS3610, GW Instek SPS/3610

Блок питания SPS-3610 360Вт, 36V, 10А, GW Instek, код SPS-3610 GW Instek, цена 38 048,40 ₽

Описание товара

Блок питания SPS-3610 360Вт, 36V, 10А, GW Instek

Подробное описание

Здравствуйте!

Вы попали на доску объявлений. Сотрудники Promelectrica.ru разместили тут товары которые вам могут быть интересны.

Информация о наличии по телефону (499) 409-29-40

Источники питания импульсные 360 Вт серии SPS.
Один канал: макс. 60 В, 30 А, 360 Вт
Нестабильность 5 мВ/3 мА;
пульсации 5 мВ ср. кв., от 3 мА ср. кв.
Дискретность индикации от 10 мВ; 10 мА

Плавная установка напр. и тока ГРУБО/ТОЧНО
Режимы стабилизации напряжения и тока
Защита от перегрузки и переполюсовки
Установка уровня защиты от перенапряжения
Дистанционное отключение нагрузки
Цифровая индикация тока и напряжения, СДИ
Малогабаритный (128 х 145 х 285 мм; 3 кг)

Точную информацию о товарах, ценах и наличии вы можете получить по запросу через электронную почту. Выставленный счет-договор является единственным информационным обязательством, все другие сведения могут содержать неточности. Мы затрачиваем все возможные силы для улучшения сервиса и благодарны тысячам юридических и частных лиц, воспользовавшимся нашими услугами, и сотням постоянных клиентов, которые продолжают с нами работать.

Каталог:

Выключатели, концевики, джойстики
Бесконтактные датчики
Реле, контакторы, автоматы
Маячки, колонны, сирены
Приводная техника
Разъемы и кабели
Трансформаторы, источники питания
Энкодеры, муфты
Автоматизация и измерение
Тиристоры, диоды, предохранители

Видео «Как добраться»:

Товарное предложение обновлено Вчера в 16:37

GW Instek SPS – Импульсные источники питания постоянного тока

Характеристики	Параметры	Значения
Стабилизация напряжения	Нестабильность	< 5 мВ при изменении напряжения питания
		< 5 мВ при изменении тока нагрузки
	Уровень пульсаций	< 5 мВ ср. кв.; 100 мВ пик в диапазоне 20 Гц…20 МГц
	Время установления	< 500 мкс (50%-изменение нагрузки, мин. ток 0.5 А)
	Температурный коэффициент	<10^–4/°С
Стабилизация тока	Нестабильность	< 3 мА при изменении напряжения питания,
		< 3 мА при изменении напряжения на нагрузке
	Уровень пульсаций мА ср. кв.	≤ 3 мА ср. кв. (SPS-606), ≤ 5 мА ср. кв. (SPS-3610), ≤ 10 мА ср. кв. (SPS-1820) ≤ 30 мА ср. кв. (SPS-1230)
Цифровой индикатор	Формат индикации	4 разряда, СД индикаторы
	Дискретность индикации	10 мВ (SPS-1230 / 1820), 100 мВ (SPS-3610 / 606) 10 мА (SPS-3610 / 606), 100 мА (SPS-1230 / 1820)
	Погрешность измерения	± (0. 5 % +2 ед. мл. разряда )
	Количество индикаторов	2 (вольтметр, амперметр)
Изоляция	Корпус – выход	> 20 МОм (500 В)
	Корпус – сеть	> 30 МОм (500 В)
Общие данные	Напряжение питания	115 / 230 В (± 15 %), 50 / 60 Гц
	Габаритные размеры	128 × 145 × 285 мм
	Масса	3,2 кг

АТФ-зависимая регуляция разборки цитоплазматических микротрубочек на JSTOR

Абстрактный

Непрямое иммунофлуоресцентное окрашивание антителом к тубулину использовали для изучения роли АТФ в регуляции разборки цитоплазматических микротрубочек. Истощение клеточного пула АТФ в культивируемых фибробластах мыши различными ингибиторами энергетического метаболизма приводит к ингибированию разборки микротрубочек, вызванной колцемидом или винбластином.

Глюкоза, добавленная в инкубационную среду, содержащую ингибитор, частично восстанавливает клеточное содержание АТФ и устраняет ингибирование разборки микротрубочек.Метаболические ингибиторы не изменяли поглощение [3H] колцемида клетками; следовательно, их действие на разборку микротрубочек не было вызвано уменьшением внутриклеточного колцемида. Добавление АТФ к препаратам цитоскелета, полученным обработкой клеток Тритоном Х-100, заметно стимулирует деполимеризацию микротрубочек. Этот эффект был специфическим для АТФ; он не наблюдался в присутствии GTP, UTP, CTP, ADP, AMP, аденозин-5 ‘- (β, γ-метилен) трифосфата (негидролизуемый аналог АТФ) или неорганического пирофосфата или триполифосфата.Следовательно, истощение клеточного пула АТФ снижает скорость разборки микротрубочек, тогда как добавление АТФ увеличивает ее. Эти результаты предполагают, что определенная АТФ-зависимая реакция [наиболее вероятно, фосфорилирование некоторых белков микротрубочек] контролирует разборку микротрубочек в клетках.

Информация о журнале

PNAS – это самый цитируемый в мире междисциплинарный научный сериал. Он публикует высокоэффективные исследовательские отчеты, комментарии, мнения, обзоры и т. Д. доклады коллоквиума и акции Академии.В соответствии с руководящими принципы, установленные Джорджем Эллери Хейлом в 1914 году, PNAS издает краткие первые объявления членов Академии и иностранных партнеров подробнее важный вклад в исследования и работу, которая, по мнению Участника, иметь особое значение.

Информация об издателе

Национальная академия наук (НАН) – это частная некоммерческая организация ведущих исследователей страны. НАН признает и продвигает выдающуюся науку путем избрания в члены; публикация в своем журнале PNAS; и его награды, программы и специальные мероприятия.Через Национальные академии наук, инженерии и медицины NAS предоставляет объективные, научно обоснованные советы по важнейшим вопросам, затрагивающим нацию.

% PDF-1.7 % % ABCpdf 11202 248 0 объект > эндобдж xref 248 23 0000000032 00000 н. 0000001413 00000 н. 0000001618 00000 н. 0000001668 00000 н. 0000002062 00000 н. 0000002483 00000 н. 0000002666 00000 н. 0000002912 00000 н. 0000002975 00000 н. 0000003038 00000 н. 0000003226 00000 н. 0000003477 00000 н. 0000003669 00000 н. 0000003925 00000 н. 0000004142 00000 п. 0000004379 00000 н. 0000004861 00000 н. 0000005163 00000 п. 0000005191 00000 п. 0000005381 00000 п. 0000006524 00000 н. 0000006714 00000 н. 0000023120 00000 п. трейлер ] / Инфо 235 0 R / Назад 5032566 / Корень 249 0 R / Размер 271 / Источник (WeJXFxNO4fJduyUMetTcP9 + oaONfINN4 + d729MG / WkgY8muOYTvLZZMxD3R2hQdPB9khgm8VtCFmyd8gIrwOjQRAIjPsWhM4vgMCV \ 8KvVF / K8lfbyssEWYXoblGrRjoncqBRSOxB5TQRGEg =) / Вт [1 4 2] >

> startxref 0 %% EOF 249 0 объект > / Метаданные 233 0 R / Контуры 234 0 R / Страницы 240 0 R / StructTreeRoot 237 0 R / Тип / Каталог / ViewerPreferences 250 0 руб.

