Ремонт счетчика банкнот PRO 85 UM
Ремонт счетчика банкнот PRO 85 UM
Ежедневная рутина в банковских структурах, кассах и бухгалтериях фирм и предприятий подразумевают в обязательном порядке обработку наличных денег. Зачастую это значительные и неструктурированные суммы, которые для какого-либо учета нужно сперва пересчитать. Вручную это делать совершенно нерационально, а применять дорогие и капризные профессиональные счетчики банкнот не оправданно. Как оптимальный компромисс настольного формата применяется счетчик купюр PRO 85 UM – компактный, простой, недорогой, но достаточно быстрый (900 банкнот в минуту) и надежный. Универсальная мобильность подойдет тем, кто не проводит все рабочее время в офисе (рассчитан на питание от сети и батареек).
Сервис и профилактика
Впрочем, надежность банковского оборудования – понятие комбинированное и состоит из двух аспектов:
- Собственно, качество исполнения техники – с этим у PRO 85 UM все в порядке: прочный корпус, налаженные захваты, направляющие и ролики, чувствительные сенсоры;
- Уход, который обеспечивает владелец – чистка узлов от грязи и пыли, что переносят неоднократно бывавшие в хождении купюры, вызов мастера для периодических профилактических диагностик, технического обслуживания, калибровки датчиков и программного обеспечения;
Разработчик в своих рекомендациях по нормам эксплуатации не устает напоминать: слаженная и безупречная работа PRO 85 UM полностью зависит от постоянного регулярного сервиса профессиональным техником, имеющим соответствующий опыт работы, оборудование и навыки. А несоблюдение норм эксплуатации – основная причина неисправностей и поломок.
Стоимость ремонта счетчиков банкнот PRO 85 UM:
| Счетчики банкнот | Диагностика | Мелкий ремонт | Средний ремонт | Сложный ремонт | Сроки |
|---|---|---|---|---|---|
| Счетчики банкнот без детекции | 600 | 750 | 850 | 1050 | 1-3 дня |
| Счетчики банкнот с детекцией | 600 | 850 | 1150 | 1350 | 1-3 дня |
ДИАГНОСТИКА в сервисном центре БЕСПЛАТНО.
Цены указаны за работу, без стоимость запасных частей, и без НДС. Выезд мастера за МКАД – 500 руб.
Вызвать мастера
Три кита восстановления работоспособности счетчика PRO 85 UM
Если в работе счетчика банкнот PRO 85 UM все-таки происходят постоянные неполадки, или прибор полностью вышел из строя, достаточно вызвать нашего мастера по ремонту. Восстановить работоспособность любого банковского оборудования можно из любого состояния в три шага:
- Диагностика. Осмотрев и оценив степень проблемы специалист определяет сроки и стоимость работ.
- Ремонтные работы. Часто затруднение решается обычным техническим обслуживанием (до 90% обращений в сервисный центр вызвано загрязнениями внутренних узлов – первым последствием отсутствия профилактических работ). В более сложных вариантах решает регулировка датчиков, замена изношенных ремней и сгоревших плат, капитальный ремонт счетчика банкнот PRO 85 применяют нечасто (обычно, проще купить новый)
- Профилактика. Вызов мастера или поход в сервисный центр с поломанной аппаратурой не повторится завтра с новой бедой если проведена комплексная чистка и сервисное обслуживание – существует масса пока скрытых неполадок.
Чтобы ремонт не превращался в плохую привычку, стоит проходить регулярную профилактику независимо от состояния банковского оборудования не реже раза в год (обычно ежеквартально). Наша компания предлагает профессиональные услуги по ремонту счетчиков банкнот: тестирование узлов, удаление загрязнений в механизме и настройка сенсоров поможет и после окончания гарантии полагаться на надежность прибора полностью в течение долгих лет.
Сервис банковского оборудования PRО
Сервис банковского оборудования PRO
Взаимодействие с заказчиком осуществляется в соответствии со стандартами качества оказания технических услуг – ITSM.
Порядок оказания услуг включает диагностику оборудования, подготовку технического заключения, согласование с заказчиком сервисной сметы и сроков сервисных работ, осуществление ремонта, сдачу оборудования заказчику.
Сервисный центр несет ответственность перед заказчиком по выданным техническим заключениям. Компания не предоставляет технические заключения и ремонтные сметы без проведения диагностики.
Сервисный центр принимает на себя гарантийные обязательства в объеме оказанных услуг и в соответствии с гарантийными стандартами производителя.
Сервисный центр оказывает консультационную поддержку по эксплуатационным особенностям оборудования и диагностике неисправности а так же проводит установку, настройку и запуск оборудования.
Ремонт PRO. Спецификация.
Сервисный центр осуществляет обслуживание и ремонт следующих моделей:
| Счетчики банкнот PRO. Производительные решения | PRO 85, PRO 85U, PRO 85UM, PRO 100, PRO 100U, PRO 150CL, PRO 150CL/U, PRO 150UM, PRO NC 3500 |
| Счетчики банкнот PRO. До 1200 купюр/мин | PRO MAC, PRO 95U, PRO 95, PRO 40 NEO, PRO 40U NEO, PRO 40 UMI |
| Детекторы валют PRO | PRO CL 16 IR LCD, PRO CL 400 A MULTI, MONIRON DEC MULTI, PRO 4P, PRO COBRA 1350IR LCD, PRO COBRA 1400 IR LCD, PRO CL 200R, MONIRON DEC POS, PRO 1500 IRPM LCD, PRO 1500 IR LCD, PRO 12 LPM, PRO COBRA 1350IR LCD, PRO 12PM |
| Сортировщики банкнот PRO | PRO NC 6100 |
| * Наличие и сроки поставки комплектующих для моделей RICOH не перечисленных в спецификации, уточняйте в офисе компании | |
Счетчик банкнот PRO 85 UM в kasoma.
ruСчетчик банкнот PRO 85 UM
Профессиональные счетчики банкнот серии PRO 85 являются уникальным сочетанием широкого набора функциональных возможностей и при этом приемлемой стоимости. PRO 85 – это незаменимый помощник в операционных кассах банков, офисов, магазинов.
Функции и преимущества
• Пересчет валют различных стран мира
• CDF-фильтр точной проверки валют, подстройка одной кнопкой под тип валюты
• Варьируемая скорость пересчета 900/1200/1500 банкнот в минуту
• Функции суммирования и расширенной фасовки
• Комплексная проверка банкнот:
• Ультрафиолетовая детекция (PRO 85 U, PRO 85 UM)
• Магнитная детекция (PRO 85 UM)
• Детекция по размеру
• Оптическая детекция
• Проверка защитных микропризнаков (с использованием лупы)
• Регулировка чувствительности датчиков
• Звуковая и кодовая индикация при обнаружении подозрительной банкноты
• Яркий и контрастный LED дисплей
• Выносной дисплей и лупа 10-х входят в комплект поставки
Удобен в эксплуатации
С помощью функции суммирования можно подсчитать общее количество банкнот в нескольких пачках. Клавишами 0-9 выставляется количество банкнот, которое необходимо отсчитать.
PRO 85 оснащен ручным и автоматическим режимами начала пересчета. Выбрав ручной старт, с помощью специальных направляющих можно аккуратно подравнять пачку.
На ярком и контрастном LED дисплее четко видны результаты пересчета, при любом освещении. Управление функциями удобно и интуитивно понятно
Выбор запрограммированных валют (российские рубли, доллары США, EURO) производится нажатием одной кнопки. CDF-фильтр точной проверки подстраивает все датчики под выбранную валюту. Отключив CDF-фильтр можно пересчитать валюты других стран мира по усредненным параметрам
Чувствительность датчиков легко подстраивается под тип валюты и ветхость банкнот
• Оптическая плотность – 10 уровней
• Детекция по размеру – 6 уровней
• УФ детекция – 10 уровней
• Магнитная детекция – 10 уровней
При этом подозрительная банкнота всегда лежит сверху в приемном кармане и в общий счет не включается.Выбор скорости пересчета 1500/1200/900 банкнот в минуту позволяет настроить счетчик на работу с банкнотами различного физического состояния
Увеличенные направляющие позволяют помещать до 500 банкнот в подающий карман
Высокие ограничители и особенности тракта способствуют ровной укладке банкнот в приемном кармане
Выбор функций осуществляется легким нажатием на клавиши панели управления. Сенсорная панель обеспечивает долгий срок службы и исключает «залипание» кнопок. Герметичность не допускает попадание жидкости, пыли и грязи в блок управления
Выносной дисплей и десятикратная лупа с подсветкой (для дополнительной проверки отбракованных при пересчете банкнот) входят в комплект поставки.
С помощью удобно расположенного винта регулировки зазора, на счетчиках PRO 85 серии можно легко подстроить зазор под толщину и плотность банкнот с помощью обычной монеты.
Удобная металлическая ручка позволяет переносить счетчик, не опасаясь раскола рукоятки и падения прибора. При пересчете ручка удобно помещается в специальную нишу.
Специально разработанная упаковка надежно защищает счетчик банкнот в процессе хранения и транспортировок
| PRO 85 | PRO 85 U | PRO 85 UM | PRO 85 UM/S | |
| Детекция оптической плотности | + | + | + | + |
| Детекция по размеру (ширина) | + | + | + | + |
| УФ детекция | – | + | + | + |
| Магнитная детекция | – | – | RUR, EUR, USD | EUR, USD |
| Скорость счета, банкнот/мин | 900/1200/1500 | |||
| Емкость подающего кармана, банкнот | 500 | |||
| Емкость приемного кармана, банкнот | 200 | |||
| Размеры банкнот, мм | 40×100–90×180 | |||
| Разрядность дисплея | 0-9999 | |||
| Размер фасовки, банкнот | на выбор 1–999 | |||
| Потребляемая мощность, Вт | 50 | |||
| Габариты, мм | 270x235x260 | |||
| Вес нетто, кг |
5,5 |
|||
|
Практика показывает, что даже обычные настройка и чистка счетчиков денег, без замены изношенных деталей, существенно улучшают рабочие характеристики и увеличивают срок службы банковской техники. При отказе от ремонта банковской техники, но уже при проведенной экспертизе, Вы оплачиваете стоимость выезда мастера (или курьера) и проведения диагностики Вашего счетчика денег или детектора валют. Точность работы и счетчико или верность результатов детекции – жизненная необходимость торгового или банковского предприятия. Услагами этих устройств ежедневно пользуются сотрудники данных учреждений, имеющие дело с наличными средствами или бумагами, защищенными специальными знаками. Поэтому выход оборудования из строя и его простой может грозить серьезными потерями прибыли. Чем скорее вы отремонтируете ваш счетчик, тем выгоднее для вас. Почему же счетчики денег требуют ремонта или обслуживания? Как любой высокоточный прибор, счетчик или детектор требует контроля своего состояния. Главной причиной многих сложных для ремонта случаев, являеется то, что многие пользователи не уделяют внимания профилактической чистке и обслуживанию своих аппаратов. Хотя конструктивно счетчики и обладают большим запасом прочности, они все же страдают от грязи и бумажной пыли, неизменно появляющихся с эксплуатацией. Накопление мусора внутри аппарата приводит к ошибкам в работе, износу и поломке его датчиков и механизмов. Конструкцию или внутреннее устройство счетчика можно мысленно поделить на две части – электронную и механическую. При ремонте электронных компонентов как правило необходима отладка точности оптического датчика детекции или ремонт блока питания, страдающего от резких перепадов напряжения в электросети. Для устранения механических неисправностей чаще всего требуется замена ремней, перенастройка штифтов и различных валов. Поломки также возникают из-за незнания или несоблюдения правил работы с оборудованием, а также из-за нормального для оборудования износа во время его использования – или просто говоря старения механизмов. Цены на ремонт и обслуживание счетчиков банкнот Magner, DeLaRue, Glory, Laurel, Billcon можно узнать у наших менеджеров. Уточняйте, что вклчюено в цену: выезд сервисного инженера по Москве, Санкт Петербург, Новосибирск, диагностика, настройка, регулировка, ремонт счетчика купюр. В цену не включена стоимость заменяемых деталей, а также стоимость их доставки и установки. Возможны различные способы оплаты работ по ремонту счетчиков купюр и детекторов валют, включая оплату по безналичному расчету. Мы осуществляем ремонт счетчиков банкнот и детекторов валют большинства производителей банковской техники: Magner, DeLaRue, Glory, Laurel, Billcon, Dbc и др.
Детекторы валютDORS 60 , DORS 50 ,DORS 100 , DORS 115 ,DORS 125 ,DORS 135 ,DORS 145 ,DORS 100 ,DORS 110 ,DORS 120 ,DORS 131 ,DORS 130 ,DORS 140 ,DORS 200 ,DORS 1000 ,DORS 1100 ,DORS 1200 ,DORS 1300 ,DORS 1010 ,DORS 1020 ,DORS 10 ,DORS 15 ,DORS 25 ,DORS 30 ,DORS 210 ,DORS 220 ,Dors 700 ,Magner 9930A ,Speed DC-140M ,Speed DC-130M ,Speed BJ-140 ,Speed MC-2 ,Pro COBRA 1300 IR ,Pro 1500 IR-серия ,Pro CL 2000 IR ,PRO CL16 IR LPM ,PRO CL16 IR LCD ,PRO12M ,Docash DVM BIG ,Docash DVM Lite ,Docash Super DVM ,Docash 025 ,Docash 525 ,Docash DVM A ,Docash серии 400 ,Docash серии 500 ,Cassida 2200 ,Cassida 2210 ,Cassida 2250 ,Cassida 3300 ,Cassida 33 series ,Cassida 3600 ,Mercury 138 ,Mercury 139 ,Mercury D-10 ,Mercury D-20A ,Mercury D-38 ,Mercury D-39 ,Mercury D-40 SAMURAI ,Mercury D-45 ,Mercury D-45CU ,Mercury D-46 KATANA ,Mercury D-47 UNIVERSUM ,Mercury D-100 ,Mercury 137 ,Mercury D-300 COMPACT Счетчики банкнотMagner 175 , Magner 150 Digital , Magner 15 , Magner 35 , Magner 35S , Magner серии 75 , Magner 75 Digital , Magner VC 525 mini table , Magner VC 525 mini stand , Glory серии GFB , Glory серии GNH/GHD-700 , Speed LD-50A , Speed LD-80A , SPEED LD-40 , PRO 85UM , PRO 15 , PRO 35 , PRO 100 , PRO 95U , PRO 95 , PRO 90E , PRO 90 , PRO 55R , PRO 90A , PRO 40U NEO , V&T-2900C V&T-2900CUV , V&T-3000VR , DORS 600 , DoCash 3000 SD , DoCash 3050 SD/UV , DoCash 3100 SD/UV , DoCash 3200 Value , Cassida 5510 UV , Cassida 5520 UV/USD , Cassida 6600 UV , Cassida 6650 UV , Cassida Tiger series , Advantec 70 series , Union Century series , NexBill KL-2000 , Billcon N-series , Mercury 75А , Mercury 75C , Mercury 100 , Mercury C-50 mini , Mercury C-80 , Mercury C-80 C , Mercury C-90 , Mercury C-90 C , Mercury C-95 , Mercury C-95 C , Mercury C-200 , Mercury C-1000 Сортировщики банкнотGlory GFR-220 , Glory UW-120 / UW-120 MC , Glory UW-220 / UW-220 MC , Glory UW-500 ,MSD 1000 , Барс 3000 , KISAN NEWTON , Magner 350 , PRO NEKSON 2V , SBM (Shinwoo) SB-1100 , SBM (Shinwoo) SB-2000
Упаковщики банкнотDORS 500 , DORS 450 , MAGNER серии VP: VP1, VP2 , Vama BC1 , Vama BP , Cassida P-10 , Cassida B-20
Табло котировки валютDoCash , Cassida R-series |
||
Замена ламп в детекторах. Ремонт Dors, Magner, Pro постгарантийный ремонт. Ремонт Дорс, Магнер. – Новосибирск, Москва, Санкт-Петербург, Нижний Новгород
Счетчик банкнот PRO 85 UM T-01039 мультивалюта
Счетчик банкнот PRO 85 UM T-01039 мультивалюта
Артикул: 5001157964
Наличие товара:
Магазин на Ленина: 0 шт.
Магазин на Октября: 0 шт.
Наличие на складе: 5 шт.Тип
Счетчик банкнот
Описание
Счетчик банкнот PRO 85 UM с детекцией подлинности. Удобен в эксплуатации Функция суммирования. С помощью этой функции можно подсчитать общее количество банкнот в нескольких пачках.
Тип счетчика
офисный
Проверяемая валюта
мультивалюта
Максимальная скорость счета (банкнот/мин)
1500
Минимальная скорость счета (банкнот/мин)
900
С детекциями
ДА
Детекция по геометрии
ДА
Детекция по оптической плотности банкноты
ДА
Магнитная детекция
ДА
Ультрафиолетовая детекция
ДА
Загрузка банкнот
верхняя
Количество скоростей
3
Количество приемных карманов
1
Емкость подающего кармана
500
Емкость приемного кармана
200
Максимальное время работы
7
Питание
от сети
Потребляемая мощность
220
Размеры (ШхГхВ)
270x260x235мм
Особенности
Комплексная проверка банкнот: Регулировка чувствительности датчиков Звуковая и кодовая индикация при обнаружении подозрительной банкноты Яркий и контрастный LED дисплей Выносной дисплей и лупа 10-х входят в комплект поставки Выбор запрограммирован
Внешний вид изделия, его комплектация и характеристики могут изменяться Производителем без предварительного уведомления.
Ремонт счетчика банкнот Рro(Про) 85
Почему стоит обратиться к нам:
Экспресс ремонт в кратчайшие сроки
Квалифицированные специалисты
Гарантия на ремонт и запчасти
Все запчасти для ремонта есть в наличии
Ремонт счетчика банкнот Pro 85 в First Service
Сортировщик банкнот с роликово-фрикционным механизмом подачи купюр — простой и надежный аппарат, но со временем он, как и другие может нуждаться в наладке и ремонте. Ремонт счетной машинки лучше всего проводить в сервис-центре, который специализируется на ремонте подобной техники. Японская техника довольно сложна и требует тонкой настройки, чтобы она могла функционировать надежно и правильно. В Firstservise работают инженеры, которые специализируются на ремонте этой техники.
Прежде чем везти машинку в сервис, обратите внимание на нашу услугу — доставка техники в ремонт курьерской службой. Это удобно, ведь вам не нужно никуда ехать, тратить ценное время.
Курьер приедет в удобное для клиента время, и сам отвезет счетную машинку в ремонт. Ремонт начинается с бесплатной для клиентов диагностики.
Как происходит
ремонт счетчика банкнот
Вы оставляете заявку на сайте, звоните нам или приезжаете в наш сервисный центр
Мы осматриваем технику и определяем неисправность. Согласовываем цену ремонта
Производим ремонт техники оригинальными запачастями в самые кратчайшие сроки
Информируем Ваc о завершении ремонта. Инструмент можно забирать и оплачивать ремонт
Ремонт счетной машинки Pro (Про) 85
При неисправности мультивалютного счетчика купюр Pro 85 стоит обращаться в специализированный сервис, а не в случайную мастерскую. От качества ремонта зависит многое, и в первую очередь точная и надежная работа счетчика. Наш сервисный центр специализированно осуществляет ремонт техники данного бренда.
Счетчик банкнот Pro (Про) 85 um ремонт в Firstservise
Счетчики купюр серии 85 делятся на несколько моделей, в том числе и популярную 85 um. Мы ремонтируем эту и другие модификации, у нас есть необходимые запчасти от производителя.
Наши преимущества для клиентов
Обращаясь к нам, вы можете быть уверены, что ремонт будет выполнен качественно, ведь мы уже много лет присутствуем на рынке сервисных услуг и зарекомендовали себя с лучшей стороны. Что мы предлагаем:- Доставка техники в ремонт и обратно нашей курьерской службой.
- Бесплатную диагностику техники.
- Гарантию от 3 до 6 месяцев.
- Скидку на ремонт 5% и накопительную — 1%.
Обращайтесь к профессионалам. Звоните по телефонам на сайте и выбирайте доставку техники в ремонт или ближайший к вам приемный пункт — адреса и телефоны указаны в верхней части сайта.
Безукоризненно выполняя взятые на себя обязательства, мы предлагаем высокий уровень обслуживания, гибкий подход к клиенту, низкие цены и тщательный подход специалистов к устранению неисправностей техники любого типа. Вне зависимости от того, необходим сервисный ремонт техники известного бренда, или недорогой, бюджетной, вы получаете лучший уровень обслуживания.
(PDF) Гипоксия, репарация ДНК и генетическая нестабильность
1. Blais, J. D. et al. Perk-зависимая трансляционная регуляция
способствует адаптации опухолевых клеток и
ангиогенезу в ответ на гипоксический стресс. Мол. Cell
Biol. 26, 9517–9532 (2006).