>> эндобдж 250 0 объект > эндобдж 251 0 объект > ручей x͒ + Q ~ ̈fFcA! | R% llfifFnV $ Ŏ5, Dcg) ׼ s sNp 4Kw Z? ca ~ p} 5 o9 ߘ5 b “] / tX> c.ih (= 3’oQ \ qȵX7bWMhJ ~ VЦw \\ s_ I`ZZ конечный поток эндобдж 252 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родитель 232 0 R / Ресурсы> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF /Текст / ImageB / ImageC / ImageI] / XObject> >> / StructParents 0 / Вкладки / S / Тип / Страница >> эндобдж 253 0 объект > эндобдж 254 0 объект > эндобдж 255 0 объект > эндобдж 256 0 объект > эндобдж 257 0 объект > эндобдж 258 0 объект > эндобдж 259 0 объект > эндобдж 260 0 объект > эндобдж 261 0 объект > / Содержание (ItemAttachment25743) / Dest [18 0 R / XYZ 0 792 0] / F 4 / Rect [177.75 429,42 280,31 444,21] / StructParent 1 / Подтип / Ссылка / Тип / Аннотация >> эндобдж 262 0 объект > / Содержание (ItemAttachment26372) / Dest [34 0 R / XYZ 0 787,2 0] / F 4 / Rect [177,75 241,63 392,99 256,43] / StructParent 2 / Подтип / Ссылка / Тип / Аннотация >> эндобдж 263 0 объект [278 0 0 556 0 0 667 0 333 333 0 0 278 333 278 278 556 556 556 556 556 556 556 556 556 556 278 278 0 0 0 0 0 667 667 722 722 667 611 778 722 278 500 667 556 833 722 778 667 778 722 667 611 722 0 944 0 0 611 0 0 0 0 0 0 556 556 500 556 556 278 556 556 222 0500 222 833 556 556 556 556 333 500 278 556 500 722 500 500 500 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 834 834] эндобдж 264 0 объект [278 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 278 0 278 0 556 556 556 556 556 556 0 0 556 0 333 333 0 0 0 0 975 722 722 722 722 667 611 0 0 278 556 0 611 833 722 778 667 0 722 667 611 722 0 944 0 667 611 0 0 0 0 0 0 556 0 556 611 556 0 611 611 278 0 0 0 889 611 611 0 0 389 556 333 611 0 778 0 556] эндобдж 265 0 объект [556] эндобдж 266 0 объект > эндобдж 267 0 объект > эндобдж 268 0 объект > ручей Икс @@ F; | K6d1P Լ

% PDF-1. 4 % 1 0 объект > эндобдж 2 0 obj > эндобдж 4 0 obj > ручей DOI: 10.2337 / db16-066810.2337 / db16-0668 http://dx.doi.org/10.2337/db16-06682016-11-30false10.2337/db16-0668

Diabetesjournals.org

10.2337 / db16-06682016-11-30false

Diabetesjournals.org

конечный поток эндобдж 3 0 obj > эндобдж 5 0 obj > эндобдж 6 0 obj > эндобдж 7 0 объект > эндобдж 8 0 объект > эндобдж 9 0 объект > эндобдж 10 0 obj > эндобдж 11 0 объект > эндобдж 12 0 объект > эндобдж 13 0 объект > эндобдж 14 0 объект > эндобдж 15 0 объект > эндобдж 16 0 объект > эндобдж 17 0 объект > эндобдж 18 0 объект > эндобдж 29 0 объект > эндобдж 30 0 объект > эндобдж 31 0 объект > эндобдж 32 0 объект > эндобдж 33 0 объект > эндобдж 34 0 объект > эндобдж 20 0 объект > эндобдж 19 0 объект > ручей 8; Yi_5utoH% # 2; ‘pL0tdR $ Gjd @ TL’ \ 3VVJnFp &! N8I.R? Ph҉0Gw &! | _ “0d \ t41 \: e = CKndtrwepIO \” UC Эм 5ODRQ # AA) Ts 0uuvI & wBzЀ (ܟ6 Ւ n4 * vR2: M ڰ 3 o]% 7v

Резюме главы

Концепция 36. 1 Циклы белок-белкового взаимодействия вызывают сокращение мышц

Скелетная мышца состоит из пучков мышечных волокон. Каждое волокно скелетных мышц представляет собой большую клетку, содержащую несколько ядер.
Скелетные мышцы содержат многочисленные миофибриллы, которые представляют собой пучки актиновых и миозиновых нитей. Регулярное, перекрывающееся расположение актиновых и миозиновых нитей в саркомеры придает скелетным мышцам поперечно-полосатый вид.См. Рисунки 36.1 и 36.2 и ВЕБ-АКТИВНОСТЬ 36.1
Молекулярный механизм мышечного сокращения включает связывание глобулярных головок молекул миозина с актином. При связывании головка миозина меняет свою конформацию, заставляя две филаменты проходить друг мимо друга (скользящий сократительный механизм филаментов). Освобождение головок миозина от актина и их возвращение к исходной конформации требует АТФ. Обзор анимационного учебника 36.1
Все волокна, активируемые одним двигательным нейроном, составляют двигательную единицу. Каждое нервное окончание двигательного нейрона образует синапс с мембраной мышечной клетки. Когда нейромедиатор высвобождается в синапсе, мембрана мышечной клетки деполяризуется и генерируются потенциалы действия. Потенциалы действия распространяются через плазматическую мембрану и Т-канальцы, вызывая высвобождение Ca ²⁺ из саркоплазматического ретикулума. Просмотрите Рисунок 36.5 и ВЕБ-АКТИВНОСТЬ 36.2
Ca ²⁺ связывается с тропонином и изменяет его конформацию, отталкивая цепи тропомиозина от сайтов связывания миозина на актиновой нити.Мышечное волокно продолжает сокращаться до тех пор, пока Ca ²⁺ не вернется в саркоплазматический ретикулум. Рисунок 36.6
Клетки сердечной мышцы имеют поперечно-полосатую, одноядерную структуру, ветвятся и электрически связаны щелевыми соединениями, так что потенциалы действия быстро распространяются по листам сердечной мышцы и вызывают скоординированные сокращения. Некоторые клетки сердечной мышцы являются клетками-стимуляторами, которые генерируют и проводят электрические сигналы.
Гладкая мышца обеспечивает сократительную силу внутренних органов.Клетки гладких мышц реагируют на растяжение, потенциалы действия, распространяющиеся от соседних клеток, гормоны или нейротрансмиттеры от вегетативной нервной системы. Просмотрите рисунок 36.7 и анимированный учебник 36.2

Концепция 36.2 Характеристики мышечных клеток определяют работу мышц

В скелетных мышцах единичный потенциал действия вызывает минимальную единицу сокращения, называемую подергиванием. Подергивания, происходящие в быстрой последовательности, можно суммировать, тем самым увеличивая силу сокращения.Максимальное длительное напряжение называется столбняком. Рисунок 36.9
Медленно сокращающиеся волокна облегчают расширенную аэробную работу; быстро сокращающиеся волокна создают максимальную силу в течение коротких периодов времени. Рисунок 36.10
Работоспособность мышц зависит от поступления АТФ. Доступные АТФ и креатинфосфат (КП) могут мгновенно подпитывать максимальное напряжение, но истощаются за секунды. Гликолиз может быстро регенерировать АТФ, но ограничен накоплением молочной кислоты.Окислительный метаболизм доставляет АТФ медленнее, но может продолжать это делать в течение длительного времени. Рисунок 36.11

Concept 36.3 Мышцы тянут скелетные элементы для создания силы и движения

Скелетные системы обеспечивают опору, за которую мышцы могут тянуть.
Гидростатические скелеты – это заполненные жидкостью полости тела, которые могут сжиматься мышцами. Рисунок 36.12
Экзоскелеты – это закаленные внешние поверхности, к которым прикреплены внутренние мышцы.
Эндоскелеты – это внутренние системы жестких стержневидных, пластинчатых и трубчатых опор, состоящие из кости и хряща, к которым прикреплены мышцы. Рисунок 36.13
Кость постоянно реконструируется остеобластами, которые откладывают новую кость, и остеокластами, разрушающими кость. Рисунок 36.14
Кости развиваются из соединительнотканных мембран (перепончатая кость) или из хряща (хрящевые кости) путем окостенения. Хрящевая кость может расти до слияния центров окостенения.Рисунок 36.15
Кость может быть компактной (твердой и твердой) или губчатой (с множеством внутренних пространств).
Суставы позволяют мышцам силовые движения в разных направлениях. Мышцы и кости работают вместе вокруг суставов как системы рычагов. См. Рисунки 36.16 и 36.18 и ВЕБ-АКТИВНОСТЬ 36.3
Сухожилия соединяют мышцу с костью; связки соединяют кости друг с другом. Рисунок 36.17

Мутация в АТФ-связывающем кармане киназного домена ABL в STI571-устойчивой BCR / ABL-положительной клеточной линии

Abstract

Основным механизмом действия STI571 является конкурентное вмешательство в сайт связывания АТФ тирозинкиназы Bcr / Abl.В BCR / ABL -положительной клеточной линии KBM5 мы изучили клеточные события, связанные с приобретением in vitro устойчивости к STI571. Возникновение фенотипа устойчивости к STI571 сопровождалось лишь незначительным увеличением количества копий гена BCR / ABL и уровня его экспрессии. Однако активность киназы Bcr / Abl (уровень аутофосфорилирования) в резистентных клетках не полностью подавлялась STI571, и приобретение высокой степени устойчивости было связано с одноточечной мутацией, приводящей к замене треонинового белка. к-изолейцин в положении 315 Abl.В устойчивых клетках KBM5-STI571 ^R1.0 мутировали 20% транскриптов BCR / ABL и 10% копий гена BCR / ABL на уровне ДНК. Мутация присутствовала во всех 10 устойчивых к STI571 клонах, полученных в результате клоногенного анализа низкой плотности, подтверждая ее присутствие во всех колониеобразующих клетках, но только во фракции копий гена BCR / ABL в каждой клетке. Вклад этой мутации в устойчивый к STI571 фенотип остается неизвестным. Предварительные данные, показывающие частичную обратимость устойчивости в этих клетках, предполагают, что устойчивость может быть многофакторной.Других мутаций в киназном домене гена BCR / ABL выявлено не было.

Введение

Отсутствие ответа на STI571 или рецидив заболевания после временного ответа у пациентов с различными поздними стадиями BCR / ABL -положительный ХМЛ 4 указывает на устойчивый к STI571 фенотип, который развивается либо путем отбора уже существующих устойчивых клонов, либо путем индукции устойчивости de novo . Исследования in vitro на STI571-устойчивых BCR / ABL -положительных клеточных линиях продемонстрировали связь между устойчивостью к STI571 и количественными изменениями в экспрессии белка Bcr / Abl (1, 2, 3) .На сегодняшний день не было выявлено качественных изменений, таких как перестройка гена BCR / ABL или мутации в киназном домене в линиях клеток с резистентностью, индуцированной STI571 in vitro (1, 2, 3) . Однако недавно точечные мутации в последовательностях ДНК, кодирующих АТФ-связывающий карман гена BCR / ABL , были идентифицированы в клетках некоторых пациентов с ХМЛ, у которых было резистентное к STI571 заболевание или у которых был рецидив во время лечения. (4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) .Точечная мутация, приводящая к замене треонина на изолейцин в положении аминокислоты 315 (T315I), была подробно описана. (4) . Эта мутация при инженерии в p210 Bcr / Abl дикого типа и временной трансфекции в клетки 293T или клетки Ba / F3 препятствовала ингибированию активности киназы Bcr / Abl в клетках, подвергшихся воздействию STI571. (4 , 7) . Однако степень, в которой эта мутация способствует устойчивости к STI571 in vivo , остается неизвестной. Модель in vitro , которая позволяет изучить роль этой мутации в человеческих клетках, недоступна, и ни об этой, ни о каких-либо других мутациях не сообщалось ни в одной из линий BCR / ABL -положительных клеток.

В этом исследовании мы описываем возникновение мутации T315I в пропорции копий гена BCR / ABL в клетках линии клеток, ставших устойчивыми к STI571 в результате воздействия in vitro на препарат. Клетки, устойчивые к STI571, представляют собой модель для дополнительного исследования роли этой мутации в развитии фенотипа ХМЛ, устойчивого к STI571. Эти клетки также могут быть полезны при разработке методов преодоления устойчивости к STI571 в экспериментальных системах.

Материалы и методы

Клеточные линии и лечение STI571.

клеток KBM5 были получены от пациента с миелоидной бластной фазой ХМЛ; клетки содержат несколько копий филадельфийской хромосомы (11) при отсутствии нормального гена ABL (12) . Чтобы выбрать устойчивый фенотип, клетки KBM5 подвергали воздействию увеличивающихся концентраций STI571 (Novartis, Базель, Швейцария), начиная с 0,05 мкм и увеличиваясь на 0.1 мкм, когда клетки возобновили почти нормальную кинетику роста. Родительские клетки поддерживались одновременно без препарата. Через 4 месяца обработанные клетки, обозначенные KBM5-STI571 ^R1.0, были способны расти в присутствии 1,0 мкМ STI571 и поддерживались в этой концентрации. Описанные исследования были выполнены после того, как клетки выросли в присутствии этого препарата в течение 6-8 месяцев. В этот период изменений чувствительности родительских клеток к STI571 не наблюдалось.

Выделение клонов и клонально полученных клеточных линий путем клонирования в метилцеллюлозе.

Для получения клональных сублиний, происходящих из отдельных клеток, лейкемические клетки культивировали при низкой плотности клеток с использованием полутвердой среды в анализе колоний КОЕ. Устойчивые клетки KBM5-STI571 ^R1.0 высевали с низкой плотностью (0,5 × 10 ³ клеток / мл) в метилцеллюлозную среду Iscove (Methocult h5230; Stem Cell Technologies, Ванкувер, Канада), содержащую STI571 в концентрации 1 мкМ.После 8 дней культивирования хорошо разделенные отдельные колонии удаляли в стерильных условиях и либо анализировали напрямую, либо переносили в жидкие культуры и размножали. Пять клонов, полученных из отдельных клеток, размноженных в присутствии, и пять размноженных в отсутствие 1,0 мкм STI571 были использованы для дополнительных исследований клеточных изменений, связанных с устойчивым фенотипом, включая присутствие мутаций BCR / ABL .

Устойчивость сопротивления.

Клеточная линия, резистентная к KBM5-STI571 ^R1.0, и две линии клеток, полученных из клонов, выращивали в течение 25 пассажей либо в присутствии STI571 (1 мкм), либо в отсутствие лекарственного средства. Затем степень устойчивости оценивали с помощью МТТ-анализа.

Анализ пролиферации клеток и измерение устойчивости к STI571.

Клеточную пролиферацию измеряли с использованием колориметрического метода восстановления МТТ (Sigma Chemical, Сент-Луис, Миссури).Экспоненциально растущие клетки промывали, высевали в трех экземплярах на 96-луночные планшеты с плотностью клеток 4 × 10 ⁴/100 мкл и добавляли STI571 в различных концентрациях. После 72 часов воздействия уровень, при котором пролиферация ингибировался, измеряли как процент от контрольного роста (без лекарственного средства в образце). Строили кривые выживаемости и определяли концентрацию лекарственного средства, дающую IC ₅₀. Индекс устойчивости (RI) рассчитывали путем деления IC ₅₀ для резистентных клеток на IC ₅₀ для родительских, чувствительных к STI571 клеток.

Вестерн-блот-анализ.

Клетки инкубировали в присутствии или в отсутствие различных концентраций STI571. Через 2 ч клетки дважды промывали холодным PBS, содержащим ингибиторы протеаз [смесь ингибиторов протеаз (Complete, Mini Roche Molecular Biochemical, Indianapolis, IN), 10 мкг / мл лейпептина, 10 мкг / мл апротинина] и ингибиторов фосфатазы (AEBSF 1 мм, фторид натрия 10 мМ, ортованадат 1 мМ) и 1 × 10 ⁷ клеток лизировали в 1 мл буфера для лизиса [0.125 м Трис-HCL (pH 6,8), 1% SDS, 0,01% бромфенолового синего, 5% глицерина, 2% 2-меркаптоэтанола, ингибиторы протеаз и фосфатаз]. Лизаты клеток, соответствующие 5 × 10 ⁵, кипятили в течение 10 минут, разделяли на 7,5% гелях SDS-PAGE и переносили на мембраны из поливинилидендифторида (Millipore Corp., Бедфорд, Массачусетс). Эта процедура оказалась оптимальной для обнаружения Bcr / Abl и минимизировала его деградацию, которая, хотя и отсутствовала в контрольной линии клеток K562, постоянно наблюдалась в родительских и устойчивых клетках KBM5.Анти-c-Abl (ФарМинген, Сан-Диего, Калифорния) и антифосфотирозин (моноклональный 4G10; Upstate Biotechnology, Лейк-Плэсид, Нью-Йорк) использовали для вестерн-блот-анализов. После инкубации в течение ночи при 4 ° C с первичным антителом мембраны промывали и инкубировали с антителами, конъюгированными с пероксидазой хрена, вторичными антителами (антимышиными, Bio-Rad) при комнатной температуре в течение 1 часа. Мембраны промывали, и связанные антитела детектировали с помощью усиленного люминола и окисляющего реагента с помощью хемилюминесценции, как указано производителем (Amersham, Arlington Heights, IL).После очистки мембран в буфере для очистки [0,5 мМ Трис-HCl (pH 6,7), 2% SDS, 100 мМ 2-меркаптоэтанол] в течение 30 мин при 56 ° C, они были повторно зондированы антителами против β-актина (Sigma Chemical) для оценки сопоставимости белковой нагрузки. Интенсивность полос Bcr / Abl оценивали с помощью программного обеспечения BioMax 1D и сравнивали с интенсивностью соответствующих полос β-актина на тех же мембранах.