2. Tatum, J. L. et al.
Гипоксия: важность для опухоли
биология, неинвазивное измерение с помощью изображений и
значение ее измерения в лечении рака
терапия.Int. J. Radiat. Биол. 82, 699–757 (2006).
3. Brizel, D. M. et al.
Оксигенация опухоли прогнозирует
вероятность отдаленных метастазов в мягкие ткани человека
саркома. Cancer Res. 56, 941–943 (1996).
4. Чан Н., Милошевич М. и Бристоу Р. Г. Опухоль
гипоксия, восстановление ДНК и прогрессирование рака простаты:
новые цели и новые методы лечения. Будущее Онкол. 3,
329–341 (2007).
5. Чаудары Н.И Хилл, Р.
П. Гипоксия и метастазы.
Clin. Cancer Res. 13, 1947–1949 (2007).
6.
Ваупель П. и Майер А. Гипоксия при раке: значение
и влияние на клинический исход. Метастаз рака
Ред. 26, 225–239 (2007).
Отличный обзор роли, которую играет гипоксия в
определении местного контроля после терапии и
метастатическом распространении.
7. Семенца, Г. Л. Регулирование гомеостаза млекопитающих O
2
с помощью фактора, индуцируемого гипоксией 1.Анну. Ред.
Cell Dev. Биол. 15, 551–578 (1999).
8.
Салседа, С. и Каро, Дж. Гипоксия-индуцируемый фактор 1α
(HIF-1α) белок быстро расщепляется убиквитин-протеасомной системой
в нормоксических условиях
. Его стабилизация гипоксией зависит от
окислительно-восстановительных изменений. J. Biol. Chem. 272,
22642–22647 (1997).
9. Huang, LE, Gu, J., Schau, M. & Bunn, HF
Регулирование индуцируемого гипоксией фактора 1α опосредуется
O
2
-зависимым доменом деградации через
убиквитин-протеасомный путь.Proc. Natl Acad. Sci.
USA 95, 7987–7992 (1998).
10. Семенца, Г. Л. Оценка ингибиторов HIF-1 как противораковых агентов
. Drug Discov. Сегодня 12, 853–859
(2007).
11. Giaccia, A., Siim, B.G. & Johnson, R.S. HIF-1 как цель
для разработки лекарств. Nature Rev. Drug Discov.
2, 803–811 (2003).
12. Мёллер Б. Дж., Ричардсон Р. А. и Дьюхерст М. В.
Гипоксия и лучевая терапия: возможности для улучшения результатов лечения рака
.Метастазы рака Ред.
26, 241–248 (2007).
13. Харрис, А. Л. Гипоксия – ключевой регуляторный фактор роста опухоли
. Nature Rev. Cancer 2, 38–47
(2002).
14.
Петерсен, И. Антиангиогенез, анти-VEGF (R) и перспективы.
Последние результаты Cancer Res. 176, 189–199 (2007).
15. Chi, J. T.
et al.
Программы экспрессии генов в ответ
на гипоксию: специфичность клеточного типа и прогностическое значение
Значение при раке человека.PLoS Med. 3, e47
(2006).
16.
Корицынский М. и др. Гипоксический протеом
находится под влиянием ген-специфических изменений трансляции мРНК
. Радиотренажер Oncol. 76, 177–186 (2005).
17. Wouters, B.G. et al.
Контроль гипоксического ответа
посредством регуляции трансляции мРНК. Семин. Cell
Dev. Биол. 16. С. 487–501 (2005).
18.
Корицынский М. и др. Экспрессия генов во время острой
и длительной гипоксии регулируется различными механизмами контроля трансляции
.EMBO J. 25,
1114–1125 (2006).
Недавняя работа, очерчивающая отдельные пути, которые
регулируют трансляцию в ответ на гипоксию,
, тем самым вызывая дифференциальную экспрессию генов.
19.
Корицынский М. и др. Фосфорилирование eIF2α составляет
, необходимое для ингибирования трансляции мРНК и выживания
во время умеренной гипоксии. Радиотер. Онкол. 83,
353–361 (2007).
20.
Папандреу, И.и другие. Аноксия необходима для опухолевых клеток.
Токсичность, вызванная низким содержанием кислорода. Рак
Res. 65, 3171–3178 (2005).
21. Биндра Р. С., Кросби М. Э. и Глейзер П. М. Регламент
репарации ДНК в гипоксических раковых клетках. Cancer
Metastasis Rev.26, 249–260 (2007).
22. Хуанг, Л. Е., Биндра, Р. С., Глейзер, П. М. и
Харрис, А. Л. Генетическая нестабильность, индуцированная гипоксией – рассчитанный
механизм, лежащий в основе прогрессирования опухоли.
J. Mol. Med. 85, 139–148 (2007).
23. Рофстад, Э. К., Галаппати, К., Матизен, Б. и Рууд,
Е. Б. Колеблющаяся и ограниченная диффузией гипоксия при метастазах, вызванных гипоксией
. Clin. Cancer Res. 13,
1971–1978 (2007).
24. Hill, R. & Bristow, RG в
The Basic Science of
Oncology 4th edn (eds Tannock, IF, Hill, RP,
Harrington, L. & Bristow, RG) 289–321 (McGraw -Hill,
Нью-Йорк, 2005).
25. Олив П. Л. и Банат Дж. П. Фосфорилирование гистона
h3AX как мера радиочувствительности. Int. J. Radiat.
Онкол. Биол. Phys. 58, 331–335 (2004).
26.
Frankenberg-Schwager, M., Frankenberg, D. &
Harbich, R. Различные коэффициенты увеличения содержания кислорода для
индуцированных и несоединенных двухцепочечных разрывов ДНК в
эукариотических клетках. Radiat. Res. 128, 243–250 (1991).
27. Террис, Д.J. et al.
Оценка репарации ДНК путем последовательной оценки
оценки лучевой активности опухолей головы и шеи
Чувствительность с использованием кометного анализа. Arch. Отоларингол.
Head Neck Surg. 128, 698–702 (2002).
28. Ван, Дж., Бидерманн, К. А. и Браун, Дж. М. Ремонт
ДНК и разрывов хромосом в клетках, подвергшихся воздействию SR
4233 в условиях гипоксии или ионизирующего излучения. Рак
Res. 52, 4473–4477 (1992).
29. Браун, Дж.M., Evans, J. & Kovacs, M. S. Прогноз
радиочувствительности опухоли человека in situ: подход
с использованием хромосомных аберраций, обнаруженных с помощью флуоресценции
in situ гибридизации. Int. J. Radiat. Онкол.
Биол. Phys. 24. С. 279–286 (1992).
30. Чжан, Х., Кох, К. Дж., Валлен, К. А. и Уиллер, К. Т.
Радиационно-индуцированное повреждение ДНК в опухолях и нормальных
тканях. III. Кислородная зависимость образования
разрывов цепи иДНК-белков.Radiat.
Рез. 142, 163–168 (1995).
31.
Wardman, P. Химические радиосенсибилизаторы для использования в лучевой терапии
. Clin. Онкол. (R. Coll. Radiol) 19, 397–417
(2007).
32.
Овергаард, Дж. Гипоксическая радиосенсибилизация: приветствуется и
игнорируется.
J. Clin. Онкол. 25, 4066–4074 (2007).
Важный обзор истории исследования гипоксии
с точки зрения прогнозирования ответа на
стратегии радиотерапии и радиосенсибилизации
, основанные на нацеливании на гипоксические клетки.
33. Шеннон, А. М., Бушье-Хейс, Д. Дж., Кондрон,
К. М. и Туми, Д. Гипоксия опухоли,
Химиотерапевтическая резистентность и терапия, связанная с гипоксией
. Лечение рака. Ред. 29, 297–307 (2003).
34. Минчинтон А. И. и Таннок И. Ф. Проникновение лекарств в
исолидных опухолях. Nature Rev. Cancer 6, 583–592
(2006).
35. Moeller, B.J. et al.
Плейотропные эффекты блокады HIF-1
на радиочувствительность опухолей.Cancer Cell 8, 99–110
(2005).
В этой статье сообщается, что фракционированная лучевая терапия
может увеличить HIF1 с последующим воздействием на опухолевые клетки
,и эндотелий опухоли.
36.
Unruh, A. et al. Фактор-1, индуцируемый гипоксией, является отрицательным фактором для терапии опухолей
. Онкоген 22,
3213–3220 (2003).
37.
Martinive, P. et al. Предварительное кондиционирование сосудистой сети опухоли
и опухолевых клеток с помощью периодической гипоксии:
последствия для противоопухолевой терапии.Cancer Res. 66,
11736–11744 (2006).
38. Корицынский, М., Воутерс, Б.Г., Амеллем, О. и
Петтерсен, Э.О. Прогрессирование клеточного цикла и радиация
выживаемость после длительной гипоксии и повторной оксигенации
. Int. J. Radiat. Биол. 77, 319–328
(2001).
39.
Zolzer, F. & Streffer, C. Повышенная радиочувствительность при хронической гипоксии
в четырех линиях опухолевых клеток человека. Int. J.
Radiat.Онкол. Биол. Phys. 54, 910–920 (2002).
40. Шрив Д. К. и Харрис Дж. У. Чувствительность in vitro
хронически гипоксических клеток EMT6 / SF к рентгеновскому излучению и
радиосенсибилизаторов гипоксических клеток. Int. J. Radiat. Биол. Relat
Stud Phys. Chem. Med. 48, 127–138 (1985).
Одно из первых сообщений, предполагающих, что клетки, которые
подвергаются хронической гипоксии, могут иметь
различных OER для клеток, которые подвергаются острой
гипоксии
41.
Hockel, M. et al. Связь между гипоксией опухоли
и злокачественным прогрессированием при распространенном раке шейки матки
. Cancer Res. 56, 4509–4515 (1996).
42. Янг, С. Д., Маршал, Р. С. и Хилл, Р. П. Гипоксия
индуцирует сверхрепликацию ДНК и усиливает метастатический потенциал
опухолевых клеток мыши. Proc. Natl Acad. Sci.
USA 85, 9533–9537 (1988).
Одна из первых важных статей, связывающих генетическую
нестабильность, химиочувствительность и местастаз с
гипоксией
43.Янг, С. Д. и Хилл, Р. П. Эффекты реоксигенации на
клеток из гипоксических областей солидных опухолей: противораковые
чувствительность к лекарствам и метастатический потенциал. J. Natl
Cancer Inst. 82, 371–380 (1990).
Еще одна из первых важных статей, связывающих
генетическую нестабильность, химиочувствительность и
метастаз с гипоксией
44. Кэрнс, Р.А. и Хилл, Р.П. Острая гипоксия усиливает
спонтанных метастазов в лимфатические узлы в ортотопической модели
. рак шейки матки человека.РакRes. 64, 2054–2061 (2004).
45. Папп-Сабо Э., Джозефи П. Д. и Кумбер Б. Л.
Влияние микросреды на мутагенез в эпителиальных клетках молочной железы
. Int. J. Cancer 116, 679–685
(2005).
46. Лук, К. К., Вейнот-Дребот, Л., Тьян, Э. и Таннок, И. Ф.
Влияние временной гипоксии на чувствительность к доксорубицину
в линиях клеток человека и мыши. J. Natl
Cancer Inst.82, 684–692 (1990).
47. Рофстад, Э. К. Рак, индуцированный микросредой
метастаз. Int. J. Radiat. Биол. 76, 589–605 (2000).
48. Erler, J. T. et al.
Лизилоксидаза необходима для метастазов, вызванных гипоксией.
. Nature 440, 1222–1226 (2006).
49. Чан, Д. А. и Джаччиа, А. Дж. Гипоксия, экспрессия генов,
и метастазы. Раковые метастазы Rev.26, 333–339
(2007).
50. Каплан Р.Н., Рафии, С. и Лайден, Д. Подготовка «почвы»
: преметастатическая ниша. Cancer Res. 66,
11089–11093 (2006).
51. Graeber, T. G. et al.
Опосредованная гипоксией отбор
клеток с пониженным апоптотическим потенциалом в солидных опухолях
. Nature 379, 88–91 (1996).
52. Zhang, L. & Hill, R.P. Гипоксия увеличивает метастатическую эффективность
за счет активации Mdm2 в клетках KHT и
, повышая устойчивость к апоптозу.Cancer Res. 64,
4180–4189 (2004).
53. Zhang, L. & Hill, R.P. Гипоксия усиливает метастатическую эффективность
в клетках фибросаркомы HT1080 за счет увеличения выживаемости
клеток в легких, а не адгезии и инвазии клеток.
Cancer Res. 67, 7789–7797 (2007).
54. Graeber, T. G. et al.
Гипоксия вызывает накопление белка p53
, но активация контрольной точки фазы G1
в условиях низкого содержания кислорода не зависит от статуса p53
.Мол. Cell Biol. 14, 6264–6277 (1994).
55.
Nordsmark, M. et al. Гипоксия мягких тканей человека
саркомы: неблагоприятное влияние на выживаемость и отсутствие связи
с мутациями р53. Br. J. Cancer 84,
1070–1075 (2001).
56. Кэрнс, Р. А., Каллиомаки, Т. и Хилл, Р. П. Острая (циклическая)
гипоксия усиливает спонтанное метастазирование опухолей мышей KHT
. Cancer Res. 61, 8903–8908 (2001).
57. Ким, Дж.W., Gao, P. & Dang, C. V. Влияние гипоксии
на метаболизм опухоли. Раковые метастазы Rev.26,
291–298 (2007).
58. Белл, Э. Л. и Чандель, Н. С. Митохондриальный кислород
зондирование: регулирование фактора, индуцируемого гипоксией,
митохондрий, генерирующих активные формы кислорода.
Очерки Biochem. 43, 17–27 (2007).
59. Гузи Р. Д. и Шумакер П. Т. Зондирование кислорода
митохондриями в комплексе III: парадокс увеличения
активных форм кислорода во время гипоксии.Exp. Physiol.
91, 807–819 (2006).
60. Гибсон, С. Л., Биндра, Р. С. и Глейзер, П. М. Гипоксия-
индуцировала фосфорилирование Chk2 в зависимости от мутации при атаксии
телеангиэктазии. Рак
Res. 65, 10734–10741 (2005).
61. Фрайберг, Р. А., Хаммонд, Э. М., Дори, М. Дж.,
Велфорд, С. М. и Джакча, А. J. Повреждение ДНК во время
реоксигенациивызывает ответ Chk2-зависимой контрольной точки
.Мол. Cell Biol. 26, 1598–1609 (2006).
Ссылки 60 и 61 показали, что низкий O
2
приводит к
, зависящей от банкомата контрольной точке, и что реоксигенация
ведет к контрольной точке
, зависящей от CHK2.
62. Хаммонд, Э. М., Дори, М. Дж. И Джакчиа, А. J. ATR /
ATM-мишени фосфорилируются с помощью ATR в ответ
на гипоксию и ATM в ответ на реоксигенацию.
J. Biol. Chem. 278, 12207–12213 (2003).
63. Хаммер С., То, К. К., Ю, Ю. Г., Кошиджи, М. &
Хуанг, Л. Е. Гипоксическое подавление клеточного цикла
гена CDC25A в опухолевых клетках. Cell Cycle 6,
1919–1926 (2007).
64. Рейнольдс Т. Ю., Роквелл С. и Глейзер П. М. Генетическая нестабильность
, индуцированная микросредой опухоли.
Cancer Res. 56, 5754–5757 (1996).
Первая статья, подтверждающая концепцию, что гипоксические клетки
имеют повышенную частоту мутаций.
65. Li, C. Y. et al.
Устойчивая генетическая нестабильность в раковых клетках
, вызванная стрессовыми воздействиями, не повреждающими ДНК.
Cancer Res. 61, 428–432 (2001).
66. Сандху, Дж. К., Хаккани, А. С. и Бирнбойм, Х. С. Влияние
пищевого витамина Е на спонтанные или вызванные оксидом азота
мутации, вызванные донорами, на модели опухоли у мышей.
J. Natl Cancer Inst. 92, 1429–1433 (2000).
67. Банат, Дж. П., Синнотт, Л., Larrivee, B., MacPhail, S.H.
& Olive, P.L. Рост клеток V79 в виде опухолей ксенотрансплантата
способствует многоклеточной устойчивости, но не увеличивает частоту спонтанных или радиационно-индуцированных мутантов
. Radiat. Res. 164, 733–744 (2005).
68. Ветерингс, Э. и ван Гент, Д. С. Механизм негомологичного соединения концов
: синопсис синапсов.
Восстановление ДНК (Amst.) 3, 1425–1435 (2004).
ОТЗЫВЫ
ОТЗЫВЫ ПРИРОДЫ
|
ОБЪЕМ РАКА 8
|
МАРТ 2008
|
191
© 2008 Nature Publishing Group
DAB2IP при раке | Онкотаргет
1.ВВЕДЕНИЕ
DOC2 / DAB2 – это ген-супрессор опухолей, связанный с раком яичников [1, 2], простаты [3, 4] и молочной железы [5], а также с хориокарциномой [6]. Используя дрожжевую двугибридную систему, мы сначала идентифицировали DAB2IP как интерактивный белок DOC-2 / DAB2 с несколькими потенциальными функциональными доменами [7]. Его ключевой особенностью является домен гомологии Ras GAP с функциональным влиянием на Ras-опосредованную передачу сигнала и ингибирование роста. Кроме того, домен C2 в DAB2IP, как сообщается, связывается с киназой 1, регулирующей сигнал апоптоза (ASK1), и называется взаимодействующим белком ASK1 (AIP1) [8].По мере того, как доступно все больше и больше исследований, функция DAB2IP является супрессором опухолевых клеток в росте опухолевых клеток, метастазировании и других аспектах прогрессирования рака. Измененная экспрессия гена DAB2IP, часто обнаруживаемая при раке, связана с эпигенетическим молчанием [9]. При раке простаты экспрессия DAB2IP подавлялась метилированием промотора и модификацией гистонов [10, 11]. Учитывая, что DAB2IP, по-видимому, играет существенно важную роль в онкогенезе и метастазировании, мы рассматриваем текущие достижения в отношении роли DAB2IP в развитии рака, молекулярных механизмов, ведущих к аберрантной экспрессии DAB2IP, и его потенциала в качестве терапевтической мишени.
2. Структура DAB2IP
DAB2IP расположен на хромосоме человека 9q33.1 – q33.3 и охватывает примерно 96 т.п.н. с 15 экзонами и 14 интронами [12]. Он высокополиморфен, в этом гене зарегистрировано 1457 полиморфизмов и два различных общих транскрипта. В нескольких сообщениях указывается, что генетическая изменчивость DAB2IP связана с риском рака [13-15].
DAB2IP состоит из нескольких консервативных структурных доменов: гомологии плекстрина (PH) для нацеливания на мембрану, PKC-консервативной области 2 (C2) для взаимодействий с ASK1 и домена белка, активирующего Ras-GTPase (GAP) для ингибирования передачи сигналов Ras, С-конечный периодоподобный домен (PER) для ингибирования фактора транскрипции NF-κB, богатая пролином (PR) область для ингибирования пути выживания PI3K-Akt и мотив алейциновой молнии, который может ингибировать фактор транскрипции CD117 [ 7, 9, 16–20] (рис. 1).
Рисунок 1: Доменная структура DAB2IP и относительные связывающие белки. Домен C2 может взаимодействовать с ASK1, GSK3β и VEFGR2. Домен GAP является критическим связывающим доменом для RasGTP, PP2A и RIP. Домен PER может взаимодействовать с TRAF. Домен PR взаимодействует с субъединицей PI3K p85 и Src, тогда как домен LZ взаимодействует с фактором транскрипции GATA-1.
3. Регуляция экспрессии гена DAB2IP
3.1 Регуляция транскрипции гена DAB2IP
Нормальные эпителиальные клетки предстательной железы имеют повышенные уровни мРНК hDAB2IP по сравнению с клетками РПЖ, что коррелирует с повышенной активностью промотора hDAB2IP [7, 12].Это указывает на то, что регуляция транскрипции hDAB2IP может быть ответственна за подавление экспрессии hDAB2IP в клетках РПЖ.
Гиперметилирование основной последовательности промотора и деацетилирование гистонов кооперативно подавляют экспрессию гена DAB2IP при раке простаты [10, 12] и других типах рака [21-24]. Это приводит к тому, что ингибитор гистондеацетилазы (TSA-) и агент гипоэметилирования (5′-Aza-) действуют совместно, повышая экспрессию DAB2IP в клетках РПЖ [10].
Человеческий энхансер гена гомолога Zeste (Ezh3) кодирует гистон-лизинметилтрансферазу [25] и является предиктором неблагоприятного исхода постпростатэктомии при клинически локализованном РПЖ [26].Мы продемонстрировали, что паттерн экспрессии гена hDAB2IP имеет обратную корреляцию с паттерном экспрессии Ezh3 при РПЖ [11]. Более того, другое исследование показывает, что слияние генов DAB2IP может быть другим механизмом нарушения функции DAB2IP при миелоидном лейкозе [27].