Флуоресценция

in situ Анализ гибридизации.

Интерфазные ядра родительских и устойчивых к STI571 клеток гибридизовали с флуоресцентно меченными зондами ABL и BCR (Vysis, Downers Grove, IL) в соответствии с рекомендациями производителя. Было проанализировано двести интерфазных ядер и подсчитано количество сигналов слияния на клетку.

Последовательность, кодирующая Abl-киназный домен.

Два мкг общей РНК были преобразованы в кДНК с использованием обратной транскриптазы SuperScriptII (Life Technologies, Inc., Карлсбад, Калифорния) и олиго (dT) праймеры. ПЦР с полузатемнением для слитого транскрипта BCR / ABL проводили с использованием смеси полимеразы TaqGold (Perkin-Elmer, Foster, CA) с полимеразой Pfu (Stratagene, La Jolla, CA) и следующих праймеров и условий: прямой праймер B2A (5′-ttcagaagcttctccctgacat-3 ‘, экзон 13 гена BCR ) и обратный праймер NTPE- (5′-CTTCGTCTGAGATACTGGATTCCT-3′, экзон 9 гена ABL ) для первого раунда ПЦР [40 циклов , температура отжига (T _ann) = 65 ° C]; и прямой праймер NTPB ₊ (5′-aagcgcaacaagccactgtctat-3 ‘, экзон 4 гена ABL ) и NTPE- в качестве обратного праймера для второго раунда ПЦР (28 циклов, T _ann = 63 ° C) . В первом раунде ПЦР был получен продукт размером 1615 п.о., который был разбавлен 1:10, а затем 1 мкл был подвергнут второму раунду амплификации. Был получен продукт длиной 862 п.н., который включал кодирующую последовательность для всего АТФ-связывающего кармана и петли активации киназного домена Bcr / Abl.

Продукты ПЦР длиной 862 п.н. как родительских, так и устойчивых клеток KBM5 использовали для прямого секвенирования. Кроме того, амплифицированные фрагменты субклонировали в вектор pZErO-2 (Invitrogen, Carlsbad, CA).Затем 20 клонов исходной плазмиды KBM5 и 35 клонов плазмиды KBM5STI ^R1.0 подвергали скринингу с помощью ПЦР и эндонуклеазного расщепления продукта ПЦР. Была амплифицирована область киназного домена Abl длиной 177 пар оснований ( ABL-F1, , 5′-gtggccgtgaagaccttgaag-3 ‘, экзон 4; ABL-R1 , 5′-GTAGTCCAGGAGGTTCCCGT-3′, экзон 7; 32 цикла, T _ann 62 ° C) и расщепляли эндонуклеазой рестрикции Dde I (New England Biolabs, Beverly, MA). Наличие мутации C-T отменяет сайт узнавания этого фермента.Наконец, отобранные сегменты плазмидной ДНК секвенировали в прямом и обратном направлениях с использованием автоматического секвенатора ABI Prism 377. Для проверки мутации в клонально полученных сублиниях KBM5-STI ^R1.0 10 сублиний оценивали прямым анализом продукта ОТ-ПЦР длиной 177 п.н. после расщепления эндонуклеазой Dde I.

Аналогичные стратегии были использованы для анализа гДНК, выделенной из 10 клонально-устойчивых сублиний с использованием ДНКзола (Центр молекулярных исследований, Цинциннати, Огайо).Общую гДНК (600 нг) подвергали ПЦР-анализу с использованием праймеров и условий, как описано ранее. (4) . Фрагмент гДНК длиной 344 п.н., включая весь экзон 3 ABL, был амплифицирован (праймеры ABL-F2, 5′-GCAGAGTCAGAATCCTTCAG-3 ‘и ABL -R2 5′-TTTGTAAAAGGCTGCCCGGC-3′) и секвенирован в прямом и обратные направления. Кроме того, продукт ПЦР гДНК размером 169 п.н. (праймеры ABL F2 и ABL R1), полученный из гДНК двух устойчивых клональных сублиний, полученных из KBM5-STI571 ^{R1. 0}, был субклонирован в pZErO-2.Тридцать плазмидных клонов каждый подвергали скринингу на наличие мутации C-T ( ABL нуклеотид 944) с помощью ПЦР-амплификации с последующим расщеплением Dde I.

Фрагмент ДНК, содержащий мутацию T315I, полученный от пациента с ХМЛ в бластной фазе в лаборатории доктора Сойера (и полученный от доктора Арлингхауса), амплифицировали и использовали в качестве положительного контроля на протяжении всех исследований.

Результаты

Создание и характеристика устойчивой к STI571 клеточной линии.

После 4 месяцев воздействия на клетки KBM5 возрастающих концентраций STI571 клетки были способны расти в присутствии препарата в концентрации 1 мкМ (KBM5-STI571 ^R1.0). Не было явных различий в кинетике роста родительских клеток, растущих в отсутствие, и устойчивых клеток, растущих в присутствии 1 мкМ STI571.

IC ₅₀ родительских и устойчивых клеточных линий составлял 0,55 и 15,5 мкм соответственно, как определено анализом МТТ. Расчетный RI составил 28,2. IC ₅₀ из 10 отдельных клональных подлиний, полученных из КОЕ, проанализированных с помощью той же методологии, варьировала от 7,0 до 30,3 мкм, а соответствующие RI варьировались от 12,7 до 30,3.

Рост устойчивой линии клеток KBM5-STI571 ^R1.0 и двух устойчивых клональных производных был сравним в присутствии и отсутствии 1 мкМ STI571. Удаление препарата из питательной среды на 25 пассажей привело к частичной отмене устойчивости во всех исследованных линиях (рис.1) ⇓ .

Рис.1.

Степень и стабильность устойчивости к STI571. Выращивали клетки KBM5-STI571 ^R1.0 (•, ○) и два клональных производных, KBM5-STI571 ^{R1.0 C1} (▪, □) и KBM5-STI571 ^{R1.0 C6} (♦, ⋄). при наличии ( закрытых символов ) или отсутствии ( открытых символов ) 1,0 мкм STI571 на 25 пассажей. Уровень устойчивости оценивали с помощью МТТ-теста. Чувствительность родительских клеток KBM5 () показана для сравнения. Мутационный статус клональных клеточных линий C1 и C6 на момент удаления из среды, содержащей STI571, показан на рис.3 ⇓ на уровне кДНК ( D ) и на уровне гДНК ( E ).

Флуоресцентный анализ гибридизации in situ клеток KBM5 и KBM5-STI571 ^R1.0 зафиксировал лишь незначительное увеличение количества сигналов слияния BCR / ABL . Доля родительских клеток, содержащих 2, 3 и 4–8 сигналов слияния, составляла 5, 20 и 75%; соответствующие числа в ячейках KBM5-STI571 ^R1.0 составляли 3, 11 и 86%.

Экспрессия и фосфорилирование белка p210

^{Bcr / Abl}.