Недавно Wang J et al. доказали, что линейный комплекс Ezh3 / HDAC1 / Snail способствует подавлению DAB2IP при колоректальной карциноме (CRC), что может соответственно индуцировать экспрессию Snail. Таким образом, образуется петля положительной обратной связи между улиткой и DAB2IP, способствующая инвазии и метастазированию в CRC [28].
3.2 Опосредованная протеасомами деградация белка DAB2IP
Убиквитиновая протеасомная система (UPS) участвует в различных физиологических ответах. Лигазы Е3, наиболее специфичные ферменты системы унбиквитнирования, участвуют в развитии рака [29]. Самое большое семейство убиквитинлигаз E3 состоит из четырех структурных и функциональных компонентов: субстрат-распознающий белок F-бокса, адаптерный белок SKP1, каркасный белок Cullin (CUL-1, –2, –3, –4A, –4B, – 5 и –7) и два белка RING, RBX1 / ROC1 и RBX2 / ROC2, также известные как SAG (чувствительные к гену апоптоза) [30].Инузука и др. обнаружили, что DAB2IP может взаимодействовать с Cullin-1 и Cullin-4A. Cullin-1 и связанный с ним белок F-box, который управляет деградацией DAB2IP [31].
S-фаза-ассоциированная киназа протеин-2 (Skp2) является членом Skp, Cullin, F-box-содержащего комплекса и представляет собой убиквитин E3 лигазу [32]. Наша группа обнаружила, что Skp-2-опосредованный UPS играет важную роль в регуляции посттрансляционной экспрессии белка DAB2IP как в иммортализованных нормальных эпителиальных, так и в раковых клетках простаты [9]. Мы также продемонстрировали, что N-концевой конец DAB2IP, в частности домены C2 и GAP, взаимодействует с Skp2 в качестве основного сайта убиквитинирования.Интересно, что DAB2IP может также регулировать стабильность белка Skp2 в нормальных или доброкачественных клетках. Поскольку DAB2IP может дезактивировать Akt посредством подавления пути PI3K [19], а активация Akt, как известно, предотвращает деградацию Skp2 [33], DAB2IP способен модулировать деградацию белка Skp2 через путь Akt. Реципрокная регуляция между DAB2IP и Skp2 участвует в росте эпителия предстательной железы как in vitro, , так и in vivo , что представляет собой уникальный гомеостатический баланс.
4.Механизмы функции DAB2IP
DAB2IP участвует в регуляции разнообразных биологических процессов, включая пролиферацию [7], апоптоз [19], переход эпителия в мезенхиму (EMT) [34], раковые стволовые клетки (CSC). [35], аутофагия [36] и так далее, и будут проиллюстрированы следующим образом (Рисунок 2).
Рисунок 2: Биологическая функция DAB2IP с другим сигнальным путем. DAB2IP функционирует как платформенный белок и оказывает подавляющее действие на опухоль, воздействуя на различные важные сигнальные пути.В целом, DAB2IP ингибирует передачу сигналов, ведущих к росту клеток, эпителиально-мезенхимальному переходу (EMT), ангиогенезу, стволовости рака и аутофагии. Однако DAB2IP облегчает процессы апоптоза клеток, химиорезистентности и радиорезистентности.
4.1 Выживание клеток и апоптоз
Координация и баланс между выживанием клеток и апоптозом имеют решающее значение для нормального развития и гомеостаза многоклеточных организмов [37]. Если этот баланс нарушен, результатом может быть множество заболеваний, включая рак, аутоиммунные и нейродегенеративные состояния [38, 39].Подобно регуляции других сигнальных путей, пролиферация и апоптоз клеток могут быть активированы активацией рецептора фактора роста и / или связыванием интегрина со специфическими молекулами внеклеточного матрикса во время клеточной адгезии.
4.1.1 Передача сигналов Ras / Raf / MEK / ERK (MAPK)
В ответ на внеклеточные стимулы (факторы роста, цитокины, стресс и т. Д.) Каскады RAS / RAF / MEK / ERK (MAPK) активируются и опосредуют как физиологические, так и патологические реакции в клетках и тканях млекопитающих [40].Эта передача сигналов активируется заменой GDP на GTP, тогда как белки, активирующие GTPase (GAP), стимулируют гидролиз GTP до GDP [41, 42]. Во многих случаях рака человека Ras-путь обычно активируется или активируется, как правило, для того, чтобы сделать Ras конститутивно связанным с GTP, что приводит к активации нижестоящего эффекторного пути в отсутствие внеклеточных стимулов [43].
Учитывая тот факт, что DAB2IP имеет домен гомологии Ras GAP, неудивительно, что DAB2IP, по-видимому, является геном-супрессором опухоли, поскольку роль RasGAP включает содействие инактивации GTPase и часто инактивируется при раке [44–49].Wang et al. показали, что DAB2IP может взаимодействовать с N-концевым доменом белка DAB2 напрямую и функционирует как Ras GAP in vivo и in vitro [7].
4.1.2 Передача сигналов TNF
Фактор некроза опухоли (TNF) может запускать два, казалось бы, противоположных основных клеточных ответа: он может вызывать активацию генов и гибель клеток [50]. Как только TNF связывается с TNFR1, происходит тримеризация рецептора и образование сигнального комплекса рецептора TNF. За этим следует набор сигнальных молекул TNFR-ассоциированного белка домена смерти (TRADD) и взаимодействующей с рецептором киназы 1 (RIP1).TRADD затем служит платформой для связывания TNFR-ассоциированного фактора 2 (TRAF2), который, в свою очередь, привлекает митоген-активированную протеинкиназу киназеканазу (MAP3K) и киназный комплекс IκB (IKK), что приводит к активации путей NF-κB и JNK. соответственно [51–53].
Zhang et al. [54] сообщили, что DAB2IP служит преобразователем TRAF2 при участии передачи сигналов TNF. DAB2IP остается комплексом в неактивной форме с TNFR1 через его домен PH / C2. В ответ на TNF DAB2IP диссоциирует от TNFR1 вместе с DAB2IP в цитоплазму и образует комплекс с TRADD, RIP1, TRAF2 и ASK1.Более того, этот комплекс образуется через 15 минут в ответ на TNF, но диссоциирует через 60 минут. Что еще более важно, DAB2IP связывается с эффекторным доменом (RING-пальцем) TRAF2 через его домен PER и опосредует TNF / TRAF2-индуцированную активацию ASK1-JNK при одновременном ингибировании передачи сигналов IKK-NF-κB.
4.1.3 Передача сигналов ASK1-JNK
Как упоминалось выше, киназа 1, регулирующая сигнал апоптоза (ASK1), является членом семейства MAP3K и активирует сигнальные каскады как SEK1-JNK, так и MKK3 / MKK6-p38 [55–58], который играет решающую роль в передаче сигнала апоптоза [59–61].
При поиске регуляторных белков ASK1 в качестве кандидата был идентифицирован DAB2IP. Богатый лизином кластер в домене C2 внутри DAB2IP является критическим для связывания ASK1 [8]. В отличие от ассоциации ASK1 и 14–3–3, DAB2IP связывается преимущественно с дефосфорилированным ASK1 по Ser967, что приводит к активации ASK1, индуцированной ASK1 активации JNK и апоптозу EC. Более того, активность GAP в отношении Ras м. Ингибировать EGF-индуцированную активацию ERK [7], поэтому ассоциация DAB2IP с ASK1 и активность GAP DAB2IP необходимы для активности ASK1, усиленной AIP1 [8].
Хотя сам DAB2IP не является белком фосфатазы, DAB2IP может связывать фосфатазу PP2A через домен C2 [18]. Кроме того, функциональное значение комплекса PP2A-DAB2IP демонстрируется синергическим действием PP2A и DAB2IP на активацию передачи сигналов ASK-JNK и апоптоза EC. В результате DAB2IP функционирует как каркасный белок в TNF-индуцированном привлечении PP2A к комплексу ASK1, что приводит к дефосфорилированию ASK1 по pSer967 и активации передачи сигналов ASK1-JNK.
Более того, RIP в комплексе DAB2IP обеспечивает индуцированное TNF фосфорилирование DAB2IP по 14–3–3 сайтам связывания (Ser604).Более того, RIP1 связывается с GAP-доменом DAB2IP и синергизирует DAB2IP-опосредованную активацию JNK / p38 MAPK, приводящую к апоптозу EC [17].
Личио Коллавин и его исследовательская группа далее продемонстрировали, что DAB2IP может быть функционально инактивирован путем физического взаимодействия с мутантными белками p53 в цитоплазме. Это взаимодействие mutp53 / DAB2IP препятствует TNF-индуцированным сигнальным комплексам, которые активируют ось ASK1 / JNK, тем самым способствуя активации NF-κB [62].
4.1.4 Передача сигналов PI3K / Akt
Фосфатидилинозитол-3-киназа / протеинкиназа-B / мишень рапамицина (PI3K / AKT / mTOR) у млекопитающих является одним из наиболее важных внутриклеточных путей и часто активируется при различных формах рака. [63, 64].У млекопитающих PI3K класса I подразделяется на группу класса I A с каталитической субъединицей 110 кДа (p110) и регуляторной субъединицей 85 кДа (p85) [65]. P85 стабилизирует p110 в установившемся состоянии [66]. В настоящее время считается, что предварительно сформированный, неактивный комплекс p85-p110 присутствует в цитоплазме покоящихся клеток и готов к активации в ответ на соответствующие сигналы [67]. AKT, как нисходящий от PI3K, способен регулировать многие биологические процессы, такие как пролиферация, апоптоз и рост [68].
Используя образцы предстательной железы человека и клеточные линии РПЖ, снижение DAB2IP связано с прогрессированием РПЖ и вызывает остановку клеточного цикла G 0 / G 1 , одновременно способствуя апоптозу клеток.Более того, DAB2IP может подавлять AKT и способствовать активации ASK1 при лечении TNF-α [19]. PR-домен в DAB2IP и есть сайт связывания с p85. Примечательно, что DAB2IP-опосредованное связывание и ингибирование PI3K-AKT также способствует активации ASK1. Таким образом, DAB2IP является каркасным белком, способным связывать сигнальные молекулы как выживания, так и смерти, координируя пути PI3K-AKT и ASK1, что подразумевает его роль в поддержании гомеостаза клетки.
Путем сканирования последовательности белка DAB2IP Dai et al.идентифицировали два консенсусных сайта Akt (RxRxxpS / T), расположенных на С-конце DAB2IP по серину-847 и серину-907 [31]. Только экспрессия Akt может увеличивать фосфорилирование DAB2IP по S847, а фосфорилированный DAB2IP блокирует взаимодействие с H-Ras и TRAF2. Таким образом, Akt будет ингибировать DAB2IP, что будет дополнительно подпитывать активность Akt, и так далее в петле положительной обратной связи.
4.1.5 Передача сигналов рецептора андрогена
Измененный рецептор андрогена (AR), типичный фактор транскрипции, обычно связан с прогрессированием РПЖ.Данные клинических образцов и животных моделей четко указывают на обратную корреляцию между экспрессией AR и DAB2IP. DAB2IP может блокировать ядерную транслокацию AR, а также транскрипционную активность AR [69]. Более того, уникальный PR-домен в DAB2IP способен конкурировать с AR с образованием комплекса с c-Src в клетках РПЖ, ингибируя пути передачи сигналов c-Src и Erk. Как следствие, DAB2IP может блокировать геномный и негеномный пути активации AR. DAB2IP может также подавлять активность конститутивно активных вариантов сплайсинга AR.
4.2 Эпителиально-мезенхимальный переход (EMT)
EMT – это высококонсервативная клеточная программа, которая позволяет поляризованным неподвижным эпителиальным клеткам превращаться в подвижные мезенхимальные клетки. Эта важная программа развития часто активируется во время инвазии и метастазирования рака [70].
4.2.1 Передача сигналов гликоген-синтазокиназы (GSK) -3β-β-катенина (путь Wnt)
В канонических путях Wnt ингибируется GSK-3β-опосредованная деградация β-катенина, что приводит к накоплению β-катенина в ядро.Ядерный β-катенин связывается с членами семейства факторов транскрипции TCF / LEF, чтобы способствовать ЕМТ [71].
Как упоминалось выше, DAB2IP действует как опухолевый супрессор при развитии рака с его ингибированием роста клеток и проапоптозом. Мы сначала перенесли акцент на его роль в метастазировании рака и обнаружили, что потеря экспрессии DAB2IP инициирует EMT как в нормальных клетках эпителия предстательной железы человека, так и в клетках карциномы простаты, а также в клинических образцах РПЖ [34]. Напротив, восстановление DAB2IP в метастатических клетках РПЖ обращало EMT.У мышей с нокаутом DAB2IP эпителиальные клетки простаты обнаруживали повышенные мезенхимальные маркеры. Используя модель ксенотрансплантата простаты человека – мышь, мы наблюдали, что подавление эндогенного DAB2IP в клетках карциномы человека приводит к развитию множественных метастазов в лимфатические узлы и отдаленные органы. Что касается механизмов, мы также обнаружили, что DAB2IP модулирует передачу сигналов GSK-3β-β-катенина посредством активации GSK-3β за счет снижения фосфорилирования Ser9 с помощью комплекса PP2A-DAB2IP. Более того, домен C2 был ключевым доменом, который взаимодействует как с GSK-3β, так и с PP2A, и способствует активации GSK-3β для снижения накопления ядерного β-катенина и его транскрипционной активности.
4.2.2 Передача сигналов NF-κB
NF-κB играет решающую роль в EMT, а также способствует прогрессированию опухоли и метастазированию при многих раковых заболеваниях [72]. В первичных иммортализованных эпителиальных клетках предстательной железы человека (PrEC) удаление DAB2IP активировало NF-κB и повышало экспрессию транскрипционных мишеней NF-κB. Напротив, восстановление DAB2IP подавляет NF-κB и гены-мишени в клетках PC-3 [20]. Примечательно, что мутант DAB2IP-S604A, который является точечным мутантом по DAB2IP, предотвращающим связывание TRAF2, дефектно подавлял инвазию и EMT.Поскольку Ras питает путь NF-κB [73], они далее обнаружили, что потеря DAB2IP индуцирует активацию Ras и NF-κB в РПЖ. Таким образом, DAB2IP функционирует как сигнальный каркасный белок, который координирует регуляцию Ras и NF-κB через отдельные домены, подавляя рост опухоли и метастазирование, соответственно.
4.3 Ангиогенез
Ангиогенез, процесс образования новых кровеносных сосудов, вовлеченный во многие физиологические и патологические состояния, такие как ишемия, диабет, атеросклероз и рак [74].Фактор роста эндотелия сосудов, VEGF, оказывает свое биологическое действие посредством взаимодействия с рецепторами, присутствующими на поверхности клетки. После связывания VEGF с внеклеточным доменом рецептора происходит димеризация и аутофосфорилирование внутриклеточных рецепторных тирозинкиназ, и активируется каскад нижестоящих белков [75].
При исследовании in vivo функций DAB2IP, Zhang et al. [76] создали мышей с генетическим дефицитом гена DAB2IIP (KO-мыши).KO-мыши продемонстрировали резко усиленный ангиогенез в двух моделях воспалительного ангиогенеза, одна из которых была связана с усилением передачи сигналов VEGF-VEGFR2. В соответствии с этим, VEGF-индуцированная неоваскуляризация уха, роговицы и сетчатки значительно усилилась у мышей KO. При избыточной экспрессии DAB2IP усиленный ангиогенез сетчатки заметно снижался. In vitro , VEGF-индуцированная миграция EC ингибировалась сверхэкспрессией DAB2IP, связанной со снижением передачи сигналов VEGFR2.Далее было обнаружено, что VEGFR2-PI3K-DAB2IP образует комплекс и играет критическую роль на поздней фазе ответа VEGF. DAB2IP соединяется с VEGFR2 и PI3K через разные домены, домен C2 и домен PR соответственно. Таким образом, исследования in vivo, и in vitro, демонстрируют, что DAB2IP действует как эндогенный каркасный белок в воспалительном ангиогенезе, подавляя VEGFR2-Akt-зависимую передачу сигналов.
4.4 Радиорезистентность
Когда дело доходит до лечения рака, лучевая терапия имеет то преимущество, что она неинвазивна и хорошо переносится.Однако частота биохимических / клинических рецидивов для значительного числа пациентов, особенно РПЖ, подвергшихся лучевой терапии, к сожалению, остается высокой [77]. Одна из возможных причин может быть связана с внутренней или приобретенной радиорезистентностью субпопуляции опухолей. Ионизирующее излучение (IR) вызывает несколько типов повреждений ДНК, индуцирует образование перекрестных связей ДНК-ДНК и ДНК-белок и вызывает одинарные (SSB) и двойные разрывы (DSB) [78]. Контрольная точка клеточного цикла и апоптоз являются защитными механизмами для защиты клеток от повреждения ДНК, позволяя им восстанавливать генетические повреждения [79, 80].
Kong и др. Обнаружили, что подавление DAB2IP значительно увеличивает резистентность к IR как в РПЖ, так и в нормальных эпителиальных клетках простаты [81]. Нокдаун DAB2IP связан с ускоренной кинетикой репарации DSB, демонстрирует устойчивую раннюю контрольную точку G 2 -M и демонстрирует устойчивость к индуцированному IR апоптозу. Недавно мы обнаружили, что цитотоксин растяжения (CDT), бактериальный генотоксин, секретируемый C. jejuni , может вызывать остановку клеточного цикла на уровне G2 / M и апоптоз в DAB2IP-дефицитных клетках РПЖ, проявляющих радиоустойчивый фенотип [82] .Эти механизмы связаны с деградацией ДНК клетки-хозяина и остановкой клеточного цикла, что приводит к повышенной индукции апоптоза.
ДНК-PKcs, каталитическая субъединица ДНК-зависимой протеинкиназы, играет доминирующую роль в опосредованной негомологичным соединением концов (NHEJ) репарации DSB, геномной целостности и поддержании стабильности теломер [83, 84] и активируется при различных формах рака. [85]. Ингибиторы DNA-PKcs, такие как NU7441, были разработаны для усиления местного контроля опухолей на основе лучевой терапии [86].С целью разработки стратегий преодоления радиорезистентности DAB2IP-отрицательного РПЖ и повышения эффективности ЛТ при РПЖ Yu et al. ясно обнаружено, что адъювантное лечение NU7441 может преодолеть радиорезистентность РПЖ, которая вызвана потерей DAB2IP [36].
По мере того, как лучевая терапия продолжает расширять свою роль в лечении рака мочевого пузыря (BCa), DAB2IP демонстрирует аналогичное свойство мощного гена-супрессора опухоли [87, 88]. Tingting et al. обнаружили, что снижение экспрессии DAB2IP индуцирует радиорезистентность в BCa и ассоциируется с повышенной экспрессией мутантного гена атаксии-телеангиэктазии (ATM) [88].Фосфорилирование или ингибитор (KU55933) ATM можно использовать для повышения чувствительности клеток, нокдаун DAB2IP к облучению.
4,5 Аутофагия
Согласно предыдущему исследованию потеря DAB2IP приводит к радиорезистентности in vitro [81, 89], впоследствии они провели ретроспективное когортное исследование и определили, что потеря DAB2IP приводит к значительному увеличению частоты биохимических неудач после лучевой терапии. [36].
Аутофагия – это путь лизосомной деградации, который устраняет поврежденные или потенциально опасные белки и органеллы в неблагоприятных условиях для защиты организмов от метаболического стресса [90].Многие исследования показали, что раковые клетки используют аутофагию как адаптивную и контекстно-зависимую систему для преодоления радиотерапевтического стресса [91]. В ответ на облучение ДНК-PKcs, участвующие в аутофагии и ингибировании ДНК-PKcs, сенсибилизируют клетки к индуцированной IR аутофагической гибели клеток [92]. Это означает, что обработка NU7441 может способствовать как индуцированному IR, так и базальному уровню аутофагии клеток, в то время как избыточная экспрессия DAB2IP ослабляет IR и индуцирует аутофагию NU7441 [36]. Существует противоречивое мнение о функции пути Akt-mTOR-S6, регулирующего аутофагию [90, 93].Чтобы изучить возможный механизм, лежащий в основе регуляции DAB2IP в аутофагии, они также обнаружили, что путь mTOR-S6K был инактивирован в DAB2IP-экспрессирующих клетках РПЖ. Таким образом, можно предположить, что DAB2IP ингибирует аутофагию посредством подавления пути mTOR-S6K.
4.6 Химиорезистентность
Понимание механизмов химиорезистентности рака имеет решающее значение, потому что раковые клетки со временем развивают химиорезистентность [94].
Когда мы обсуждаем радиорезистентность DAB2IP-дефицитных клеток РПЖ, эти клетки проявляют меньшую чувствительность к эпотилону B (EpoB), который является широко используемым химиотерапевтическим препаратом в клинической практике [89].Дальнейшие исследования пытались проверить химиочувствительность других химиотерапевтических препаратов (например, доцетаксела, гемцитабина, истодакса и EPoB) в клетках РПЖ [95]. В результате клетки DAB2IP-KD показали значительно более высокую устойчивость ко всем четырем лекарствам, в то время как стабильная сублиния, экспрессирующая DAB2IP, становится более чувствительной к химиотерапевтическим агентам.
Секреторный кластерин (sCLU) представляет собой стресс-активируемый цитопротекторный шаперон, который активируется многими различными противораковыми препаратами, что обеспечивает устойчивость к лечению [96].Экспрессия белка CLU и мРНК, а также активность промоторов обратно коррелировали с уровнями экспрессии DAB2IP [95]. Поскольку sCLU регулируется посредством передачи сигналов IGF-1R / Src / Erk / Egr-1, где ответ раннего роста-1 (Egr-1) является ключевым фактором транскрипции, контролирующим активность промотора гена CLU [97], они впоследствии показали, что DAB2IP проявляет ингибирующее действие. влияние на экспрессию Egr-1 посредством перекрестного взаимодействия между Wnt-β-катенином и передачей сигналов IGF-1 / IGFR.
4.7 Раковые стволовые клетки
Раковые стволовые клетки (РСК), составляющие небольшую часть раковых клеток, ответственны за инициирование, прогрессирование, локальное и отдаленное рецидивирование / метастазирование рака, а также за неэффективность химио- и химиотерапии. лучевая терапия.РСК проявляют многие свойства, подобные нормальным стволовым клеткам, такие как плюрипотентность, самообновление и медленная пролиферация [98, 99].
Yun и его коллеги продемонстрировали, что потеря DAB2IP улучшает характеристики CSCs в клетках РПЖ человека [35]. Даже инъекция очень небольшого количества клеток KD, таких как одна отдельная клетка, иммунодефицитным мышам может привести к развитию подкожных опухолей. Путем скрининга различных маркеров стволовых клеток они обнаружили, что DAB2IP подавляет CD117 как на уровне белка, так и на уровне транскрипции.DAB2IP может облегчить связывание GATA-1 с промотором гена CD117 при репрессии транскрипционной активности CD117. Домен LZ на С-конце DAB2IP является ключевым доменом взаимодействия с GATA-1. Поскольку CD117 является рецепторной тирозинкиназой, он может регулировать многие нижестоящие эффекторы, включая пути PI3K, MAPK, PKC и JAK-STAT [100]. DAB2IP может напрямую ингибировать сигнальный путь PI3K-Akt-mTOR, который увеличивает белок c-myc для активации экспрессии гена ZEB1, что приводит к повышенным фенотипам CSC.Таким образом, DAB2IP, по-видимому, играет гомеостатическую роль в модуляции стволовости РПЖ, проявляя некоторые базальные клеточные фенотипы через сигнальную ось CD117-ZEB1.
5. ВЫВОДЫ И ПЕРСПЕКТИВЫ
Почти тринадцать лет назад DAB2IP был впервые идентифицирован нашей группой как интерактивный белок DOC-2 / DAB2 с эффектом ингибирования роста при раке простаты. С тех пор функции DAB2IP распространились на регулирование клеточной пролиферации, выживаемости, апоптоза, эпителиально-мезенхимального перехода (EMT), фенотипа раковых стволовых клеток, устойчивости к радиации и химиотерапии нашей группой и другими группами.Однако другие функции DAB2IP в прогрессировании опухоли все еще не определены. Напр., DAB2IP ингибирует VEGFR2-опосредованный адаптивный ангиогенез в сосудистых ЭК [76], в то время как его роль в опухолевом ангиогенезе недостаточно изучена. Метаболическое перепрограммирование считается признаком рака [99] и, по-видимому, является областью ускоренных исследований за последнее десятилетие [101]. Было идентифицировано много генов-мишеней и сигнальных путей, участвующих в DAB2IP, и интересно исследовать, вносит ли DAB2IP вклад в метаболизм перепрограммированных раковых клеток, и возможный механизм должен быть выяснен в будущем.
Что еще более важно, механизм регулирования DAB2IP по-прежнему остается одним из наиболее важных вопросов, на которые необходимо ответить. Как было показано ранее, DAB2IP часто подавляется метилированием ДНК, метилированием гистонов и ацетилированием в агрессивных опухолях человека [10, 21–23, 31, 88]. Тем не менее, промотор DAB2IP может не быть метилирован и / или ацетилирован в некоторых опухолях, и могут существовать альтернативные механизмы, влияющие на его функции. Недавно Ди Минин и его коллеги показали, что DAB2IP может быть функционально инактивирован физическим взаимодействием с мутантными белками p53, что влияет на реакцию раковых клеток на воспалительные цитокины [62].Разумно предположить, может ли DAB2IP быть функционально инактивирован p53 дикого типа и возможные механизмы и функции, лежащие в основе этого взаимодействия. Более того, наша группа продемонстрировала, что экспрессия DAB2IP может регулироваться Skp2-опосредованной деградацией протеасом [9], поэтому другие механизмы деградации протеасом еще предстоит решить. МикроРНК (miRNAs) представляют собой высококонсервативные некодирующие РНК длиной 20-25 нуклеотидов, которые связываются с последовательностями в 3′-нетранслируемой области (3′-UTR) мРНК и посттранскрипционно регулируют экспрессию генов-мишеней [102].Недавно Xu Y et al. обнаружили, что DAB2IP является прямой мишенью miR-889 при плоскоклеточном раке пищевода [103], тогда как другие микроРНК, участвующие в регуляции экспрессии DAB2IP, будут обнаружены в будущем. Более того, длинные некодирующие РНК (lncRNAs), определенные как транскрипты длиннее 200 нуклеотидов (nt), некодирующие РНК, функционируют в широком диапазоне биологических процессов и могут регулировать экспрессию генов в цис- или транс-геноме с помощью различных механизмов [104]. Однако о возможной регуляции между lncRNAs и DAB2IP не сообщалось.Следовательно, в ближайшие несколько лет все больше и больше исследований будут проливать свет на функцию и регуляцию DAB2IP и давать представление о методах лечения, которые могут быть использованы для борьбы с этими видами рака.
БЛАГОДАРНОСТЬ И ФИНАНСИРОВАНИЕ
Эта работа была поддержана грантами Национального фонда естественных наук Китая (№ 81372324, № 81201638, № 81572861 и № 81302309).
КОНФЛИКТЫ ИНТЕРЕСОВ
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
ССЫЛКИ
1. Mok SC, Chan WY, Wong KK, Cheung KK, Lau CC, Ng SW, Baldini A, Colitti CV, Rock CO, Berkowitz RS. DOC-2, кандидатный ген-супрессор опухоли при эпителиальном раке яичников человека. Онкоген. 1998; 16: 2381–2387.
2. Фазили З., Сун В., Миттельштадт С., Коэн С., Сюй XX. Инактивация Disabled-2 является ранним шагом к онкогенности яичников. Онкоген. 1999; 18: 3104–3113.
3. Ценг С.П., Эли Б.Д., Ли Й., Понг Р.С., Се Дж. Т.. Регулирование гена DOC-2 крысы во время индуцированной кастрацией дегенерации вентральной простаты крысы и его ингибирующая функция роста в клетках карциномы предстательной железы человека.Эндокринология. 1998; 139: 3542–3553.
4. Чжоу Дж., Скоулз Дж., Се Дж. Т.. Мишени передачи сигнала при андроген-независимом раке простаты. Раковые метастазы Rev. 2001; 20: 351–362.
5. Schwahn DJ, Medina D. p96, белок, родственный MAPK, постоянно подавляется во время канцерогенеза молочной железы у мышей. Онкоген. 1998; 17: 1173–1178.
6. Фулоп В., Колитти К.В., Дженест Д., Берковиц Р.С., Ю Г.К., Нг СВ, Сепеси Дж., Мок СК. DOC-2 / hDab2, кандидатный ген-супрессор опухоли, участвующий в развитии гестационных трофобластических заболеваний.Онкоген. 1998; 17: 419–424.
7. Ван З., Цзэн С.П., Понг Р.С., Чен Х., МакКоннелл Д.Д., Навоне Н., Се Дж.Т. Механизм ингибирующего роста эффекта DOC-2 / DAB2 при раке простаты. Характеристика нового белка, активирующего GTPase, связанного с N-концевым доменом DOC-2 / DAB2. J Biol Chem. 2002; 277: 12622–12631.
8. Zhang R, He X, Liu W, Lu M, Hsieh JT, Min W. AIP1 опосредует TNF-альфа-индуцированную активацию ASK1, облегчая диссоциацию ASK1 от его ингибитора 14-3-3.J Clin Invest. 2003; 111: 1933–1943.
9. Цай Ю.С., Лай К.Л., Лай С.Х., Чанг К.Х., Ву К., Цзэн С.Ф., Фазли Л., Глив М., Сяо Г., Ганди Л., Шарифи Н., Моро Л., Цзай Т.С. и др. Роль гомеостатической регуляции между опухолевым супрессором DAB2IP и онкогенным Skp2 в росте рака простаты. Oncotarget. 2014; 5: 6425–6436. DOI: 10.18632 / oncotarget.2228.
10. Чен Х., Тойока С., Газдар А.Ф., Сие Дж. Т.. Эпигенетическая регуляция нового гена-супрессора опухолей (hDAB2IP) в клеточных линиях рака простаты.J Biol Chem. 2003; 278: 3121–3130.
11. Chen H, Tu SW, Hsieh JT. Подавление экспрессии гена DAB2IP человека, опосредованное комплексом polycomb Ezh3 и гистондеацетилазой, при раке простаты. J Biol Chem. 2005; 280: 22437–22444.
12. Chen H, Pong RC, Wang Z, Hsieh JT. Дифференциальная регуляция человеческого гена DAB2IP в нормальном и злокачественном эпителии предстательной железы: клонирование и характеристика. Геномика. 2002; 79: 573–581.
13. Дугган Д., Чжэн С.Л., Ноултон М., Бенитес Д., Димитров Л., Виклунд Ф., Роббинс С., Айзекс С.Д., Ченг Й., Ли Дж., Сан Дж., Чанг Б.Л., Марович Л. и др.Два полногеномных ассоциативных исследования агрессивного рака простаты выявили предполагаемый ген супрессора опухоли простаты DAB2IP. J Natl Cancer Inst. 2007; 99: 1836–1844.
14. Yang L, Li Y, Ling X, Liu L, Liu B, Xu K, Bin X, Ji W, Lu J. Распространенный генетический вариант (97906C> A) DAB2IP / AIP1 связан с повышенным риском и раннее начало рака легких у китайских мужчин. PLoS One. 2011; 6: e26944.
15. Hsieh JT, Karam JA, Min W. Генетические и биологические доказательства, указывающие на то, что ген вызывает агрессивный рак простаты.J Natl Cancer Inst. 2007; 99: 1823–1824.
16. Богуски М.С., Маккормик Ф. Белки, регулирующие Ras и его родственников. Природа. 1993; 366: 643–654.
17. Zhang H, Zhang H, Lin Y, Li J, Pober JS, Min W. Опосредованное RIP1 фосфорилирование AIP1 в 14-3-3-связывающем сайте имеет решающее значение для ASK1-JNK / p38, индуцированного фактором некроза опухоли. активация. J Biol Chem. 2007; 282: 14788–14796.
18. Мин В., Линь И, Тан С., Ю Л., Чжан Х, Ван Т., Лун Т., Фу Х, Чен Х. AIP1 рекрутирует фосфатазу PP2A в ASK1 при активации ASK1-JNK, вызванной фактором некроза опухоли.Circ Res. 2008; 102: 840–848.
19. Се Д., Гор С., Чжоу Дж., Понг Р.С., Чжан Х., Ю Л., Веселла Р.Л., Мин В., Се Дж. Т.. DAB2IP координирует пути PI3K-Akt и ASK1 для выживания клеток и апоптоза. Proc Natl Acad Sci U S. A. 2009; 106: 19878–19883.
20. Мин Дж., Заславский А., Феделе Дж., Маклафлин С. К., Речек Е. Е., Де Рэдт Т., Гуней И., Строчлик Д. Е., Макконейл Л. Е., Бероухим Р., Бронсон Р. Т., Райом С., Хан В. К. и др. Каскад онкоген-опухолевый супрессор запускает метастатический рак простаты, скоординированно активируя Ras и ядерный фактор-каппаB.Nat Med. 2010; 16: 286–294.
21. Dote H, Toyooka S, Tsukuda K, Yano M, Ouchida M, Doihara H, Suzuki M, Chen H, Hsieh JT, Gazdar AF, Shimizu N. Аберрантное метилирование промотора в гене интерактивного белка DAB2 человека (hDAB2IP) в гене рак молочной железы. Clin Cancer Res. 2004; 10: 2082–2089.
22. Dote H, Toyooka S, Tsukuda K, Yano M, Ota T., Murakami M, Naito M, Toyota M, Gazdar AF, Shimizu N. Аберрантное метилирование промотора в гене интерактивного белка DAB2 человека (hDAB2IP) в опухоли желудочно-кишечного тракта.Br J Рак. 2005; 92: 1117–1125.
23. Яно М., Тойока С., Цукуда К., Доте Х, Оучида М., Ханабата Т., Аое М., Дате Х, Газдар А.Ф., Шимицу Н. Аберрантное метилирование промотора гена интерактивного белка DAB2 человека (hDAB2IP) при раке легких. Int J Cancer. 2005; 113: 59–66.
24. Цю Г. Х., Се Х, Рулевая рубка Н., Харрисон Д., Чен Г. Г., Сальто-Теллез М., Лай П., Росс Дж. А., Хуй СК. Дифференциальная экспрессия hDAB2IPA и hDAB2IPB в нормальных тканях и метилирование промотора hDAB2IPA при гепатоцеллюлярной карциноме.J Hepatol. 2007; 46: 655–663.
25. Schuettengruber B, Chourrout D, Vervoort M, Leblanc B, Cavalli G. Регулирование генома с помощью белков polycomb и trithorax. Клетка. 2007; 128: 735–745.
26. Родос Д.Р., Санда М.Г., Отте А.П., Чиннайян А.М., Рубин М.А. Мультиплексный биомаркерный подход для определения риска рецидива рака предстательной железы, определяемого специфическим антигеном простаты. J Natl Cancer Inst. 2003; 95: 661–668.
27. von Bergh AR, Wijers PM, Groot AJ, van Zelderen-Bhola S, Falkenburg JH, Kluin PM, Schuuring E.Идентификация нового гена RAS GTPase-активирующего белка (RASGAP) в 9q34 в качестве партнера слияния MLL у пациента с острым миелоидным лейкозом de novo. Гены Хромосомы Рак. 2004; 39: 324–334.
28. Wang J, Zhu X, Hu J, He G, Li X, Wu P, Ren X, Wang F, Liao W, Liang L, Ding Y. Положительная обратная связь между Snail и DAB2IP регулирует EMT, вторжение и метастазирование. при колоректальном раке. Oncotarget. 2015; 6: 27427–27439. DOI: 10.18632 / oncotarget.4861.
29. Бельскене К., Багдонене Л., Мозуратиене Дж., Казбарьене Б., Януленис Э.Убиквитин-лигазы E3 как мишени для лекарств и прогностические биомаркеры при меланоме. Медицина (Каунас). 2015; 51: 1–9.
30. Джин Дж., Кардозо Т., Ловеринг Р.С., Элледж С.Дж., Пагано М., Харпер Дж. У. Систематический анализ и номенклатура белков F-бокса млекопитающих. Genes Dev. 2004; 18: 2573–2580.
31. Dai X, North BJ, Inuzuka H. Отрицательная регуляция DAB2IP путями Akt и SCFFbw7. Oncotarget. 2014; 5: 3307–3315. DOI: 10.18632 / oncotarget.1939.
32. Шульман Б.А., Каррано А.К., Джеффри П.Д., Боуэн З., Киннукан Е.Р., Финнин М.С., Элледж С.Дж., Харпер Дж.В., Пагано М., Павлетич Н.П.Понимание SCF-убиквитин-лигаз из структуры комплекса Skp1-Skp2. Природа. 2000; 408: 381–386.
33. Gao D, Inuzuka H, Tseng A, Chin RY, Toker A, Wei W. Фосфорилирование Akt1 способствует цитоплазматической локализации Skp2 и нарушает опосредованное APCCdh2 разрушение Skp2. Nat Cell Biol. 2009; 11: 397–408.
34. Се Д., Гор К., Лю Дж., Понг Р.С., Мейсон Р., Хао Дж., Лонг М., Каббани В., Ю Л., Чжан Х., Чен Х., Сунь Х, Бутман Д.А. и др. Роль DAB2IP в модуляции эпителиально-мезенхимального перехода и метастазирования рака простаты.Proc Natl Acad Sci U S. A. 2010; 107: 2485–2490.
35. Юн Э.Дж., Пэк С.Т., Се Д., Цзэн С.Ф., Добин Т., Эрнандес Э., Чжоу Дж., Чжан Л., Ян Дж., Сун Х., Сяо Дж., Хэ Д., Киттлер Р. и др. DAB2IP регулирует фенотип раковых стволовых клеток посредством модуляции рецептора фактора стволовых клеток и ZEB1. Онкоген. 2015; 34: 2741–52.
36. Yu L, Tumati V, Tseng SF, Hsu FM, Kim DN, Hong D, Hsieh JT, Jacobs C, Kapur P, Saha D. DAB2IP регулирует аутофагию при раке простаты в ответ на комбинированное лечение радиацией и ДНК -Ингибитор ПКЦС.Неоплазия. 2012; 14: 1203–1212.
37. Мацузава А., Итиджо Х. Молекулярные механизмы выбора между жизнью и смертью: регуляция апоптоза с помощью киназы, регулирующей сигнал апоптоза 1. J. Biochem. 2001; 130: 1–8.
38. Грин Д.Р., Кремер Г. Патофизиология гибели митохондриальных клеток. Наука. 2004; 305: 626–629.
39. Левин Б., Кремер Г. Аутофагия в патогенезе болезней. Клетка. 2008; 132: 27–42.
40. МакКубри Дж. А., Стилман Л. С., Абрамс С. Л., Ли Дж. Т., Чанг Ф., Бертран Ф. Е., Наволаник П. М., Терриан Д. М., Франклин Р. А., Д’Ассоро А.Б., Солсбери Дж. Л., Маццарино М.С., Стивала Ф. и др.Роль путей RAF / MEK / ERK и PI3K / PTEN / AKT в злокачественной трансформации и лекарственной устойчивости. Adv Enzyme Regul. 2006; 46: 249–279.
41. Раджалингам К., Шрек Р., Рапп У. Р., Альберт С. Рас онкогены и их последующие мишени. Biochim Biophys Acta. 2007; 1773: 1177–1195.
42. Чаппелл У.Х., Стилман Л.С., Лонг Дж.М., Кемпф Р.С., Абрамс С.Л., Франклин Р.А., Басеке Дж., Стивала Ф., Дония М., Фагон П., Малапонте Дж., Маццарино М.С., Николетти Ф. и др. Ингибиторы Ras / Raf / MEK / ERK и PI3K / PTEN / Akt / mTOR: обоснование и важность ингибирования этих путей для здоровья человека.Oncotarget. 2011; 2: 135–164. DOI: 10.18632 / oncotarget.240.
43. Карноуб А.Е., Вайнберг Р.А. Рас онкогены: раздвоение личностей. Nat Rev Mol Cell Biol. 2008; 9: 517–531.
44. Takai Y, Sasaki T, Matozaki T. Малые GTP-связывающие белки. Physiol Rev.2001; 81: 153–208.
45. Бернардс А. Пробелов в изобилии! Обзор предполагаемых белков, активирующих ГТФазу суперсемейства Ras, у человека и дрозофилы. Biochim Biophys Acta. 2003; 1603: 47–82.
46. Бернардс А., Сеттлман Дж. Контроль GAP: регулирование регуляторов малых GTPases.Trends Cell Biol. 2004; 14: 377–385.
47. Бернардс А., Сеттлман Дж. ГАП в передаче сигналов фактора роста. Факторы роста. 2005; 23: 143–149.
48. Окада Т., Синха С., Эспозито И., Скьявон Дж., Лопес-Лаго, Массачусетс, Су В, Пратилас, Калифорния, Абеле С., Эрнандес Дж. М., Охара М., Окада М., Виале А, Хегуй А. и др. Rho GTPase Rnd1 подавляет онкогенез молочной железы и EMT, ограничивая передачу сигналов Ras-MAPK. Nat Cell Biol. 2015; 17: 81–94.