Приобретение устойчивости к STI571 характеризовалось небольшой сверхэкспрессией Bcr / Abl по оценке иммуноблоттинга (рис. 2). ⇓ . С помощью денситометрии и коррекции экспрессии β-актина было обнаружено, что экспрессия Bcr / Abl в KBM5-STI571 ^R1.0 увеличилась в 3,8 раза (рис. 2). ⇓ .

Рис.

2. Экспрессия и фосфорилирование

Bcr / Abl в клеточных линиях KBM5 и KBM5-STI571 ^R1.0. Вестерн-блоты зондировали антителами против фосфотирозина ( P-tyr ), анти-abl ( abl ) и β-актина .Верхняя панель показывает уровень фосфорилирования Bcr / Abl в исходной клеточной линии KBM5 P и ее устойчивом к STI571 производном, а также ингибирование фосфорилирования Bcr / Abl с помощью STI571. Клетки KBM5 и KBM5-STI571 ^R1.0 инкубировали с дифференцированными концентрациями STI571 в течение 2 часов, и степень фосфорилирования p210 визуализировали с помощью антифосфотирозиновых антител на иммуноблотах. На средней панели показан уровень экспрессии Bcr / Abl (210 кДа) после зондирования очищенных мембран анти-Abl антителами.Обратите внимание на отсутствие экспрессии Abl (, полоса 145 кДа ) в линиях клеток как KBM5 P, так и KBM5-STI571 ^R1.0. Линия лейкозных клеток K562, экспрессирующая как Bcr / Abl, так и Abl, показана в качестве контроля ( дорожка 1 ). Экспрессию β-актина использовали для контроля нагрузки и количественного определения уровней Bcr / Abl.

Ингибирование фосфорилирования p210

^{Bcr / Abl} с помощью STI571.

Экспоненциально растущие чувствительные и устойчивые клетки промывали и инкубировали в течение 2 ч в концентрациях STI571 1, 5 и 10 мкМ.Вестерн-блоттинг с антифосфотирозиновым антителом продемонстрировал дозозависимое ингибирование фосфорилирования Bcr / Abl как в чувствительных, так и в устойчивых клетках. Хотя аутофосфорилирование в клетках KBM5 было полностью отменено 1,0 мкМ STI571, концентрации до 10,0 мкМ ингибировали фосфорилирование киназы в клетках KBM5-STI571 ^R1.0 лишь частично (рис. 2). ⇓ .

Мутационный анализ.

Чтобы оценить возможность того, что мутация BCR / ABL придает устойчивость к STI571, мы провели молекулярный анализ KBM5-STI ^R1.0 клеток, растущих в присутствии 1,0 мкМ STI571. Кроме того, мы расширили такой анализ на клональные сублинии, полученные из отдельных клеток (КОЕ), используя как кДНК, так и гДНК.

Анализ кДНК с прямым секвенированием продуктов ПЦР длиной 862 п.н., полученных как из родительских, так и из устойчивых клеточных линий KBM5, позволил предположить наличие точечной мутации CT в нуклеотиде 944 ABL , приводящей к замене T315I Abl либо в части клеток KBM5-STI ^R1.0 или в некоторых множественных копиях гена BCR / ABL (рис.3 В ) ⇓ . Та же самая мутация была предложена рестрикционным анализом Dde I продукта ПЦР длиной 177 п.н .; мутация отменяет сайт узнавания этого фермента (рис. 3 A ) ⇓ . Никаких изменений в последовательности кДНК в родительских клетках не выявлено. Эти результаты послужили толчком для дополнительных исследований, которые включали субклонирование продукта ПЦР длиной 862 п.н., рестрикционные переваривания и секвенирование выбранных клонов плазмид. Рестрикционный анализ полученных с помощью ПЦР плазмидных клонов показал, что 0 из 20 родительских клеток KBM5 и 7 из 35 (20%) KBM5-STI ^R1.0 клонов кДНК оказались положительными по мутации (фиг. 3 C ) ⇓ . Наличие мутации было также подтверждено секвенированием плазмидной ДНК.

Рис.3.

Обнаружение точечной мутации. A , неполное расщепление продукта ПЦР длиной 177 пар оснований. Последовательность ABL дикого типа (C / TGAG) расщепляется рестриктазой Dde I, и два фрагмента длиной 143 п.н. и 34 п.н. могут быть визуализированы на 3% агарозном геле (фрагмент длиной 34 п.н. из показанной области геля).Мутация уничтожает сайт узнавания (T / TGAG), оставляя продукт длиной 177 п.н. неразрезанным. Дорожки 1 , 5 и 6 , отрицательные контроли; Lane 2 , положительный контроль мутации; пер. 3 , КБМ5; пер. 4 , КБМ5-СТИ ^Р1.0. B , прямое секвенирование полученного из KBM5-STI571 ^{R1. 0} амплифицированного фрагмента кДНК, содержащего АТФ-связывающий карман киназы Abl. Минорный пик ( стрелка ), представляющий замену C-T, сначала предполагал присутствие мутации T315I вместе с продуктом дикого типа. C , Dde I рестрикционный анализ плазмид, содержащих продукт ПЦР, полученный из кДНК (подробности см. В разделе «Материалы и методы»). Lane 1 , отрицательный контроль; Lane 2 , положительный контроль мутации; Дорожки 5 и 9 представляют собой непереваренные (мутировавшие) транскрипты и линии 3, 4, 6, 7, 8 и 10–12 дикого типа, полученные из устойчивой к KBM5-STI ^R1.0 клеточной линии. D , неполное расщепление продукта ПЦР, амплифицированного с кДНК 4 из 10 клонов, полученных из 10 КОЕ. Lane 1 , отрицательный контроль; Lane 2 , положительный контроль мутации; Дорожки 3–7 , клоны 1, 4, 6 и 10. E , неполное расщепление продукта ПЦР, амплифицированного из геномной ДНК тех же клонов, что и в D . Lane 1 , отрицательный контроль; Lane 2 , положительный контроль мутации; Дорожки 3–6 , клоны 1, 4, 6 и 10, полученные из KBM5-STI ^R1.0.

Доля мутантных транскриптов BCR / ABL на основе экспериментов по клонированию ПЦР составила 20%.Чтобы определить, влияет ли мутация только на часть клеток KBM5-STI ^R1.0, 10 сублиний, полученных из КОЕ, были протестированы на наличие мутации с использованием анализа Dde I. Все эти клонально полученные сублинии проявляли степень устойчивости к STI571, сравнимую с таковой у линии клеток KBM5-STI ^R1.0, из которой они были получены. Продукты BCR / ABL ОТ-ПЦР длиной 177 п.н. из этих субклонов были частично переварены, документируя смесь транскриптов кДНК дикого типа и мутантных транскриптов во всех 10 исследованных клонах.(Рис.3 D ) ⇓ . Это открытие предполагало наличие мутации T315I во всех клетках KBM5-STI ^R1.0 и предоставило доказательства того, что мутация затронула только часть молекул Bcr / Abl в каждой устойчивой клетке.

Используя гДНК в качестве матрицы, из 10 клональных производных клеточной линии KBM5-STI571 ^R1.0 был получен продукт ПЦР длиной 344 п.н., состоящий из полного экзона 3 ABL. Прямое секвенирование как в прямом, так и в обратном направлениях показало наличие последовательностей как дикого типа, так и мутированных последовательностей в линии устойчивых к STI571 клеток и во всех 10 устойчивых клонах.

Dde I Переваривание продукта ПЦР гДНК длиной 169 п.н., полученного из клонов, полученных из KBM-5STI571 ^R1.0, подтвердило наличие копий гена BCR / ABL дикого типа и мутанта во всех 10 клонах (рис. 3 E ) ⇓ . Для определения доли копий гДНК дикого типа и мутантных копий гДНК продукты ПЦР длиной 169 п.н., полученные из гДНК двух клональных сублиний KBM5-STI571 ^R1.0, происходящих из КОЕ (№№ 4 и 10), были субклонированы и проанализированы с помощью Dde. Я ограничиваю.Рестрикционный анализ 30 плазмидных клонов каждый показал 15 и 6% частоту мутантных копий ампликона, полученных из клонов 4 и 10, соответственно.