49. Хуан И, Чжао М., Сюй Х, Ван К., Фу З, Цзян И, Яо З.Подавление RASAL2 при раке яичников способствует эпителиально-мезенхимальному переходу и метастазированию. Oncotarget. 2014; 5: 6734–6745. DOI: 10.18632 / oncotarget.2244.
50. Вальчак Х. TNF и убиквитин на перекрестке активации генов, гибели клеток, воспаления и рака. Immunol Rev.2011; 244: 9–28.
51. Хсу Х, Сюн Дж., Геддел Д.В. Белок TRADD, связанный с TNF рецептором 1, сигнализирует о гибели клеток и активации NF-каппа B. Клетка. 1995; 81: 495–504.
52. Abruzzese RS.Доказательство того, что развитие персонала имеет значение. Nurs Staff Dev Insid. 1992; 1: 4.
53. Ваджант Х., Пфизенмайер К., Шойрих П. Передача сигналов фактора некроза опухоли. Смерть клетки отличается. 2003; 10: 45–65.
54. Zhang H, Zhang R, Luo Y, D’Alessio A, Pober JS, Min W. AIP1 / DAB2IP, новый член семейства Ras-GAP, трансдуцирует TRAF2-индуцированную активацию ASK1-JNK. J Biol Chem. 2004; 279: 44955–44965.
55. Ичидзё Х., Нисида Э., Ирие К., тен Диджке П., Сайто М., Моригути Т., Такаги М., Мацумото К., Миядзоно К., Гото Ю.Индукция апоптоза с помощью ASK1, MAPKKK млекопитающих, который активирует сигнальные пути SAPK / JNK и p38. Наука. 1997; 275: 90–94.
56. Saitoh M, Nishitoh H, Fujii M, Takeda K, Tobiume K, Sawada Y, Kawabata M, Miyazono K, Ichijo H. Тиоредоксин млекопитающих является прямым ингибитором киназы, регулирующей сигнал апоптоза (ASK) 1. EMBO J 1998; 17: 2596–2606.
57. Nishitoh H, Saitoh M, Mochida Y, Takeda K, Nakano H, Rothe M, Miyazono K, Ichijo H. ASK1 необходим для активации JNK / SAPK с помощью TRAF2.Mol Cell. 1998; 2: 389–395.
58. Chang HY, Nishitoh H, Yang X, Ichijo H, Baltimore D. Активация киназы 1, регулирующей сигнал апоптоза (ASK1), адаптерным белком Daxx. Наука. 1998; 281: 1860–1863.
59. Тибблз Л.А., Вудгетт-младший. Стресс-активируемые пути протеинкиназ. Cell Mol Life Sci. 1999; 55: 1230–1254.
60. Ян Д.Д., Куан С.Й., Уитмарш А.Дж., Ринкон М., Чжэн Т.С., Дэвис Р.Дж., Ракич П., Флавелл Р.А. Отсутствие апоптоза, вызванного эксайтотоксичностью, в гиппокампе мышей, лишенных гена Jnk3.Природа. 1997; 389: 865–870.
61. Турнье С., Хесс П., Ян Д.Д., Сюй Дж., Тернер Т.К., Нимнуал А., Бар-Саги Д., Джонс С.Н., Флавелл Р.А., Дэвис Р.Дж. Потребность в JNK для стресс-индуцированной активации пути смерти, опосредованной цитохромом с. Наука. 2000; 288: 870–874.
62. Ди Минин Г., Беллаццо А., Даль Ферро М., Кьяруттини Г., Нуццо С., Биччиато С., Пьяцца С., Рами Д., Булла Р., Соммаджо Р., Розато А., Дель Сал Г., Коллавин Л. Мутант p53 перепрограммирует TNF. передача сигналов в раковых клетках посредством взаимодействия с опухолевым супрессором DAB2IP.Mol Cell. 2014; 56: 617–629.
63. Лю П., Ченг Х., Робертс Т.М., Чжао Дж.Дж. Нацеленность на фосфоинозитид-3-киназный путь при раке. Nat Rev Drug Discov. 2009; 8: 627–644.
64. Янку Ф., Уилер Дж. Дж., Наинг А., Степанек В. М., Фальчук Г. С., Фу С., Гарридо-Лагуна И., Цимбериду А. М., Пиха-Пол С. А., Моулдер С. Л., Ли Дж. Дж., Лутра Р., Хонг Д. С. и др. Мутации PIK3CA при запущенных формах рака: характеристики и исходы. Oncotarget. 2012; 3: 1566–1575. DOI: 10.18632 / oncotarget.716.
65. Кок К., Геринг Б., Ванхасебрук Б.Регулирование экспрессии фосфоинозитид-3-киназы при здоровье и болезни. Trends Biochem Sci. 2009; 34: 115–127.
66. Ю Дж., Чжан Ю., Макилрой Дж., Рордорф-Николич Т., Орр Г. А., Бэкер Дж. М.. Регулирование p85 / p110 фосфатидилинозитол 3′-киназы: стабилизация и ингибирование каталитической субъединицы p110alpha регуляторной субъединицей p85. Mol Cell Biol. 1998; 18: 1379–1387.
67. Vivanco I, Sawyers CL. Путь AKT фосфатидилинозитол-3-киназы при раке человека. Nat Rev Рак.2002; 2: 489–501.
68. Ким А.Х., Хурсигара Г., Сун Х, Франке Т.Ф., Чао М.В. Akt фосфорилирует и отрицательно регулирует киназу 1, регулирующую сигнал апоптоза. Mol Cell Biol. 2001; 21: 893–901.
69. Ву К., Лю Дж., Цзэн С.Ф., Гор Си, Нинг З., Шарифи Н., Фазли Л., Глив М., Капур П., Сяо Дж., Сунь Х, Оз ОК, Мин В. и др. Роль DAB2IP в активации рецепторов андрогенов во время прогрессирования рака простаты. Онкоген. 2014; 33: 1954–1963.
70. Ян Дж., Вайнберг Р.А. Эпителиально-мезенхимальный переход: на перекрестке развития и метастазирования опухоли.Dev Cell. 2008; 14: 818–829.
71. Гонсалес Д.М., Медичи Д. Сигнальные механизмы эпителиально-мезенхимального перехода. Sci Signal. 2014; 7: re8.
72. Хубер М.А., Беуг Х. и Вирт Т. Эпителиально-мезенхимальный переход: в центре внимания находится NF-kappaB. Клеточный цикл. 2004; 3: 1477–1480.
73. Mayo MW, Wang CY, Cogswell PC, Rogers-Graham KS, Lowe SW, Der CJ, Baldwin AS, Jr. Необходимость активации NF-kappaB для подавления p53-независимого апоптоза, индуцированного онкогенным Ras.Наука. 1997; 278: 1812–1815.
74. Кармелье П. Ангиогенез в здоровье и болезни. Nat Med. 2003; 9: 653–660.
75. Феррара Н. Фактор роста эндотелия сосудов: фундаментальные науки и клинический прогресс. Endocr Rev.2004; 25: 581–611.
76. Zhang H, He Y, Dai S, Xu Z, Luo Y, Wan T, Luo D, Jones D, Tang S, Chen H, Sessa WC, Min W. AIP1 действует как эндогенный ингибитор VEGFR2-опосредованного сигнализация и воспалительный ангиогенез у мышей. J Clin Invest. 2008; 118: 3904–3916.
77. Chang L, Graham PH, Hao J, Bucci J, Cozzi PJ, Kearsley JH, Li Y. Новые роли радиорезистентности в метастазировании рака простаты и лучевой терапии. Раковые метастазы Rev.2014; 33: 469–496.
78. Foray N, Arlett CF, Malaise EP. Радиационно-индуцированные двухцепочечные разрывы ДНК и радиочувствительность клеток человека: более пристальный взгляд. Биохимия. 1997; 79: 567–575.
79. Сюй Б., Ким С.Т., Лим Д.С., Кастан МБ. Две молекулярно различные контрольные точки G (2) / M индуцируются ионизирующим облучением.Mol Cell Biol. 2002; 22: 1049–1059.
80. An J, Chervin AS, Nie A, Ducoff HS, Huang Z. Преодоление радиорезистентности клеток рака простаты с помощью нового ингибитора Bcl-2. Онкоген. 2007; 26: 652–661.
81. Kong Z, Xie D, Boike T, Raghavan P, Burma S, Chen DJ, Habib AA, Chakraborty A, Hsieh JT, Saha D. Подавление экспрессии гена DAB2IP человека в клетках рака простаты приводит к устойчивости к ионизирующему излучению . Cancer Res. 2010; 70: 2829–2839.
82. Лай Ч., Чанг С.С., Лю Х. Х., Цай Ю.С., Сюй Ф.М., Ю Ю.Л., Лай С.К., Ганди Л., Понг Р.С., Хсу Х.В., Ю Л, Саха Д., Хси Дж. Т..Сенсибилизация радиорезистентных клеток рака простаты уникальным цитотоксическим токсином. Oncotarget. 2014; 5: 5523–5534. DOI: 10.18632 / oncotarget.2133.
83. Ли Ш., Ким Ч. Комплекс ДНК-зависимых протеинкиназ: многофункциональный белок в контрольной точке восстановления и повреждения ДНК. Mol Cells. 2002; 13: 159–166.
84. Хефферин М.Л., Томкинсон А.Е. Механизм репарации двухцепочечных разрывов ДНК за счет негомологичного соединения концов. Ремонт ДНК (Amst). 2005; 4: 639–648.
85. Ум Дж. Х., Квон Дж. К., Кан СД, Ким М. Дж., Джу Д. С., Бэ Дж. Х., Ким Д. В., Чанг Б. С., Ким Ш.Связь между антиапоптотическими молекулами и метастатической активностью, а также участие ДНК-зависимой протеинкиназы в хемосенсибилизации метастатических раковых клеток человека путем блокады рецептора эпидермального фактора роста. J Pharmacol Exp Ther. 2004; 311: 1062–1070.
86. Лихи Дж.Дж., Голдинг Б.Т., Гриффин Р.Дж., Хардкасл И.Р., Ричардсон С., Ригоро Л., Смит Г.К. Идентификация высокоэффективного и селективного ингибитора ДНК-зависимой протеинкиназы (ДНК-PK) (NU7441) путем скрининга хроменоновых библиотек.Bioorg Med Chem Lett. 2004; 14: 6083–6087.
87. Шен Й.Дж., Конг З.Л., Ван Ф.Н., Ван Х.К., Биан XJ, Ган Х.Л., Ван К.Ф., Йе DW. Подавление DAB2IP приводит к пролиферации и инвазии клеток и способствует неблагоприятным исходам при раке мочевого пузыря. Cancer Sci. 2014; 105: 704–712.
88. Zhang T, Shen Y, Chen Y, Hsieh JT, Kong Z. Ингибитор ATM KU55933 сенсибилизирует радиорезистентные раковые клетки мочевого пузыря с дефектом гена DAB2IP. Int J Radiat Biol. 2015; 91: 368–378.
89. Kong Z, Raghavan P, Xie D, Boike T., Burma S, Chen D, Chakraborty A, Hsieh JT, Saha D.Эпотилон B увеличивает дозу облучения в гена DAB2IP, подавляя радиорезистентные клетки рака простаты. Int J Radiat Oncol Biol Phys. 2010; 78: 1210–1218.
90. Вессони А.Т., Филиппи-Кьела Е.С., Менк К.Ф., Ленц Г. Аутофагия и целостность генома. Смерть клетки отличается. 2013; 20: 1444–1454.
91. Бергманн А. Аутофагия и гибель клеток: больше нет разногласий. Клетка. 2007; 131: 1032–1034.
92. Дайдо С., Ямамото А., Фудзивара К., Савая Р., Кондо С., Кондо Ю. Ингибирование каталитической субъединицы ДНК-зависимой протеинкиназы радиосенсибилизирует злокачественные клетки глиомы, вызывая аутофагию.Cancer Res. 2005; 65: 4368–4375.
93. Кондо Ю., Канзава Т., Савая Р., Кондо С. Роль аутофагии в развитии рака и ответ на терапию. Nat Rev Рак. 2005; 5: 726–734.
94. Серуга Б., Окана А. Тэннок IF. Лекарственная устойчивость при метастатическом устойчивом к кастрации раке простаты. Нат Рев Клин Онкол. 2011; 8: 12–23.
95. Ву К., Се Д., Цзоу И, Чжан Т., Понг Р.С., Сяо Г., Фазли Л., Глив М., Хе Д., Бутман Д.А., Се Дж. Т.. Механизм DAB2IP в химиорезистентности клеток рака простаты.Clin Cancer Res. 2013; 19: 4740–4749.
96. Зубейди А., Чи К., Глив М. Ориентация на цитопротекторный шаперон, кластерин, для лечения запущенного рака. Clin Cancer Res. 2010; 16: 1088–1093.
97. Крисуэлл Т., Беман М., Араки С., Лесков К., Катальдо Е., Майо Л.Д., Бутман Д.А. Отсроченная активация рецептора инсулиноподобного фактора роста-1 / Src / MAPK / Egr-1 регулирует экспрессию кластерина, фактора, способствующего выживанию. J Biol Chem. 2005; 280: 14212–14221.
98. Мани С.А., Го В., Ляо М.Дж., Итон Э.Н., Айянан А., Чжоу А.Ю., Брукс М., Рейнхард Ф., Чжан С.К., Шипицин М., Кэмпбелл Л.Л., Поляк К., Брискен С. и др.Эпителиально-мезенхимальный переход генерирует клетки со свойствами стволовых клеток. Клетка. 2008; 133: 704–715.
99. Ханахан Д., Вайнберг Р.А. Признаки рака: следующее поколение. Клетка. 2011; 144: 646–674.
100. Sundstrom M, Vliagoftis H, Karlberg P, Butterfield JH, Nilsson K, Metcalfe DD, Nilsson G. Функциональные и фенотипические исследования двух вариантов линии тучных клеток человека с отдельным набором мутаций в c-kit proto -онкоген. Иммунология. 2003; 108: 89–97.
101.Boroughs LK, DeBerardinis RJ. Метаболические пути, способствующие выживанию и росту раковых клеток. Nat Cell Biol. 2015; 17: 351–359.
102. Ли Й, Ан С, Хан Дж, Чой Х, Ким Дж, Йим Дж, Ли Дж, Провост П., Радмарк О, Ким С., Ким В.Н. Ядерная РНКаза III Дроша инициирует процессинг микроРНК. Природа. 2003; 425: 415–419.
103. Xu Y, He J, Wang Y, Zhu X, Pan Q, Xie Q, Sun F. miR-889 способствует пролиферации плоскоклеточного рака пищевода посредством DAB2IP. FEBS Lett. 2015; 589: 1127–1135.
104. Ван И, Хе Л, Ду И, Чжу П, Хуан Г, Ло Дж, Янь Х, Е Б, Ли Ц, Ся П, Чжан Г, Тян И, Чен Р. и др. Длинная некодирующая РНК lncTCF7 способствует самообновлению стволовых клеток рака печени человека посредством активации передачи сигналов Wnt. Стволовая клетка. 2015; 16: 413–425.