Обсуждение

Клеточные и молекулярные механизмы, участвующие в развитии устойчивости к STI571 in vitro и in vivo , включают как количественные, так и качественные изменения тирозинкиназы Bcr / Abl. Здесь мы сообщаем о развитии устойчивости к STI571 в p210 ^{Bcr / Abl} -положительной миелоидной клеточной линии KBM5-STI571 ^R1.0 растет в постоянном присутствии STI571; приобретение устойчивого фенотипа характеризовалось лишь незначительным увеличением количества копий гена BCR / ABL и уровня экспрессии белка Bcr / Abl. Однако устойчивые клетки демонстрируют тирозинкиназу Bcr / Abl, устойчивую к ингибированию STI571. Уникальность устойчивых клеток заключается в наличии специфической мутации в АТФ-связывающем домене Bcr / Abl. В то время как такая мутация была недавно обнаружена Gore et al. (4) у пациентов с устойчивой к STI571 бластной фазой ХМЛ это первое сообщение о мутации в АТФ-связывающем кармане киназного домена Abl, которая была обнаружена в BCR / ABL -положительной клеточной линии, ставшей устойчивой к воздействию STI571. in vitro . При исследовании на пациентах мутация была обнаружена в 17–80% клонов плазмиды BCR / ABL , полученных на основе ОТ-ПЦР. (4) . Присутствие как мутантных транскриптов, так и транскриптов BCR / ABL дикого типа было постулировано для отражения мутантных и дикого типа BCR / ABL клеток пациентов. (4 , 7) .Возможные различные пропорции мутантных копий ДНК BCR / ABL и дикого типа в отдельных клетках не оценивались.

Наше исследование выявило мутацию только в клетках KBM5-STI571 ^R1.0, но не в родительских клетках KBM5, что позволяет предположить, что мутация возникла во время воздействия препарата. Эти данные свидетельствуют в пользу приобретения мутации de novo и преимущественного выживания мутантных клеток под давлением селективного лекарственного средства, хотя и не полностью исключают возможность существовавшей ранее мутации BCR / ABL в родительской клетке.Интересен вопрос, как только небольшая часть мутантных молекул Bcr / Abl может объяснить наблюдаемый уровень устойчивости к STI571. Участвует ли эта минорная фракция мутантных копий Bcr / Abl в более критических путях, необходимых для выживания / роста этих клеток, или она действует доминантно-негативным образом? Относительно умеренное увеличение экспрессии p210 в клетках, содержащих большое количество копий BCR / ABL, из которых только малая часть мутирована, предполагает возможность доминантного негативного эффекта.Несколько меньшая доля мутантных копий на гДНК, чем уровень кДНК, предполагает такое влияние на уровни транскрипции. Частичное подавление фосфорилирования киназы в клетках KBM5-STI ^R1.0 с помощью STI571 предполагает, что молекулы дикого типа все еще могут блокироваться лекарством и что для запуска киназы достаточно только мутантной фракции молекул Bcr / Abl. -зависимая активация пролиферации / выживания. Чтобы ответить на эти вопросы, необходимы дополнительные исследования. По-прежнему существует отдаленная вероятность того, что существуют другие необнаруженные мутации в транскриптах псевдо-дикого типа.

Мы проверили возможность того, что точечная мутация могла быть результатом ошибки ПЦР. Помимо включения ДНК-полимеразы с корректирующей активностью в нашу ПЦР, мы проверили воспроизводимость наших результатов в повторных экспериментах, включающих один цикл ПЦР и различные комбинации праймеров. Во всех случаях мы подтвердили наличие точечной мутации C-T в клетках KBM5-STI ^R1.0 и отсутствие каких-либо нуклеотидных изменений, связанных с кодирующей последовательностью АТФ-связывающего кармана в родительских клетках.Никаких других мутаций, недавно обнаруженных у пациентов, клинически устойчивых к STI571. (5, 6, 7, 8, 9, 10) , были идентифицированы в родительских линиях KBM5 или в любых STI571-устойчивых сублиниях KBM5. Интересно, что рост клеток KBM5-STI ^R1.0 и двух клонально полученных сублиний в отсутствие STI571 в течение 25 пассажей приводил к частичному обращению устойчивости (рис. 1). ⇓ . Потребуются дополнительные исследования, чтобы объяснить такое частичное обращение устойчивости к STI571 и оценить биологическое значение этой мутации, происходящей во фракции амплифицированных генов BCR / ABL в устойчивых клетках, и роли этой мутации в устойчивых к STI571 клетках. фенотип.

Таким образом, систематический анализ последовательности ДНК в области, соответствующей АТФ-связывающему карману киназного домена гена BCR / ABL , выявил однонуклеотидную замену CT в положении 944 ABL , которая приводит к мутации T315I. сообщили о доле пациентов с ХМЛ с устойчивостью к ИППП571. (4) . Анализ гДНК и кДНК дал результаты, подтверждающие, что каждая клоногенная клетка содержит копии и транскрипты BCR / ABL дикого типа и мутировавшие BCR / ABL .

Благодарности

Мы благодарим доктора Хуэй Линя и доктора Ральфа Арлингхауса (Онкологический центр М. Д. Андерсона, Техас) за первоначальный совет и за предоставление нам положительного контроля для расщепления Dde I мутанта BCR / ABL и некоторых праймеров. Мы также благодарим доктора Арлингхауса за советы и критический обзор этой рукописи. Мы благодарим Ли Донга за техническую помощь с начальными частями исследования.

Сноски

Расходы на публикацию этой статьи были частично покрыты за счет оплаты страницы.Таким образом, данная статья должна быть помечена как реклама в соответствии с 18 U.S.C. Раздел 1734 исключительно для указания этого факта.
№1 Эта работа была поддержана грантом Женской лейкемической лиги (Ф. О.), Фондом семьи Салнерс для исследований лейкемии (М. Б.) и Министерством здравоохранения Чешской Республики, грантом № NC6652-3.
№2 Оба автора внесли одинаковый вклад в эту работу.
№3 Кому следует обращаться с просьбами о перепечатке, в Департамент лейкемии, Box 428, 1515 Holcombe Boulevard, Houston, TX 77030. Телефон: (713) 792-2248; Факс: (713) 794-4297; Эл. Почта: mberan {at} mdanderson.org
↵4 Используемые сокращения: ХМЛ, хронический миелолейкоз; КОЕ – колониеобразующая единица; МТТ, 3- (4,5-диметилтиазол-2-ил) -2,5-дифенилтетразолий бромид; RI, индекс сопротивления; гДНК, геномная ДНК; ОТ ПЦР, ПЦР с обратной транскрипцией.

Получено 5 апреля 2002 г.
Принято 13 сентября 2002 г.

© 2002 Американская ассоциация исследований рака.