договор морп фрагм тейдж проблема поставлен Stelzl спроектированный взятый рассчитанный класс NTQ фрагмент 12 ккал Weihl точно цилиндр потенциально жесткий криостат бабник Киршнер медицина логометрический показано порог Исключенный Хантингтон 1630 тандемно онемевший цилиндр AA денгиен способствовать акцептор AH синтетический дестабилизировать идущий супер упражнение дикий полипро xvii 311 на услуга атипичный 51 вспомогательный лавка подражание галлат дрочить крупный рогатый скот меня “пустой ВАЖНОСТЬ KE усложнять 1259 впрыснутый ir Паркер голень симула замена ПЗС-матрица интересно проект робустны 16764 Рон патогенный оценивать фосфатаза 12А биохимия кузнец 2002 г. АНСАМБЛЬ 52 ХАРАКТЕРИСТИКИ агмент смерть супернатант завершить охарактеризованный 10 общение 134 комбинаторный Амилоид заметный косвенный производство евро подросток интерактор xix возбуждение отмечая миксту напоминал соответствующий зависимость прошло показатель medi секрета дифференцирующий распределение резко экспериментально dence Паттерсон стекло важность Равиндра плотность разумно иначе чувствительность идентифицировать Чжон инверсо » ctra источник индивидуальный восстанавливаться Deleteriou леск местный спектры подавляет 30 часов синтаза E12A HELIX Рой Klein Каджава Питер 7466 фридман лейва ферент позволяя Уорнер орилирование Stoc Эффект Turmaine SC JL читатель Abili минимизированный 638 506 сардо кому широко сокращение показывать httntq15p10k2 доступность заговор достаточный язь протофибр dary недостаток Джоун модифицировать фаво количественно оценить колесо стирка четный EFRET влияющий центрифуга ретро стабилизированный точка зрения постулировать legleiter slo немедленно Desai свежий hed конфор вовлекать происхождение лос амфипатичность благодарность умение обращаться выдающийся Холлоуэй 416640 повторение стохастический 1698892 Codrich камень Роза восторг лучше ser16 цистеин МУТАЦИОННЫЙ 272 явный cgi Magalhae терпение MLSLKESAKMFFATKELQ phe 95 окончательный 1983 г. 114 Hologie ужалить 1650см sybyl7 dered httntq3 Вентрути сюрприз жизнеспособный регулировать подавал наука уже летальность описание последующий чанг 1981 г. СМ знание вставлен htm 28 мкм разнообразие обмен эксперимент остальные стигат прол флакон по своей сути привлекательный убиквитин так далее конфо последний длина волны альтера вспышка WT складывать stic Broadnes 112 191 йодер VN ВЫ эндопептидаза Рамдзан строительство неустойчивый гиббен организация нанесенный на карту dition внутрикорпоративный 588 возможность Драгаци distr подавление должность 63 2832287 арендная плата 2677131 дорога матч везикул личный характеризовать стр62 прежде всего Стэнфилд Сунил Palidwor Warley 22 мкм геллер локализация ПРИЛОЖЕНИЕ PS гологический 170 Таблица лежать в основе зеленый кар Frieden регата 3500 замена дохолян HTTNTQ8K2 ИЗМЕНЕНО неврологический перекрытие экспозиция нейрональный амфипатический аргументированный рокабранд пульс партнер 142 дружба задерживать M8P 19 существенный отражение сеть Ingle груз несговорчивый ученик Quence растворенный Доктор медицины htt также ва набор 2HELIX NW усреднение UCLA игат gment тиал агент брокер лидер встретились хьюи СКРЕМБЛ гибкость обмен приравнивание микроин оргель опер захватывать или же ЕСЛИ выражение мог 1155 равнодушие HUNTINGTON’S ……………………………………… 128 MH представление мелия гванмезия восприимчивый размышлять родословная подведение итогов кальмодулин 48 мкм сослался YS пассивный Пейчал гун Шрирам фрагмент исследовать Poral Lanine S16A предвидеть приносить 2712 Гоме способствовать Я зрение атрофия CF935 YJ заявление 425 инфракрасный Ата гипотеза ведомый HP нравится 133 прояснение 8451 оба ава заблокирован превосходить PR в конце концов трифиро Eppendorf Серрано неразветвленный ХАРАКТЕРИСТИКА целевой транзит rev прежний стать Butland сибилла выдвинутый phe17 важный сигма замышленный расположена 1675 пик гибридный элед aqueou растяжка гранула консистентный 12ul ондары стабильность xima неблагоприятный было бы СТРОИТЕЛЬСТВО Herrmann itie 66um адаптированный кикучи Беннет дублировать PGQ9P1 20oc существенно индивидуальный 34 кор Боскович 184 заглянуть CA150 концентра амилоид RV возможный 412 181 олик существование презирать делает обнаруживаемый стыковка ода получать рон горе Бен nex поли усыновленный фридман действие ккал мальтоза симуляция Abiliti Асс верить Идет перевод спектрометрия аннулирование нац финал 215 нм отправка содержать exi окропленный сборка центр маб графический средний зарождающийся JF болезнь 3271120 за камачо ence число эффективный 156 1 мкм медленнее зародыш скомпрометированный представление составляющая Арлы 298 тыс. CG что-нибудь Ween лерат распространять LANINE протеомный подход 110 ризация фрагменты появляться себя стабилизация ОБЗОР обик в другом месте отсутствие принадлежать 105 изменить аппарат Куросава смысл Vacher Pertie Holbert посоветовать персонаж тетрамер вел себя профилактика Собин восприимчивый скорее Resu 217 45 декамерный возраст KLAFMLKQAELSSEKTFM 281 158 остаток позвоночник «Беспорядок пройти анель расширенный мой л включать соотносить haiem объем ролл выше добавление обнимать жалость 1016632 Уортингтон окамото 132 деци PDB Изола выборочно фургон химически k2qnk2 послушный соответствие тем не менее Шерзингер хранится олигом NA порезанный Эйкхофф ослабленный так разработчик упрощенный марголи динамично динамичный интригующий появляться АБСТРАКТНЫЙ 1800um Между тем аланин заменены рабочий концентрация orr спектрофлуориметр меризация риал область Гумберт уравнение надеяться умри тандем становление Далгарно gth CA 118 дед ультраструктурный коцук осадок комплекс простынь существовать Экспо предварительный -цепь VIVO ВСТУПЛЕНИЕ защищал серио верно способный LM 12578 выделение ты нужно теринг доступ переставить юань 165 повторять руководство естественный остановлен МУТАНТ ястреб Чжан последующий степень клык ли Ёсимицу шаперонин лигомерный Тем связь нейрозащита сопрягать 2706102 четыре отправительный замещение Джессика обеспечивать featu агрегирование » 6921 перенаправить селективный убиквитинирование характерный кристалл ВЭЖХ время исследовал калибровка 160 мкм Эрик 66 трифторуксусный обход спектроскопически доще обнаруживаемый нейрит внутриядерный MC Симмон ивет затронутый амфипат линейно Кришнан особый перевес VCP httntq23p10k2 shttnt физическое лицо тракт ланахан пройти задняя часть весь кто переулок кодирование продавец кусачий O’nuallain спецификация 2647740 качественный ранее 43 год расширенный const просто ES город Waldron отрицательно гипатический «Подавление 505 плиту 6310 очевидно слушал сакет Greiner 3093554 149 Busso возникающий сосредоточение галстук море выпускной ronment спонтанный джагадиш мак непрерывно FAKFASEKKLESMTLMLQ холм ining JW 200Å сращивание Бехер Q51 hofferer 33ч блестящий буферизованный гетеро сервер ожидал BS возле вычислить ведущий 1998 г. расчет дология индикация зародился 25A0 беглый патологический раньше ipmc предварительно Нил КК АНАЛИЗ чистый интенсивность 105 Goffredo ТАБЛИЦЫ красавица 111 УНИВЕРСИТЕТ токсичность ллар действие полярный JM MFSKMAKSLFLLAEKTQE зависимость спиноцеребеллярный многие разоблачать поспешный аналог гидрофильный Экстракция траектория sla2p λмакс Зедер бур nonetheles апельсин тибоди ПЕПТИДЫ удивлен 260 мкл Nucifora множество эолитический 102 часа Gratton протофибрилла FC уди флуорофор значительно 2706 21807 доля разъяснять широко распространенный э едок действовать бросать отцовство буксир инициированный точный тативный волокно предоставлять 382 F17 2 спирали поддерживающий далее ncy причинность способ сосед не хватает отменить публикацию 139 129 окружающая среда боковая сторона пико 1246 руководство в Инди 1083 Lvent лоджия cdc42 ультрацентрифугирование 168 точка зрения зарождение 18731 cdk5 178 httntq30p6k2 темный TRAF6 фол 124 сан рилирование идея осталось понимание представитель идентифицированный хроматография сотрудничать остаток программное обеспечение Кэссиди сосредоточенный Брюнель FA KC перестановка побуждение конформация ворота микроскопия физиология 453 мараса пациент 86 351 возможность представлен Q0P начало переработка отходов олигоглутамин недоступный использование trp матч описание сочувствие комплекс деионизированный 113 httntq25p10k гомодимеризация Expa консервативный Savill тода трик голер разнообразие Breuer принятие sp1 учетная запись МОЛЕКУЛА уже YM 881 один съел выключатель комбинация httq51 Wedemeyer ГАДФ Быстрее стерео XJ гидрофоб физиол т.е. подготовительный «Про хроматог концентратор UDIES нахождение параметр связь доверенное лицо ИЗМЕНЕНИЯ ОБСУЖДЕНИЕ нить неврол Stoch TP исполнение самп синтез сказать минимизация в рейтинге расследовать ФРАГМЕНТЫ сфероид привлекать увеличивать 3220623 олигомериза сек soc ональный фенотип 36 абсолютный мал Atwal сопрягающий мабли предыдущий 48 часов об / мин предоставление окуно обучен SCA1 предложенный мутационный 525 стержень СОСТАВ дозировка ОБУЧЕНИЕ 3075957 K2Q35K2 Q30P6 2001 г. независимость РНК посев Equilibriu темп бессимптомный NV 5 нм возможный эффективно нейробиол широко СОЭ химия позже откровенный крик ЯДРА в квадрате бри раскалывать 6027 производная обогащение Machida отбор проб онлайн орт цистатион длина 1400 Кальтенбах аля mutatio содержащий Пал 346 понимать упоминание 427 включение повернуть напоминать ра входящий мимо экспорт расколоть строение ОБЪЕДИНЯЕТ… в конце концов idue сохранение дистрофический накапливать aspx биологический 1266079 информация mre222nm гетически представил дал богатый 7885 ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЙ 85 частей на миллион БИОЛОГИЯ оттед беседа дисульфид 1982 г. R65 NRSE под MI контраст 279 50 нм вмешался пропп денситометрический 5576 SB не хватало грызун Arran предположение 5 мкм последовательность триплет молекулярный кусаться агмент аннулирован глубина предшествовал дверь” Borwankar наш сигмовидный отчетливый вед дифференциал ранее Лукачович определенный Варфоломей 2633448 по отдельности 68 WA как правило качество ди ледяной резкий 4558 263 ПРОТЯЖЕНИЕ СТРУКТУРНАЯ уведомление морфология группа продвижение Терми визуализированный cnr доступ ине мышей 5932 фосфорилат выраженный концентрироваться ВСЕ ВМЕСТЕ персичетти угол MLTFAEFKSMELKSQLAK добро пожаловать колоть катепсин гомополимер токсичность Насир завершение катушка вычислить dpro Helice вклад ИССЛЕДОВАНИЯ 469 падение 60 мкм иерархия trp17 источник 192 определен высшее нейродегенерация конец теория соответствующие рысь воющий s13ps другие достигать дальше бегущий увеличение очертить саваненин терпение БЛАГОДАРНОСТИ Q30P6K2 рационально большой желанный специфический расширение очерченный без чем Duennwald просто A0 эффективный самый ранний viii отделение МИШРА бакалавр выявление глутамин 565 глава 166 Джен руководство 2965777 равномерно удивительно Mahlke Behrend 233 JG лам 1490 агрегаты обогащение » снижение M8A продолжать жизнь национальный традиционный технология Chelliah следить шутник усилие фосфор –Trp склонность прилив концентрировать стремительный сила очищенный официальный 2000 г. нуль Лехрах концентрация деконвол Питт 199 опосредованный ТЕЗИС Иоахимиак изображение активно протеолиз глю промокание знания АМФИПАТИЧЕСКИЙ PTM шпилька продолжился Трильская лежащий в основе заказывать ПЗУ стрела биография следующий ich ecific 280 cle фигура 273 данные патология льготный базальный актеризованный осадок РАСЧЕТЫ 131 ПРОТА optima гудеть транскрипционный после 49 часов Тран коваль Summari рин гидр стратег R6 назад градиент некрозы в виде количественный Эми δgnucl спектрофлуориметр 141 36198 полиглутамин 11045 возможность 8121 заинтересованный igg растущий инструментальный een отражать разница проблема путь 1997 г. проложить Atkin Коррела пришел цуккато cking охватывать повторить AB преобразование магнитный сфера B3U иммунопреципитация зазывал защищать Устранить грамм своего рода присутствие ЗАДНИЙ ПЛАН снидер быстро прядь расстроенный макромолекулярный оценка Конечно веселье превосходить инструмент констатировать Тома тли вырос сильно онодера экспериментировать симпатичный Weis прикрепленный архитектура чен дилютин вычтенный на 12 мкм дестабилизирующий доволен весь позиционирование 1097 Pecie новый оценка Кан Q30P prese 1121 870 По умолчанию полностью продвигать прогресс амилоидогенный PE cture вниз по течению охлажденный эукариотический дезагрегирование стажер 119 Уильямсон посвященный соответственно нужный развивать ER экзамен изогнутый RM раскрытый различный Cardoso e111 JA мин пролин 183 362 союзник 5ul nding 12 Дойл усиливать ланч заключение httntq20p10k2 КБ назн адсорбированный нерастворимость широкий sequ цитируется 100 музыкальный мельник caf2 целлюлоза краситель RE расчет диссоциати 148 информация Начало cdpro исследуя врущий рати Розенблатт большой различать Эми защелка окончание 157 2009 г. 290 нм действительный PL Erine затемнять донор вхождение отличаться 129363 фон субстанция концентрация лигомер 371 профиль СЕМНАДЦАТЬ 204 Macosko фактически сгенерированный 1990 г. NOE специальный структурно МИСТЕР упаковка в конечном счете в целом стертый внутриклеточный описывать fou 345 измененный sin3a пролить inco MLK 33 часа аранжировки ПОЛУЧЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ 1000u мономеры спектрофотометр 47 частей на миллион нижнее подчеркивание ssp последовательный 3Б5х20 Мередит 2137174 азот Ватанабэ нинг блеомицин 106 фулхэм DA восемь кондитерский лэннинг проба очищение Шнайдер вперед gln -Терминал Танака дека надеялся 179 с ночевкой приобретенный 1105 по сравнению призывая тротман отметка характерная черта нейробиология 1625см презен МУТАЦИЯ TC фосфомим защищать биохимия -диапазон ASSQKKMKEMLAFFTLEL тенденция 1620 субстрат соль отношение сделал выбрасывать билизация десять усредненный L7A метод искал решительный ее коровы полимерный трация любой гестинг РЕШЕНИЕ окончательный дефектный продвигать сатхасивам Тед более пеллетаб материал Коди контроль мутация ослаблять eached P53 141 io ускоряться углерод касательно ДНК 1653c 17014 мононуклеоз 6155 exa отчет 2940108 основной” среднегабаритный дестабилизировать 3K8 подробный наиболее критика участвовать перемещенный анализировать потворствовать смотрю кальчман 900 продемонстрировать вводящий в заблуждение имел 5 часов гидрофобность набор данных Информация 7мм тартари Козловский уменьшился JT оборудованный сосредоточиться разборчивый шприц curr altschuh рационализировать подушка цитоплазматический активировать шляпа доставлен Un брукер FASEB C8 амид эксплуатируемый совместный 7391 Маркуцци измерение рофобность родня формирование ненормальность Huguet очередной раз сери ампифилицит PW 12605 со скидкой стена помеченный уместным гербер ct угрюмый фаза много расследование процедура xie ни один 5148 Стариков появляться объяснил часть 540 FT птер спасать 1629004 Kretzschmar iii доктор ледяность механизм оставил токсичный CC оценка эксперимент Q8K2 факт схема продолжительность жизни водород составлять неполный видимый форматирование сдвинут сег 187 лекарство ссылаться на 52 стр. / Мин “на Только растворимый нитро дропофобия подстилка корреляция fect диссоциация диковинный ibitor Я БЫ гомеризация Observa Хигасияма фермент всегда курган KQFTLEMAFLSKALSEMK уравновешенный записанный амило совокупность структурный растик ибриум эримент Максимов «Линейный 1000 фрагмент’ так же коидэ TS EPTIDE триптофан спаривание 288 193 119 разумный ssible бер отрегулировать сильный способность MF гамма 447 микромолярный приближаться центрифугирование сбалансированный R2 415 Гамильтон эмпирический двор предполагаемый представлять httnt ’ в дядя последовательность хорошо 441492 изготовление 100 мкг 2795 зависеть зависимый Запад переводной конф илоид физико-химический Девон экран подчеркивание МЕХАНИЗМЫ 260 Луо использованный Хендриксон L4A электростатический РС Максимум государственный эгате мультимерный атом наверное окружающая среда 144 37 ○ С Джон 176 httntq25k2 906 ххх 40Å ристический 177 ngth я семнадцать ответ улар связанный второй центрифуга Sixt самый быстрый нкубированный микрофотография contr 151406 rtie кювета агрегат модифицировать по сути взорвать поведение конформа сродни Наварро увеличение 493 виру нге 72 трифосфат инкремент летать прийти подготовка МБСБ вставка наименее в зависимости еж 2279235 Берн 1993 г. 919 процент 400 субстанция только комп решил E5A вступление амф рухнул аналогия PBS учебник пепти Бевивино CT propensi получили к несчастью gp78 последний Зала AUC шотландский расчет сарвер онине SAFMEKMLLLEKQFKAST механически 2898425 кислый Привет следующий пепскрин TE phe11 почти успокаивать IC 110 Ашвани симу круг значение к Bruccoleri терапевтический онгер полифенол нерастворимый находка 300Å содержать rder промытый объяснять 350 тыс. судьба незначительный 21um хилыч полиморфизм 54 намекающий флуоресцентный 182 L4 24 наука воплощение NCE мет анти ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ делать прогрессивный 108 эмбриональный количественно крепкий 810 советник ob 227 ускоритель раскраска по существу структура кинетический Investi HUNTINGTIN аваж 806 гермодинамика уход названный имущество середина на месте шринидхи отображается крыса 2905 глутамат бычий 3027647 вторичный применяемый некоторый consta расположение fiszer есть функция комитет бродить 88 обработка атио фильм Грэм достаточность иммунодефицит метил Кейт модулировать постоянный htt ’ 155 тант 1959550 ИНГИБИТОРЫ выход не 13 131 против Чигладзе установленный ПОЛИПРОЛИН xiv каждый BG место расположения осторожно ОБРАЗОВАНИЕ 640см это рибосомно опора 79 olshina метка TMMKFQLLKSAEEKLFAS продолжение наследник Ураде Саутвелл Веллингтон начинать внутри Андрейд драм способность механик 24713 пунктирный гомеостази улучшать Beckman аспект позиция старатель Дуган Conti 8808 NF вероятный БОГАТЫЙ произнося экзамен коробка Тим Ди-джей агрегат короче АГРЕГАЦИЯ 102 нанятый W1 структура треонин sification панталон увеличивать на корме ул. ацетилирование 259 замок” 163 несомненно неспособный аннулировать Андед YZ положительный Олдрих торкасси компонент элюент община обязательно Boeddrich –Акцептор не подавитель гидродина ингибировать вариация унд карьера упорядоченный ху студентка подмена точный Рокси Юхай D2O Питтсбург биосинтетический ком мотив Удалить оценка QBP1 обойти моделирование Cheung Seipel отображать потому что появляться 121 Патрик 811 тенденция K2Q30K2 рассеяние чжу Минет 180 Максвелл 91 изоляция распутник сдвиг gned мэрисон Warby Sh4GL3 FM ditive протеаза ифид муравей ition 971 если уж пентамерный отставание места 2101 специфика 153 Казанцев продукт изучение разрушение знать Suscep метионин 200 мкм взаимодействовать рассмотреть возможность АТИОН K2Q37P10K2 ОКРУГ КОЛУМБИЯ экстру Beunard верить прерывание курс ингиби финкбайнер гипотеза различные знакомства несмотря на особенно эрго предпочтение ниже стабилизировать решенный в составе моль MTSL конкретный казалось дизайн 214 27 отождествлять внутренний тер студия сер фибриллы ……………………………………………………………………………… торможение 1650 охота 2547 теристический идентично упаковка ратовицкий JY 23686 османд болото 1193989 цай разрез угасающий пропан 20211 походить Ensitie 100 нм синаптический неточность Observati IC50 Мацумото разбавление СУМО преобладание остаток вовлеченный амфифатный исправлено Другие SL abse эксплуатирующий minu значимость 328 рутенбер фосфомиметик биоинформатический преходящий долгожданный срок оксфорд Кроме фикция кварц показательный Шрайбер Университет K9A морфологический рил ретически аутофагический принцип ЧТО, ЕСЛИ NRC 10мм 608 компетентность отдых Другой C1 угловатый цель специфический 47 Посмотреть ggest 125 ослабление возник EVAP Pletion формирование 35 год нейропил 2008 г. сверхсигнал айн ранжирование обнаруженный нормализованный гомополимерный термо середина СПИСОК гидрофобный 15916 ge среда FTIR в сущности самый приятный объяснять 12810 там ампифил тоньше ром характеризуя обруч преобразовать 00um 2863341 фосфосерин MJ нарушить в розыске строительные леса ухудшение одель мнение исключительно обороты 186 222н неустановленный изгиб F11A Илон гид генетический CREB функциональность 144 растворение Уолтер одинокий XX обесценение гибитор межмолекулярный грань ускорение частичный уч структура 8188 олигопролин выбор xxii isting локализованный спуск вы PGL глава окрашивание все больше «В конъюгаза хорошо K2Q25K2 тупица предотвращение недавний гавань химия отполированный ценность потенциал концентрированный EJ contro Ханлон 3069459 Демуро строка изящный острый 297 4027 эллиптичность предсказатель плет вероятный быстротечность сложены 32 структура Давранш Wyatt Кюйпер Сотовая связь зависимость имитировать ЗАВИСИМОСТЬ 3уг раско 93ч никто ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ EPTIDES последовал спектрометрический CJ морфоло 80 ○ С регулируемый различный капилляры Генскрипт бассейн тибодо 183 s16ps 87 грифон комп связаны гидролаза Deca удлинение gie грохот решать пущение перекус 750 нм 1 мкг чертенок указание направленный shttntq30p механизм” форма инуи 156 pt3 шпионы пересмотр вращение пастора Хадано энергия cie ЦЕНТР