Каталожные номера

↵
Le Coutre P., Tassi E., Varella-Garcia M., Barni R., Mologni L., Cabrita G., Marchesi E., Supino R., Gambacorti-Passerini C. Индукция устойчивости к ингибитору Абельсона STI571 в лейкозных клетках человека посредством амплификации генов. Кровь, 95 : 1758-1766, г. 2000 г.
↵
Weisberg E., Griffin J. D. Механизм устойчивости к ингибитору тирозинкиназы ABL STI571 в линиях кроветворных клеток, трансформированных BCR / ABL. Кровь, 95 : 3498-3505, г. 2000.
↵
Mahon F. X. , Deininger M. W. N., Schultheis B., Chabrol J., Reiffers J., Goldman J. M., Melo J. V. Выбор и характеристика BCR-ABL-положительных клеточных линий с дифференциальной чувствительностью к ингибитору тирозинкиназы STI571: различные механизмы устойчивости.Кровь, 96 : 1070-1079, г. 2000.
↵
Горре М. Э., Мохаммед М., Эллвуд К., Хсу Н., Пакетт Р., Рао П. Н., Сойерс К. Л. Клиническая устойчивость к терапии рака STI571, вызванная мутацией или амплификацией гена BCR-ABL. Наука (Вашингтон, округ Колумбия), 293 : 876-880, 2001.
↵
Hochhaus A., Kreil S., Corbin A., La Rosee P., Lahaye T., Berger U., Cross N.C., Линкеш В., Друкер Б. Дж., Хельманн Р., Гамбакорти-Пассерини К., Корнео Г., Д’Инкальчи М. Корни клинической устойчивости к терапии рака, вызванной STI-571 (Письмо). Наука (Вашингтон, округ Колумбия), 293 : 2163 2001.
↵
Барт К. , Кони-Махоул П., Мело Дж. В., Махон Дж. Р. Корни клинической устойчивости к терапии рака STI-571 (письмо). Наука (Вашингтон, округ Колумбия), 293 : 2163 2001.
↵
Фон Бубнофф Н., Schneller F., Peschel C., Duyster J. Мутации гена BCR-ABL в связи с клинической резистентностью филадельфийской хромосомно-позитивной лейкемии к STI571: проспективное исследование. Ланцет, 356 : 487-491, г. 2002.
↵
Kreil S., Muller MC, Lahaye T., La Rosée P., Corbin AS, Schoch C., Cross N., Berger U., Rieder H., Druker BJ, Gschaimeier H., Rüdiger H., Hochhaus A Молекулярные и хромосомные механизмы устойчивости у пациентов с ХМЛ после терапии STI571 (Gleevec) (аннотация).Кровь, 98 (Дополнение 1) : 1823 г. 2001.
↵
Шах Н.П., Николл Д.М., Горре М.Э., Пакетт Р.Л., Форд Дж., Сойерс К.Л. Устойчивость к гливеку: анализ последовательности выявляет спектр мутаций киназного домена BCR / ABL как в приобретенных, так и в устойчивых de novo случаях хронического миелогенного лейкоза (ХМЛ) при миелоидном бластном кризе (Аннотация). Кровь, 98 (Дополнение 1) : 3205 2001.
↵
Хоффман В.K., Jones L.C., Lemp N.A., de Vos S., Gschaidmeier H., Hoelzer G.H., Ottmann O.G., Koeffler H.P. Острый лимфобластный лейкоз Ph (+), устойчивый к ингибитору тирозинкиназы STI571, имеет уникальную мутацию гена BCR-ABL. Кровь, 99 : 1860 г. 2002.
↵
Beran M., Pisa P., O’Brien S., Kurzrock R., Siciliano M., Cork A., Andersson BS, Kohli V., Kantarjian H. Биологические свойства и рост мышей SCID при новом миелогенном лейкозе клетки в бластной фазе.Cancer Res., 53 : 3603-3610, г. 1993.
↵
Ветцлер М., Талпаз М., Ван Эттен Р. А., Хирш-Гинзберг К., Беран М., Курцрок Р. Субклеточная локализация BCR. Белки ABL и Bcr-Abl в нормальных и лейкозных клетках и корреляция экспрессии с миелоидной дифференцировкой. J. Clin. Исследование., 92 : 1925-1939, 1993.

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки вашего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Нокдаун CLIC4 усиливает индуцированный АТФ апоптоз клеток HN4 через митохондриальный и эндоплазматический ретикулум | Cell & Bioscience

1.
Machiels JP, Lambrecht M, Hanin FX, Duprez T., Gregoire V, Schmitz S и др. Достижения в лечении плоскоклеточного рака головы и шеи. F1000Prime Rep.2014; 6: 44.
PubMed Central Статья PubMed Google Scholar

2.
Бехера М., Овоникоко Т.К., Ким С., Чен З., Хиггинс К., Рамалингам С.С. и др. Сопутствующая терапия таксаном по сравнению со схемами, не содержащими таксан, при местнораспространенных плоскоклеточных карциномах головы и шеи (SCCHN): систематический обзор. Oral Oncol. 2014; 50 (9): 888–94.
Артикул CAS PubMed Google Scholar

3.
Панкари П., Мехра Р. Системная терапия плоскоклеточного рака головы и шеи. Surg Oncol Clin N Am. 2015; 24 (3): 437–54.
Артикул PubMed Google Scholar

4.
Легенький В., Шаповалов Г., Скрыма Р., Преварская Н. Ионные каналы и переносчики при раке.5. Ионные каналы в контроле рака и апоптоза клеток. Am J Physiol Cell Physiol. 2011; 301 (6): C1281–9.
Артикул PubMed Google Scholar

5.
Перетти М., Анджелини М., Савалли Н., Флорио Т., Юспа С.Х., Маццанти М. Хлоридные каналы при раке: основное внимание уделяется хлоридным белкам внутриклеточного канала 1 и 4 (CLIC1 и CLIC4) в развитии опухоли и в качестве нового терапевтического средства. цели. Biochim Biophys Acta. 2015; 1848 ((10 Pt B)): 2523–31.
Артикул CAS PubMed Google Scholar

6.
Jentsch TJ, Stein V, Weinreich F, Zdebik AA. Молекулярная структура и физиологическая функция хлоридных каналов. Physiol Rev.2002; 82 (2): 503–68.
Артикул CAS PubMed Google Scholar

7.
Фернандес-Салас Э., Сух К.С., Сперанский В.В., Бауэрс В.Л., Леви Дж. М., Адамс Т. и др. mtCLIC / CLIC4, белок хлорорганического канала, увеличивается при повреждении ДНК и участвует в апоптотическом ответе на p53.Mol Cell Biol. 2002. 22 (11): 3610–20.
PubMed Central Статья CAS PubMed Google Scholar

8.
Mutoh M, Suh KS, Gerdes M, Yuspa SH. CLIC4, белок внутриклеточного хлоридного канала, представляет собой новую молекулярную мишень для лечения рака. J Investigate Dermatol Symp Proc. 2005; 10: 105–9.
Артикул PubMed Google Scholar

9.
Чжун Дж., Конг Х, Чжан Х, Ю С, Сюй Й, Кан Дж и др.Ингибирование CLIC4 усиливает аутофагию и запускает митохондриальный и ER стресс-индуцированный апоптоз в клетках глиомы U251 человека при голодании. PLoS One. 2012; 7 (6): e39378.
PubMed Central Статья CAS PubMed Google Scholar

10.
Xu Y, Kang J, Yuan Z, Li H, Su J, Li Y, et al. Подавление CLIC4 / mtCLIC усиливает апоптоз, индуцированный перекисью водорода, в клетках глиомы C6. Oncol Rep. 2013; 29 (4): 1483–91.
CAS PubMed Google Scholar

11.
Tang HY, Beer LA, Tanyi JL, Zhang R, Liu Q, Speicher DW. Валидация, специфичная для изоформ белка, определяет множественные внутриклеточные каналы хлорида и изоформы тропомиозина как серологические биомаркеры рака яичников. J Proteomics. 2013; 89: 165–78.
PubMed Central Статья CAS PubMed Google Scholar

12.
Сух К.С., Малик М., Шукла А., Рискэвидж А., Райт Л., Дживиден К. и др. CLIC4 является опухолевым супрессором плоскоклеточного рака кожи.Канцерогенез. 2012. 33 (5): 986–95.
PubMed Central Статья CAS PubMed Google Scholar

13.
Чжэн Д.Л., Хуанг К.Л., Чжоу Ф., Хуанг К.Дж., Линь Дж.Й., Линь X. PA28beta регулирует клеточную инвазию рака желудка посредством модуляции экспрессии хлоридного внутриклеточного канала 1. J Cell Biochem. 2012. 113 (5): 1537–46.
CAS PubMed Google Scholar

14.
Сух К.С., Муто М., Гердес М., Кратчли Дж. М., Муто Т., Эдвардс Л. Е. и др. Антисмысловая супрессия семейства хлоридных внутриклеточных каналов индуцирует апоптоз, усиливает апоптоз, индуцированный фактором некроза опухоли, и подавляет рост опухоли. Cancer Res. 2005. 65 (2): 562–71.
CAS PubMed Google Scholar

15.
Сух К.С., Кратчли Дж. М., Кучек А., Райскэвидж А., Бхат К., Танака Т. и др. Взаимные модификации CLIC4 в эпителии и строме опухоли отмечают злокачественное прогрессирование множественных раковых заболеваний человека.Clin Cancer Res. 2007. 13 (1): 121–31.
Артикул CAS PubMed Google Scholar

16.
Зельцнер Н., Зельцнер М., Граф Р., Унгетуэм У., Фитц Дж. Г., Клавьен ПА. Вода вызывает аутокринную стимуляцию уничтожения опухолевых клеток за счет высвобождения АТФ и связывания рецептора P2. Смерть клетки отличается. 2004; 11 (Приложение 2): S172–80.
Артикул CAS PubMed Google Scholar

17.
Humphreys BD. Активация SAPK / JNK и индукция апоптоза нуклеотидным рецептором макрофага P2X7. J Biol Chem. 2000; 275: 26792–8.
CAS PubMed Google Scholar

18.
Валиа В., Какар С., Элбл Р. Микроменеджмент митохондриального апоптотического пути с помощью р53. Front Biosci (Landmark Ed). 2011; 16: 749–58.
Артикул CAS Google Scholar

19.
Ly JD, Grubb DR, Lawen A. Потенциал митохондриальной мембраны (дельтапси (m)) при апоптозе; обновление. Апоптоз. 2003. 8 (2): 115–28.
Артикул CAS PubMed Google Scholar

20.
Первен С., Ян Дж. С., Ха Т. Дж., Юн Ш. Цианидин-3-глюкозид ингибирует АТФ-индуцированную внутриклеточную концентрацию свободного Ca (2+), образование АФК и митохондриальную деполяризацию в клетках PC12. Корейский J Physiol Pharmacol. 2014. 18 (4): 297–305.
PubMed Central Статья CAS PubMed Google Scholar

21.
Contreras L, Drago I, Zampese E, Pozzan T. Митохондрии: соединение кальция. Biochim Biophys Acta. 2010. 1797 (6–7): 607–18.
Артикул CAS PubMed Google Scholar

22.
Бернарди П., Расола А. Кальций и гибель клеток: митохондриальная связь. Subcell Biochem. 2007. 45: 481–506.
Артикул CAS PubMed Google Scholar

23.
Ян И, Чжу Дж, Ван Х, Сюэ Н, Ду Дж, Мэн Х и др.Контрастные паттерны индуцированного агонистами поступления Ca2 ⁺ из магазина и вазоконстрикции в брыжеечных артериях и аорте с возрастом. J Cardiovasc Pharmacol. 2015; 65 (6): 571–8.
PubMed Central Статья CAS PubMed Google Scholar

24.
Шринивасан В., Сундар Раджан, Баласубраманьям М., Тату У. Стресс эндоплазматического ретикулума (ER) и диабет. Индийский J Med Res. 2007; 125: 411–24.
PubMed Google Scholar

25.
Zhu W, Wang X, Zhou Y, Wang H. C2-церамид вызывает гибель клеток и защитную аутофагию в клетках плоскоклеточного рака головы и шеи. Int J Mol Sci. 2014; 15 (2): 3336–55.
PubMed Central Статья PubMed Google Scholar

26.
Мишо М., Мартинс И., Суккурвала А.К., Аджемиан С., Ма И, Пеллегатти П. и др. Зависимые от аутофагии противоопухолевые иммунные ответы, индуцированные химиотерапевтическими агентами у мышей. Наука. 2011. 334 (6062): 1573–7.
Артикул CAS PubMed Google Scholar

27.
Wong WW, Puthalakath H. Белки семейства Bcl-2: сигнальные механизмы пути митохондриального апоптоза. МСБМБ Жизнь. 2008. 60 (6): 390–7.
Артикул CAS PubMed Google Scholar

28.
Ранганатан В., Мерфи К.М., Фарнсворт М.Л., Кавалларис М., Лок РБ. BCL-2 ингибирует транслокацию BAX из цитозоля в митохондрии во время лекарственного апоптоза опухолевых клеток человека.Смерть клетки отличается. 2002.

29.
Gogol P, Trzcińska M, Bryła M. Подвижность, потенциал митохондриальной мембраны и содержание АТФ в сперматозоидах кролика, хранящихся в экстендере, дополненном аналогом GnRH [des-Gly10, D-Ala6] -LH-RH этиламидом. Pol J Vet Sci. 2014; 17 (4): 571–5.
CAS PubMed Google Scholar

30.
Ван В.А., Гроенендик Дж., Михалак М. Ответы на стресс эндоплазматического ретикулума при раке.Biochim Biophys Acta. 2014; 1843 (10): 2143–9.
Артикул CAS PubMed Google Scholar

31.
Скоррано Л., Оукс С.А., Опферман Дж. Т., Ченг Э. Х., Сорчинелли М. Д., Поццан Т. и др. BAX и BAK регуляция Ca2 + эндоплазматического ретикулума: контрольная точка апоптоза. Наука. 2003. 300 (5616): 135–9.
Артикул CAS PubMed Google Scholar

32.
Оукс С.А., Опферман Дж. Т., Поццан Т., Корсмейер С. Дж., Скоррано Л.Регуляция динамики Ca2 + эндоплазматического ретикулума проапоптотическими членами семейства BCL-2. Biochem Pharmacol. 2003. 66 (8): 1335–40.
Артикул CAS PubMed Google Scholar

33.
Фелс Д.Р., Куменис К. Модуль PERK / eIF2α / ATF4 UPR при устойчивости к гипоксии и росте опухолей. Cancer Biol Ther. 2006; 5: 723–8.
Артикул CAS PubMed Google Scholar

34.
Йошида Х., Мацуи Т., Ямамото А., Окада Т., Мори К. МРНК XBP1 индуцируется с помощью ATF6 и сплайсируется с помощью IRE1 в ответ на стресс ER с образованием высокоактивного фактора транскрипции. Клетка. 2001; 107: 881–91.
Артикул CAS PubMed Google Scholar

35.
Jiang HY, Wek RC. Фосфорилирование альфа-субъединицы фактора инициации эукариот-2 (eIF2alpha) снижает синтез белка и усиливает апоптоз в ответ на ингибирование протеасом.J Biol Chem. 2005. 280 (14): 14189–202.
Артикул CAS PubMed Google Scholar

36.
Оядомари С., Мори М. Роль CHOP / GADD153 в стрессе эндоплазматического ретикулума. Смерть клетки отличается. 2004. 11 (4): 381–389.
Артикул CAS PubMed Google Scholar

37.
Всемирная медицинская ассоциация. Хельсинкская декларация Всемирной медицинской ассоциации: этические принципы медицинских исследований с участием людей.ДЖАМА. 2013; 310: 2191–4.
Артикул Google Scholar

38.
Граймс Д.А., Хубахер Д., Нанда К., Шульц К.Ф., Мохер Д., Альтман Д.Г. Руководство по надлежащей клинической практике: бронзовый стандарт для клинических исследований. Ланцет. 2005. 366 (9480): 172–4.
Артикул PubMed Google Scholar

39.
Ким С.И., Чу К.С., Ли Х.Р., Ли К.С., Кэри Т.Е. Создание и характеристика девяти новых линий клеток рака головы и шеи.Acta Otolaryngol. 1997. 117 (5): 775–84.
Артикул CAS PubMed Google Scholar

40.
Ма Й., Чжан П., Ли Дж., Лу Дж., Ге Дж., Чжао З. и др. Эпоксиэйкозатриеновые кислоты действуют через комплекс TRPV4-TRPC1-KCa1.1, вызывая гиперполяризацию и расслабление гладкомышечной мембраны во внутренних артериях молочной железы человека. Biochim Biophys Acta. 2015; 1852 (3): 552–9.
Артикул CAS PubMed Google Scholar

41.
Чен Дж., Ляо В., Гао В., Хуанг Дж., Гао Ю. Прерывистая гипоксия защищает церебральную митохондриальную функцию от перегрузки кальцием. Acta Neurol Belg. 2013. 113 (4): 507–13.
Артикул PubMed Google Scholar

42.
Шен Б., Чжу Дж., Чжан Дж., Цзян Ф., Ван З., Чжан Ю. и др. Ослабленная пролиферация мезангиальных клеток, связанная с поступлением Ca2 + в хранилище у старых крыс: роль STIM 1 и Orai 1. Возраст (Dordr). 2013. 35 (6): 2193–202.
PubMed Central Статья CAS PubMed Google Scholar