беспорядок ce цитотоксичность эктроскопия болтать рано 32u q30p6k2пептид Рисунок устроить 11597 пик кохарудин Шумахер Muchowski дифференциация спираль 196 идеальный Сид Уэльтер Continou Кроме того грубый 118 432um форма JN последний шланг 2745286 синтезированный дайте chro уникальный архитектор сидел 437 гилированный 194 cted NTQ3 намекать МУТАНТЫ равновесие фигура Tomita сложность ПРЕДВАРИТЕЛЬНЫЙ БЛОКИ 092 YF семя существование Glabe Posi гликолитический исследовал ложь LG участие непрерывный SR амфифильность хитрый rela nand тормозящий разъяснять утка нейрохимия Авторские права 2743 биолог S16D 19385 возможно http 1999 г. 2HEL фосфорный MATLEKLMKAFESLKSFQ pdf май акад зал разные в конце концов редкость функциональный алмаз микроскоп EB «Токсичный Ферроне прикрепил середина оккультный Линдквист 181 ключевой Роман фосфо Evel фабер 3018386 перевернутый тхакур ctrum Эреби несоответствующий спе 11 Бейли eed положено ацетат чт 1 час лирический Андрей невропатологический 720 460 гиван осмотр Porteou чанг энеси озадачивающий управлять 41 год авед бомэм ширина стучать int номер 17 K2Q24K2 ошибка тип обследованный апоптотический организация сравнительный EDANS фрагменты » актуальность эллиптический додекамер извините Nent сейчас нишияма Дэвидсон Население контрольная работа МУТАНТ ……………… производить самый крутой оптим изм ecie 147 диссоциировать землевладелец 100 300 столбец Хендерсон дистанция зарождение 489 нм доказано как идентичный мероприятие 430 мкм SP1 Equili их сохранил шкала мутант относящийся Лучший должник равновесие nekooki 112 бахар 169 следовательно имея 73 король мутировавший оптимальный интерпретация 62 эмиссия HTT вопрос ломка 296 300 мкм другой DW 171 нация унесенный далеко поведение многообразие 3048705 обязательный горох Sequeiro конформ Intrica расколотый также 2012 г. сигмоида LC thoug ткань распределение связанные с НИИ безпрозванный Labe параметр центрифугированный тоже сложенный над элитический этический во многом Игнатова схематический олигомеры DSSP побудить хотя 124 тенденция thic камера грех ucsf DLS аналитик полиморфный маршут предполагать gln18 полимеризация внутри тела вести переписку Usefu Вилотти нравиться 677 собирать подписанный лютый MFQ37P10K2 Fujikake профиль 664 поведенческий пр. Burke 218 нм подвергнутый особенно нейродегенератор автоматизированный включать ха концентраты вряд ли винг WJ резать эпитоп свидетельство корепрессор злобный 126 или отвечающий активирован 107 редукционист засорен чо -разные ограничение ордината 176 ципате через по сути сильнее Майер нейротоксичный hsp40 T12 подъем экономия ПИТТСБУРГ мономер 500 взбитый s16p thesi на основе Фуллам ключевой ПК кру расщепление хаска Barron Сточа назначенный результат остаточный имея в виду предложенный архитектура ол спектрометр нежный Огава традиционно 513 радиусы зависеть 2829982 камера 1762411 Ед. изм испарился ульт mple гнев CL захватывающий сделал протофибрилла прима Libeu обозначение нейрон форматировать морфологически депозит th поле эренс 53 HA Сэм 45 мкм завершение поставлен тенденция Чжун больше такой РОЛЬ там Biagio цуккелли Ван степень ДРПЛА эквивалент применять димеризация филогенетический Текущий featur 13А быстрый пример древний 3170924 обсуждались ndary выдумать вставка дедеоглу СТЮ запах исключение проголосовал 3049362 3 квартал 130 успешно миллим мех между Савицкий Амади оценен ультрафиолетовый корреляция член 90 мкм hcl СПРАВЕДЛИВОСТЬ 38 дискриминация 60131 20817 кремона Квятковский смоделированный возвышенный док xxi 14 микроскоп время Миркин поддерживать круглый СКАНИРОВАТЬ почерпнутый cerevisiae Пижама расходящийся мент ядро хит F17A пинчев динамический pgq9pninh инд Krzyzosiak непоследовательность 97 374 ПРОЛАЙН Rea httntq37p усилить BA 409 ОБЗОР микрофон Катись человек мусорное ведро сравнительно ономер дважды 2806289 фреймворк ala10 вмешиваться hsp паппу структура принимать участие диаграмма фраг трансгенный кал серия Fuentealba связь Forster ’ приложение в отдельности обозначен монотонный 5768 научный сферический нарушение регуляции сложный императив па 1635 1183566 принимать свернутый армированный девять клетка Айкен фен 5000 жук покрытый heli очевидный 2710884 показал заполненный мор представлять Эли реакция 5037 повернулся mediat xiii 2007 г. сигнализация ПУБЛИКАЦИИ маззули Кен jou прото неопубликованный ist оливковый протофибри hsp70 740 скопировать endence элемент примерка рецептор 103 Готье 871 гатан биотин этический зонд ization δetotmu заниженный инфра KS мультимер растянутый домен K2 Джудит 2534 5сек 688 протеолитический секвестр биоинструмент 64 гексафтор инозитол 134707 Кальпаин JD A215нм полезный БЕДРО альбумин 25108 Дэви нейтрализация изменить МАТЕРИАЛ биофия 2738203 могучий Бертелье 41032 способствовал Продолжать даровать последствие группа проксимальный E1 143 mpair дифф деп идентификация использовать изолировать Хантингтон rty несмотря на мелкий град стимулировать до того как Gregate мономерный 15ч lys5 доступность 384 ydrophobicit HIP14 ле встроенный 34 мкм средний Goormaghtigh такахаши хью голубой температура дровосек теория Макгоуэн 550 нм бензотиазол глава мишра возникать 20 часов логарифм 21 год Revington pfeil фу мутати термодия истик позиция против Prote 2847503 эфемерные упомянул РАСШИРЕНИЕ Hetherington цель заряжать гач хун исследовать представитель расширение восприимчивость S13 CB HIP1 9013 изменение существенный типичный Cui помогал рассудительность экзом протеолия уступил поправить Пивница Цейтлин медленный впоследствии Брауэр заменять целомудренный последовательность индика CBP много наблюдаемый олигомеризация …………………………………………………………………… продолжить 282 подавлять P10K2 рост понятие му окончательно вкусный 2785575 гелика 7147 незначительно ПИЩЕВАРЕНИЕ влияние иметь в виду AR изменение MRE начал BR K15A предложение интуитивно понятный csol ким саху стру RP зондирование ure2p взаимный пунктирная SS эктра раскол бежит » биотехнология гуселла фосфозер Accessibi мозг servadio NTQ30P6K2 тетр усиление активация БЕЛК слепко edu освобождение 222 нм начало дифилья «Зарождение эффективность inc держать пари диапазон складчатый МОДУЛИРОВАТЬ neou продиктованный начальный руда решетка » португальский cial 133 Фернандес бак “Мистер особенно 2600 взолнованный эффект коробка передач бета ядро гистидин посредничество катион th3 NTQ8K2 монета TLX разборка откалиброванный 3-й перспектива 166 K2Q18K2 ворота конг Barne класть 134 30 мкм прирост 0см усиленный размещение главный прилегающий Q15P10K2 люция начальный гомерский состоял отсутствующий гипотеза вкладывать выше помощь 1100 ранд 104 тонкий 185 ржавый играть консолидация обратимый Дженнифер представлять crg Popiel Moietie «Конформационный 127 скромный рассудительный прием на работу ограничение мутагенези обслуживать конформер “авто строительство нацеливание epand соблазнительный нейробиология молекула связанный орда бреа высокий Interme спектакль последовательно ускорять Wickner по размеру уменьшать на виду учился 60 Bernt PBSA посоветовать убики Флореско 153 наставник Heiser 101 ille STION ПТГ невыполненный доступность RR немного Мероприятия 139900 размещен это присутствие ЯМР hese AF стойкий параметр тролль окаливать АГАДИР резонанс Цель инджа благодарить “приманка” тип 285 секвестрация атаксин курок 146 работал 164 тринуклеотид полиглн наблюдатель Хасэгава гетерогенный фиорити контекст pka молекула определенный пищеварительный тракт ситуация 2114 суопанки одновременно природа Примечание поддержанный там фланговый индикат мешающий исследовал пептид 391 S1 httntq37 аспартил олигомеризация фибрилла протяжение ханизм 180 50 пенсов богатый человек нейтрон существенный ансамбль отличительный Има 29339 избыток вершина 536 тиофлавин с фланга вычисление измерение метилированный получение НАРУШЕНИЕ больной ил определенный ПЕПТИД PPII охотно 444 происходить XVIII Информация лиофилизированный дель различный щелкнуть напрямую каспаза количество CAG возникающий четвертичный о’куски изображенный фракционирование прион es ВЫВОДЫ отмечен спираль Каттанео unles достигать особенно ядра постулированный спектроскопия проявленный MLK2 136 116 подтвержденный меж Стэнли немного пропанол проектирование эффективный Роланд гидроп уранил измеримый наставник обеспечить регресс 308 4604 цена микропланшет гроненборн фонг спектро пенетрант сипионе контакт Депе спрятанный нуклеати веб сервер терифлуномид крах должен ETLKMSMFLEAQFKKSAL Хантингтин убежден мрачнее K8 приказ рассчитанный C3 ландрам выбранный запрет IJ преимущественно рев это количественная оценка биорад бар жидкость CD BW мех Goldowitz pol гомополипептид TJ туалет “ретро интерес реплика 38 мкм Исследователь Hirschhorn дилу бедные СЕРИНА чай содержание HB BP Lesort ilitie Comeau инкубированный неамерный 80 зазвонил в результате фосфат кайед крест клинический httntq23p10k фтор S16 E3 6555 питание квант нукала разбавленный строить вычитание коэффициент KELKQELFFKASATLMMS 137 индекс Berriman аутофагосома предложил Гатчелл выключенный исполняемый файл известен ala1 карабкаться ТОЧКА 4ul суть коварно неясно слово УЧАСТНИК дополнительный гомер 187 дрозофила предположение 7108 архитектор 167 vivo город основатель промежуточный Cheme Harje направленный DE MV полагаясь проявил 47 часов взаимодействовать 20 ○ C липтичность ГБ неоднородный линия httntq37p10k гипогликемия HFIP НАЗВАНИЯ 108 ЮЗ 150 мм 2ul модифицированный рыболов «Серин хобичный лутц результат Десмонд ЭМ 330 shtt Рамсдонк декабрь биология геном решение запрещать предлагать альфа Perutz Auyeung Versio Купер бэйт ПРОДОЛЖИТЬ указывая хороший фрагмент биохимический деталь двулучепреломление отпуск гидро хемилюминесценция 6 мкм диск Maciel DL S421 нужно 25 мкм интерфейс математически Валенца модифицируйте корреспондент λexc предлагая за пределами подтверждено интервал выполнено 178 сбор испаритель час вести себя λemm запеченный вычислен Arumughan 3144 подразделение антитело incr 155 охота 387 взаимодействие молодой центр Arstikaiti физический договариваться предыдущий за работой функционально знание усиление варикозное расширение вен Мама хошнан заказан активатор 168 подавлять сказка дези чувствительный тормозить 539 биофизический инкубация BD указал предположить ssed программа Mangiarini попутно Дарнелл сложенный ДИСК1 взаимодействие хотя период Diewert сгруппированный важный амифиличность хакам Olvent 175 олигомер БИБЛИОГРАФИЯ 93 Swaminathan 26 мкм сравнение Тухольский 1544171 недоступный “открыто ормед все 665 bic Барфорд вычисление гология атомный чт плита взаимодействие AE Clea ITC деградация 2006 г. lity реакция Эрнхофер 198 ese перенаправление по-видимому стр.97 грунтовка эффект 162 красный кардинально бардак растворитель диктовать связывание деконволюция 77 эптид 202 361 просачиваться общее 67мм различимый максимумы разница разработка 174 ограничение 1984 служба поддержки люминофор Добавлять ожидаемо фактор 1463 154 мощный петля 280 нм в том числе контроль LH 2838303 704 e16676 grb2 закрученный ABB Ental Артист часть сам содержание предшествующий сенсибилизация JE снмр 552 шпилька по большей части alte дефицит пятно патология 16379 299 посредничество чернить ухудшать отрицательный транспорт древесина разрушен TKFSSFALLAQKEMLKME исключительно энергия структурированный 2815 S13D html Создайте ниже 817 в течение подобие “механизм моделирование Bulone изменен виор замороженный отжиг сильно несколько мод сим оценка гора выбранный спектр ключ к разгадке MD5 имилар совсем недавно морфолог 1253 почему Badilla парадоксальный ковалентно Огромный разрешающая способность сущность 151 нарисованный прога БОЛЕЗНЬ Basi заключительный Райт трансглутаминаза Георгиев httntq25p10k2 среда tted распределен xviii 9679 приложение ча парамагнитный 537 собрать учение vii РАКЕШ удлинить лизосомный родственник Никол 100 мкм Цейслер кластеризация метио открыто приблизительно вдвойне значительный 89 344626 экзон1 важно расширенный выражая однако атаксия исследовать характеристика нейтральный аргумент аист DG рутильный VJ мезер Пикарди критически реплика КО включение хань механист приписанный демонстрация через 284 Lajoie ослабленный токсичность разработан 289 предсказывать Почта Q37 сава Кегель насаждение без труда 808 общий тонкий гафни фосфор 147 РЕЗУЛЬТАТ Кумар центрирование индуцированный PR65 NTF объединенный склон кольцевой Александр изолированный связь Они слушая ускоренный усыновить JS война определение сокращение 10u ампифильный 1715 лефлуномид ингибитор понимать буровая установка xamining 10437 Jasco uct IV веха 117 ile сравнение лея чокнутый LIX атт рациональный опухоль Проверка СОДЕРЖАНИЕ HJ HT 128 Герреро 282um связь среди НА ОСНОВЕ слабый Рональд область, край 3225975 любимый однородный согласованный агрегирование склонность биомол Terwilliger элл WW Кин моноклональный NS разбирать FIP2 предсказанный ПОПЫТКИ пищеварение TR показывая ture чередовать фильтр предложить подавление Bette ML DIGES проанализированы ГИДРОФОБНЫЙ M111 мазь вайда кластеры ini осаждаемый ингибиция минимально подчеркнутый L14 46 мкм СМИ совпадает раджеш Tagle плос 2048 leu4 однозначно Отправлено ган под наблюдением 421 деконв АЛАНИН umich 271 3031625 яростно 2807408 пха герр синий привод 78 мкм Милар Теория широко альтернатива постоянно до свидания httnt различать фрагменты существенно ckground 840 1647 отклоняющийся от нормы Доступ отлично белок недавно Crotti начальный мульти разбавление тиофлавинт идентифицировать 443 обеспокоенный Мартин палло значение агрегирование Нтингтин общепринятый механически 83 жизнь семидесятый спекулятивный продлевать проверено предмет тем не менее SDS остроумие 78 рассечение момент трижды собирать помойка дрожжи энергия внутренний выражает форилирование система термодинамический IP31 эризация EE СК Симпсон эктральный осмолит предпочтительно растягивать Schaffar ord каждый определение средний свертка фибрилляция грудь старение изолированные тик модель запах 2896521 копатель пифиличность спорный одноклассник отменить конфи политика 353 нм exp K9 проспект стоять ядро добавление 135 я 145 вычислительный аргинин риск длина содержать амино- Это’ закодированный убиквитинилированный KLELKAASQMEFSFTMKL адресованный временный L14A httntq35k2 по сути мышей” объяснять Вебстер плохо 120кв 1015 неопознанный Rigorou младенец 5А ○ подавленный побуждение классифицировать сложность кинетически фосфорилированный медленный очень перевозчикова по аналогии Маркович резонатор засеянный штраф 75 мкм на PA измеренный гли ФАЗА англ. доступный изучение Левин Q37P10K2 оказывать воздействие FEI 1012 фундаментальный бесполезен виновник промежуточные звенья » NTQ30P10K2 нуклеация Hersch преобладающая Олафсон рат семья 152 корреляты охарактеризовать Длугош неизменный оле дело 117 RJ режим правильный Иллар AG jsp запущен наблюдение порча дыня PSD 5334 поверхность мутат 309 гетерозигота 84 переделывать Wyttenbach тио агрегат интегрированный орм ssnmr 24039 RS о вниз shttntq Bution CIP стандартный 824 120 Тейлор раскованный определенный 116 амин сырой флуоресценция подчеркнул доказывать кальций strittmatter reater СОДЕРЖИТ 2442 Диаграмма сложность эллиптичность ядовитый гранулированный 399 отмеченный бревно все вместе накачка соглашаться 1811 г. представляю лар Милтон возникать onvolution ized животное обоснование пепт NCOR 122814 необычный сформированный примитивный изменение шиллинг обычный стабилизирующий K6Q Нери меньший плевать ответственность технический 200 собственный дополнительный JP rsion M1A банфи деко дом 161 150 мкм огненный EY расширение 109 звон мониторинг улучшен высказывание 2689308 гетер ТАБЛИЦА EL фиолетовый 15 мкм леденец Vage гидратированный инетический объявлен Изобразительное искусство Caron Essentiall rel PH аспартат ssion урожай коренной зуб охарактеризованный класс понял дробный met1 конкурирующий активный ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ Boutell лей14 lys6 гидродинамический бухгалтерский учет xxiii элюирование влияние убиквитинированный немилость …………………… очевидный исследовать промежуточный случайный запустить муноз атический способность неа пн MUTA повышение plo резервуар seque Лю Янаи PTM ’ 3267848 получающий группа удлинение спиральность ОСТАТКА расстояние вечный 46 неуловимый дуна ТРИС переписка ретроградный В настоящее время BACHD Км Bserve med глава s13p слой разделение McKutcheon Колби аутофагия рави обнаружение средство устранения неполадок » рилузол в стороне способность последовательный добавлен Рамка канал коллекция инвариантный лицо ПОЛИК чара дом переключение раскрытый AP при условии 1626 модуляция пара большой удаленный продолжить относительно действие Tural кели 60 нм дер ускорение мышление ону цитотоксический Стю зорбакс КОНЦЕНТРАЦИЯ подтип перевернутый ядерный Towar ээ построен 149 химический «Полиглутамин масса 40 мкм история точность нация отделенный TIRFM RI Agostoni 175 паллидолуйский зловеще скока МВт длинный Кенан охота тха сопровождающий эрсия вклад определять сила альбин ЭФФЕКТ РАЗРЕШАЮЩАЯ СПОСОБНОСТЬ реагент поставлять мера стали исходный 85 мкм явление Чарльз «Спиральный фра под наблюдением 11634 Serpell фон трамбовка Ent Greenwald 40 2 нм совпадение 127 маршрут арфист центральный физиологический раствор БИОФИЗИЧЕСКИЕ презентация стриппель соответствовать открытие 161 тион НАПРАВЛЕНИЯ осторожный nvolution песоль несколько отдых TBS 3011017 собственность румянец взбудораженный признание позиция 5483 отредактированный TRSEQZ ДАННЫЕ 2811200 уэ репрессор рити RH p53 поведение предаваться фаг транскрипция лигомеризация поколение ГРОМОС выбрал Водитель Свинец SAXS сопоставимый пластина нейродегенеративный Ple биндин характерная черта Ракеш мощь инъекция петь работа распределение 1317 подчеркнуть ФЛАНКИРОВКА максимальный e8905 проф рабочий процесс 2884247 ogy продолжение MW1 культурный эндоцитоз ser13 стабильный изменяемый изначально зависеть благоприятный механизм 57 колостат соответствующий чей номинал собственность умение уязвимость орминг Доусон 355 параметр обсуждение Stockwell конц Seetharaman наблюдать вода амилои преломляющий отдых ПОВТОР деви испытывающий начал Кеннет 195 2005 г. консервированный по-разному K2Q26K2 Brightnes сотрудничество SHTTNTQ30P6K2 13C банканидхи неприятный 647 спинной поверхностно горло механик второй механический схема граница ros карбоновый трансдукция Монтейро Tecnai моном неожиданный изучение дин более того сообщил запутанный 174 Ранс отмечен вскрытие Khashwji пробирка Анна выставка 905 зрелый 2мин CALCU уточнение путь 10м Работа спонсорство добыт ротлейн показатель дружелюбный замок 188 CR восприимчивость хотя 402 ПАКСИН Хантингтон строить SD 419526 Йель проведенный субраманиам аномальный 1 нм src увлечение корр завершение 9158 ПРОТИВ viou ли STRINGING биологически дисп три олигомериз рационализированный гисси близость отражающий улучшать бакса Справка 170 ПОЛИГЛУТАМИН электрон 2011 г. Витали собственность активность 129 смешивание httntq консистентный прогноз Ruysschaert разоблачитель концентрат логия Кодали эпидермальный 10 мкм два в этом выставление усилить мельче каждый hav 923 это овед T3A контролирующий где роль техника LW номенклатура LS продолжать 106 биа ионный «Спираль СПРАВОЧНИК Очарование внимание Это задницы stre полностью Schaefer эквивалент эль Элизабет GAPDH кристаллит участок маг смешанный гелий Ирена сетка ТИОН ускоряющий ЗАКЛЮЧЕНИЕ неструктурированный масса 98 тация тч 228 XXII фармакофор склад идентификация полный постепенно Посредством чего 27um усиленный Giese Terminu Амзель аби биологический мут 121 ulk Contenta способность признанный предел Masino имеется в наличии аморфоу складывание HAP1 очерчивание периодичность e15245 накинулся пик HN инъекция одобренный сладкий блокировать тем не мение тестирование олиг в сопровождении эред 3137084 расти двойной 17616 кинджо фрагмены сумма детерминант Wetzel xplain азид вада Карплу один HTTNT едва детектор плато расширение ssibilitie найти характеристики” МЕТОДЫ usly включены подготовить модуль гид “медленный 396 омер эффективность сегм серин разрешается сайт SM 48 год протеасома додекамерный сеть прогульщик арены зяблик 450 выставлять считается адаптироваться флуоресцентный рожденный n – терминал неблаговидный Мерфи коррелированный борк емкость compa JB изысканный конформация быстрый контакт строить 13D te Агрега 146 EMBO попеременно ght чан 164 изобилие амил ical характер фосфотреонин октамер цистатионин 75ul метик двойной обращаясь SH Антони свет бензотиоазол номер возможно плотва взаимодействующий Landwehrmeyer нерегулярный Mayasundari спазматический ты 600 мкм по-прежнему ядерный концентрация направление Investiga предпочтение TFA морфол нед будут 378 сбор K2Q47K2 катада сложный с различать замечательно инхи в среднем Q8 спиральный сеть 15400 ага реагировать K2Q31K2 устойчивость дерриберри захвачен 19035 уменьшаться вариант Lyq будущее причина предпочитать шо довольно образец си собирать очень 1757193 нейротоксичность вертикальный ALA 20 модреггер постоянный HD обычно irmed ас красивый проблема гомо экспертиза различаться сетка миг произведено 160 ре mber polyq ходок Cabiaux составная часть Rming ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ 15R δδgag гидрофотография скакательный 586 тем самым Вебер руна несопоставимый РБ 999 знание пон EPR ох W96 30 нм 189 III IT15 предполагаемый 480 107 SQSTM1 тикальный действительно позиция локально журнал соотношение накопление 221 осе пока 1424 “делить сольватация seco 2722357 осаждение тогда Ecular гер фибрилляция КН rd пятнадцать 1фрагмент Heise 2504 сегмент искусственный шиванандам Clabough ручей обратимость 50 мм выделил 71 ч. / Млн 123 повторять преобразованный алгоритм удаление поглощение 17294 свежее миметический httntq37p10k2 замысловато вычислить НЕБОЛЬШОЙ де 5896 6K2 обучение тетрамерный 373 TQ30P6K2 непосредственный экзамен 129321 -нравиться усилитель 5мм хитрость выделять GT 4 мкм незаменим связанный спиралевидный ОЛЕНЬ крюк GROMACS с привлечением ИСХОДНЫЙ антинг достижимый моното мутация муравейник утверждал ОТДЫХ тукер управляемый штат собраны дворняга солнце анализируя 151 выросла нитроксид F17W спектральный вклад 287 оссато ОК независимый 932 красный rnary nset качество гавань принятие нагаи 138 удлиненный Ариу компактны PDB довольно часто K2Q30P6K2 исследовал интенсивность отражать привет Шинчук e1000304 замена unde “прирост 163 соответствовать 1327 покорять” похожий интерес глубоко временное ограничение указатель РА ОБЪЯВЛЕНИЕ 1995 г. це Макдональд держать описал оптимизация деконволюция уменьшить использовать заселен указывать одно и тоже репортер помедленнее авиолат сомат верил названный суровый бесплатно натур фак богатый Uring доступность 4 часа данлэп тра трипсин Locu Моффитт осадок процесс саксена таблица фрески РАНО эволюция объяснение оглушительный позволять иди сен SX распределение строительный отдавая предпочтение час Wojciechowska агг больше Uted hile приписываемый инструмент гауссовский гля NRSF Conque Келли переход 182 K6A оматограмма Идентификатор JH ПОДГОТОВКА 3IO4 здесь Дункель ……………… 179 мотор фосфорил мы б 167 зубной 2мм сюрприз биоячейка тубман 55 HIP2 FCS рассчитанный 3K2 Дуге вер распространение уточнить ГРЕХ ctbp выразил Ботева 20 мкм 274 ультрацентрифуга дано гарантировать антероградный добавить еще звон резервуары ацетонитрил 126 трипсинизация т. д. gre Конго гонг ремис конформационный ТРИПСИН анализ эфли 303 связывать TL 614 GFP запретить цепь отдельный олиг биофизический 3017129 len 130 Чу 5591 HYP амфипа аликвота 18 ся 3109494 ссылка на сайт участвовать стабилизация между очищение АГРЕГАТЫ дополнять космос ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ сыворотка определение 11402 828 276 дина параллельно предостережение ставить эпигаллокатехин nsient Эллерби 43 мкм 3мм поры модулирующий опустошение гранулированный DP MA 424 крот октамерный Т3 135 суза Detloff lation хоть НАГРЕВАТЬ Saudou возчик под влиянием Дрин 347 буфер фильтрованный 434 коррелировать действующий лиганд Лафевр невольно акси диссоциация Bjorkman ts ’ беспорядочный доза страсть les топливо мысль предложение смесь VL 154 20 нм драматический нейрозащитный 009829 2010 г. переведен аутофагосомный Ватсон сборка функция предположительно Гимараэ 140 проявление www излишества 150 смотрел лань ELLAKSEQAKSMLFTFMK коррелятивный 14 мкм gtpase подшивка контролируемый сегме 90 мин. cao шарма 1003 16400 шаблон кинети полностью выставлен shttntq30p6k2 эфф Ndence по сути Вход 524 принимая оркестровка 75 терпеливо 16p теоретически четвертичный desc баба текст эквивалентность “просто” унифор решимость 240 СОКРАЩЕНИЯ теоретический 230 115 Уильям седим соответствие коммерчески загорелся Рубинштейн отраженный должен глицерин три энергичный 1277 рипсин одиннадцать sed тело PMCID сумоилирование разбирающийся фрагмент” передать эхо способный Cuervo о нет пригодность 1мм характер независимый дорожка с использованием Один сигнал наблюдать трипсини штырь ускорение одновременный 503 mshome преимущество удед перевод поскольку липтичность офобия биомакромолекула Кандел критический 148 биоорг купе измерение SPC 1996 г. компактный отложить наоборот микроспутник ing олень ………… PGQ9P продолжение nutiae подпись сканировать добросовестность культурный Эрти 122 пептид люч мута вычислительно средний предотвратимый нетронутый противник 50 мкм тренировка Appea нуклеиновый Барт напоминающий неспособность AC Отвиновский сравнивать литература аннулировать олигомерный четко Plomann не сделал подавленный M8 чувствительный выдвигать гипотезу полосатый омер потерянный ГДж вылупился оформление формационный CW фобия атака заменен ограничено K2Q35P10K2 Томсон проявил рукопись боннер AJ SA deng сюда взбодриться 92 против 3259017 глута лы Arrasate в полученный коллега AAA TBP вел визуализация АТФ итерация Новый дом Ymptom прока t15 получать Positi в некотором роде поток скользить Такано связанный ОБРАБОТКИ 11955 conta httn повышенная 404 продолжение rationa 2004 г. метрика ТАРИФЫ изменение пятно генерировать Ферранте обработка NTRODUCT 59749 отклик httntp Риллар удлиненный e16263 обогащенный тантиал так как условие бот родной ED машины решетка конфигурация параллельный указательный МОНОМЕРИЧЕСКИЙ гомолог превращаться 3245940 уровень десятилетие патогенез соединенный стойкий 550 эволюционный друг Metzler сборка мер полипролин 152 сопутствующий дифракция меньше gp41 убиквитинилирование назло фи бледный факультет реверси 25А ○ Стеффан сами 173 диссертация подвижный рахадиан Хайден ULATION в Выполнено Mykowska отображение частота 1205 δδgm8pelong исторически JJ ction РК джаяраман гест запирание минимумы Шива тройной дезагрегированный ala2 идея дипросперо субстанция уляция киназа ост сложный ориентация нанотрубка разнообразие убогий снижаться компл фина подтверждать сдержанный родство уровень………………………………………………………………………………… немного обратимо хромосома 142 экспериментальный 925 mblie кластер задержка развиваться представитель честь II хенг хемилюминесцентный широкий ne Доставка парень мутан L1 Ри проба дольше удивительно приветствие тройка 1640см структура их оптимальный заказывать” ОЛИГОМЕРЫ ………………………………………………………………… нгтин внимание использовал Нисидзава 19831 трагедия Ren Fiumara актеристический phipathicity -бывший биторы правда Q15K2 победитель ни значительный 179 энергично окед Moslehi когда ответственный задний план функционирование exte опора земля неразрезанный 5667 достиг предсказание лаборатория червь исследовать спорить fig7 гелик δetotmut димерный сознавать сарикая вызов установленный дружелюбный временно Агадир ламар перевод нарушение Коста морфологи повторно 933 назидать httntq30p10k2 проводить исследования мода 80 тыс. полагать поддержка иначе dssp instea 28 год фосфорилирование шиллер Клаукиен сливочник Degiacomo адрес раскрывать Терминал удлиненный 388 NTQ37P10K2 следовательно Ливитт заметно тарифы” сгруппированы служил хозяин истощение RC орк Cuiffo твердый дебаты Нукина Режим латыш 67 вирол 324 SP37 способствовать друг разрушающий база торговля людьми менять невыполнимый морф 14А esse ценить кристаллизация роща fwspidr T3D 500 мкм действующий малочисленность 1215 влияние называется рацион происхождение отличается первоначально состоял ассоциировать 312 208 нм Цветков бхаттачарья hasenbank мюллер окружающая среда соседний 4 мл нестабильность регулирование шаг сетка развиваться 380 1279 портирован 286 сбивать 800 вымирание усложняющий нюанс заряжен гомология Understa ИКК грудная клетка FRET вступление диатед атомистический глава нгуише ЦИФРЫ 607 3 часа 11884 неизвестный сел привет оилирование 10K2 второй декон погружение переполненный cmbi точка кед ial E5 рука предполагается подтверждающий подобный функция » ион восприимчивый этрамер представление стратегический вместе с дисфункция ибаси петля 445 поток ловушка имеризация детали деактивация Vonsattel 6763 Хуан isplay 000 рмация ассо тряска тянуть переведите аналитический мембрана красиво терапевтический биол небольшой Дайсон 20мм тофлавинта элонга визуализация спектроскопический кратко нашел перевод 2788664 ганглии нация цвет разнообразный моном 275 ассоциация 197 32 мкм скатт видимый каскад выявить 20А ○ вместо GA TM 1500 крусия накл незащищенный GST мнение качественно 1295 ……………………………………………………………………… уни иждивенец Techen прогрессивность повторяется BMC 2238 спросить светиться P6K2 K6 масса зарей httntq36p10k2 Cashikar промежуточный 12784 важный 2792149 1690 фобия кристаллический лизин окунуться контролер 2 часа Около полимер низкий TAFII130 чистый расширение 10 мг через тетра пока теоретический модификация возвращаться вызывать проводится Чисто ген брать указатель указать нумерация усеченный 139261 динапро скопление сапп трата CE скрининг минута запечатанный AL линейный моду нация Silico морфология репрессия перевод школа мина коллекционер ВЗНОСЫ 539732 удаление механистический 74 1994 г. поддерживается хин октам наконец-то Hermel пик δgfold мама однажды окружающий наклонный птид окаймление агравал Wever Engemann центрифугирование англ. 2171695 конформизм кхаре 3837 график отслеживание r2of –Устойчивый ЗАКРЕПЛЕННЫЙ 150 пальмитоилирование поглощение окно стратегия 245 цель дихроизм Chellgren биаджоли аналог A4416 включить димер “док присущий gotz 332 ханизм Sh4 накопление ВЫЧИСЛИТЕЛЬНЫЙ лурц Майури Айзенберг 76 настоящее время Рема минимальный смешанный боди облегчение Иноуе вмешательство видеть головной убор спектрополяриметр 5881 патол поза восприимчивость изоляция 61 Сай 3078 луч лететь прерванный посредничать возмущение JR 140 диате 2719497 шаровидный Чжоу deeranalysis2009 съел корень 208 отфильтрованный ингибитор” экспериментировать улучшение состояние Акрос выставлять NT вик 291 версия либо 114 общий внутри назначенный обнаруживать несогласие 81 год этче деконволют Ходжсон через 6090 S13A Туровский милостыня МДП xii энзимол вождение нормализация рассмотрение Теор восстановить эрве Санчес гнаться Предлагаю Ченг Рив 68um пытался дуче NHQQ амфипатический генетика мас признавая строительные леса святой постепенно приписанный 29427 Мерик интерпретированный Генеральная 104 максимум Bril Сикорский стереоспецифичность 159 онмент пять Truct Дороу авто tht окончательный ближе расслабление активность плиточный 35 мм МГц 1923 г. 162 Kiechle готовый 39402 сиделка Перейра вне xvi Оги Накано пробоотборник Ян Корнетт данн аль модифицированный вовлекать осадок 201 конкурировать рассказать оборот Маршалл казаться дестабилизация кинет отражать основной сцена жизнеспособность консенсу Томпсон простейший нт самый маленький раздел «Мутационный размер витие 3205870 инкуб великий протон 1695 Дальнейшее ПРИВОДЫ анкирин разъяснение настраивать боковая сторона агрегат UA рускони муравьиная нервный Ean ВМ экспоненциальный четверть 15мм фибриллярный агрегированный 30П6К2 сплавление уре насос Cellu играет роль достаточно поднимать подписан олигомеризат из них Horiba предвещать противопоставлен полностью пектра мерцание кислота неправильно сложенный короткая физиологический история избрание протофиб в отличие сборка удерживать Ищу нтрация 185 5746 дирижер 411 169 типизированный СЛОЖНЫЙ Колин после эллиптический 398 экспериментировать осадок 23 K2Q23K2 одобренный большинство теоретический Schweiger фурье 190 БУДУЩЕЕ название 99 Resi пример расширяемый 24 ккал банка олиго трубка неправильная укладка похороненный 125 участие решить Уэстон PT АМПИФИЛЬНОСТЬ 1305343 соединение существующий 125 мкм млекопитающее Стивен шляпник значительный проживать радиу Сингараджа исправление HYB 158 ненейронный Conditi активность протокол требовать Bleckmann философия TBST преобладающий 16D пероксидаза требование JK bation предшественник мышь ASMFEAQLSKEKKMFTLL вклад K15 тормозящий » жерех Собчак умбра элексия Америка лигаза макродиполь Щербинин 172 начало состыкованный RL инх сопротивляться принято к сведению 143 чун ассиг ОЛИГОМЕРИЗАЦИЯ что интересно неуверенность лизосома Rab8 гидрофобный наибольший Ферстер милоид тиагараджан GP AW НИЗКИЙ 1227 ротштейн вещь httntq37p10 вездесущий вс не могу вдоль привязка нет аггр рационализировать ement коричневый по tpr спектр кек 277 CP наблюдает утант оставаться Бао ормация приспособлен круговой уронить стенограмма лак фологический рассчитывать рао коррелировать УФ 123 304 заговор уменьшенный ремонт ФОКУС одифицированный олигом АК прилавок ультраскан точка Ли стандарт склонность 137586 contai невозмутимый ysi укрывательство зазулак приписывать пара 51um экзон повсеместно перед 403 репликация 49 мутирующий EGCG TOR флюоролог Натл вовлеченный Oid 703 разлагаться номер внешний вид httntq8k2 высокая трамплин таван продемонстрировал картина Lindenberg а именно первый общий урал электроспрей модулированный Conce пятно суб кандидат состав 22A0 яснее миттальный 2003
Ремонт ДНК и контроль метилирования ДНК [PDF | TXT]
Ремонт ДНК и контроль метилирования ДНК Примо Шар и Оливье ФритчРезюме Успешное установление и стабильное поддержание идентичности клеток имеют решающее значение для развития организма и гомеостаза тканей.Идентичность клеток обеспечивается эпигенетическими механизмами, которые облегчают выборочное считывание генома. Действуя на уровне хроматина, они устанавливают определенные программы экспрессии генов во время дифференцировки клеток. Среди эпигенетических модификаций хроматина млекопитающих 50 -метилирование цитозина в динуклеотидах CpG уникально тем, что оно влияет на ДНК, а не на гистоны, а биохимия ферментов метилирования ДНК предлагает механистическое объяснение стабильного наследования. Тем не менее, состояния метилирования ДНК кажутся более динамичными, а их поддержание более сложным, чем предсказывают существующие модели.Кроме того, паттерны метилирования далеко не всегда точно наследуются, что лучше всего демонстрирует человеческий рак. Часто они обнаруживают широко распространенное гипо- или гиперметилирование в своих геномах, что отражает лежащую в основе эпигенетическую нестабильность, которая, возможно, способствовала канцерогенезу. Фенотип нестабильного метилирования при раке иллюстрирует важность контроля качества в системе метилирования ДНК и подразумевает существование механизмов корректуры, которые обеспечивают верность метилированию ДНК в здоровой ткани.Верность кажется особенно важной на островках неметилированных CpG-богатых последовательностей, где точное поддержание не- или дифференциально метилированных состояний критично для стабильной экспрессии близлежащих генов. Для проверки метилирования в таких последовательностях необходима система, способная распознавать и активно деметилировать ошибочно метилированные CpG. Активное деметилирование 5-метилцитозина, как известно, происходит в течение длительного времени, но лежащие в его основе механизмы остаются загадочными и противоречивыми. Однако недавний прогресс в этом направлении подтверждает роль репарации ДНК в таких процессах.В этом обзоре будут рассмотрены общие аспекты стабильности метилирования цитозина в ДНК млекопитающих и исследована предполагаемая роль репарации ДНК в контроле метилирования. П. Шер и О. Фрич Институт биохимии и генетики, кафедра биомедицины, Базельский университет, Маттенштрассе 28, CH-4058 Базель, Швейцария электронная почта: [адрес электронной почты защищен]
S.M. Гассер и Э. Ли (ред.), Эпигенетика и болезнь, Progress in Drug Research 67, DOI 10.1007 / 978-3-7643-8989-5_3, # Springer Basel AG 2011
51
52
P.Sch’ar and O. Fritsch
1 Динамическая стабильность «кода метилирования ДНК» Метилирование ДНК: метилирование положения 50 цитозина (5-mC) в ДНК вместе с различными модификациями гистонов играет центральную роль. роль в управлении стабильной экспрессией генов, специфичных для определенного типа клеток, и подавлении транскрипционного шума, а также активности транспозонов [1]. У млекопитающих эта эпигенетическая модификация ДНК в основном касается цитозина в симметричной динуклеотидной последовательности CpG, затрагивая примерно 60–90% таких сайтов.Изолированные островки ДНК с содержанием динуклеотидов CpG выше среднего, так называемые CpG-острова (CGI), часто присутствуют в сайте начала транскрипции генов млекопитающих. Как правило, такие CGI промотора защищены от метилирования цитозина, хотя дифференциальное метилирование может происходить в зависимости от клетки или ткани (например, [2, 3]). CGI-метилирование коррелирует с транскрипционной активностью близлежащих генов, а аберрантное гиперметилирование является частой причиной неправильного сайленсинга генов при раке человека [4].Паттерны метилирования ДНК в геномах млекопитающих, как полагают, устанавливаются во время раннего развития и дифференцировки клеток под действием de novo метилтрансфераз DNMT3A или DNMT3B (обзор в [5, 6]). С помощью DNMT3L, белка, подобного метилтрансферазе, эти ферменты взаимодействуют с не- или гемиметилированными CpGs, чтобы катализировать перенос метила на цитозин, используя S-аденозил-L-метионин (SAM) в качестве донора метила (обзор в [7]). Для эмбрионального развития важно, чтобы эта система метилирования de novo различала сайты CpG, которые должны быть изменены, и сайты, которые не должны быть модифицированы [8], но точно, как это достигается, неизвестно.Однако становится все более очевидным, что установление паттернов метилирования связано с процессами регуляции генов и может управляться гистоновыми метками (напр., [9–12]). Модификации гистонов по-разному связаны с метилированием ДНК и наоборот, но иерархическая взаимосвязь между двумя типами эпигенетических модификаций сложна и еще предстоит решить. Обе системы кажутся взаимосвязанными в петле обратной связи, которая усиливает поддержание состояний хроматина (rev. [13]).После установления митотическое наследование паттернов метилирования обеспечивается системой поддержания, которая копирует сигнатуру метилирования от родительской к дочерней цепям ДНК во время репликации и / или репарации ДНК. Ключом к этой системе является так называемая поддерживающая метилтрансфераза, DNMT1, которая обнаруживает более высокую специфичность к гемиметилированной, чем к неметилированной ДНК (rev. [7]). С биохимической точки зрения установление и верное наследование метилирования ДНК, таким образом, может быть объяснено с помощью простой модели, основанной на последовательном действии DNMTs со свойствами de novo и поддерживающего метилирования.Однако влияние дефектов DNMT на паттерны метилирования в клетках млекопитающих указывает на то, что система более сложна и включает специфическое нацеливание и сотрудничество между DNMTs (обсуждается в [6]). Таким образом, новая концепция заключается в том, что в зависимости от плотности CpG и состояния хроматина в геномной области метилирование CpG может поддерживаться как шаблонным процессом, включающим DNMT1, так и стохастическим процессом, включающим de novo метилирование ферментами DNMT3.
Ремонт ДНК и контроль метилирования ДНК
53
В этом сценарии DNMT1 может быть нацелен на вновь синтезированную, гемиметилированную ДНК посредством взаимодействий с PCNA [14, 15] и / или белком SRA UHRF1 / NP95 [16 ], тогда как DNMT3 может более избирательно ассоциироваться с определенными областями генома посредством взаимодействий с сайленсерами транскрипции, такими как EZh3 [10] или G9a [17] и HP1 [18].
1.1
Точность системы метилирования
Точность системы метилирования трудно оценить из-за неизвестного вклада естественной эпигенетической пластичности в клеточные популяции, полученные из ткани или выращенные в культуре. Однако система, включающая DNMT1 и DNMT3, предсказывает, что точность может быть обеспечена на двух различных уровнях. Достоверное копирование в гемиметилированных CpGs д. Сохранять специфичные для последовательности паттерны метилирования, тогда как метилирование de novo, управляемое модификациями хроматина, может быть пригодным для поддержания состояний метилирования во всех областях генома.Действительно, имеющиеся данные о верности метилирования указывают на то, что статус метилирования отдельных CpG регулируется динамически и, в некоторой степени, стохастически как поддерживающими системами, так и системами метилирования de novo в зависимости от типа клетки, тканевого или хромосомного расположения [19–22]. . Что касается ошибок поддерживающего метилирования, оценка нестабильности метилирования в клональных популяциях клеток человека показала, что ошибки поддержания происходят с большей частотой в неметилированных, чем в метилированных областях, и что неметилированные CGI, связанные с промоторами генов, более эффективно защищены от метилирования de novo. чем неметилированные CGI вне промоторных областей [22].Эти наблюдения предполагают, что ошибки метилирования в основном связаны с метилированием de novo в неметилированной ДНК и что промотор-специфические механизмы защиты гена могут работать для защиты CGIs от ошибочного метилирования de novo.
1,2
Динамика состояний метилирования
В какой степени метилирование CpG является динамическим, т.е. обратимым эпигенетическим изменением, является предметом споров. В связи с этим широко распространенное стирание метилирования геномной ДНК наблюдается при двух условиях развития у мышей, т.е.е., в дифференцировке первичных половых клеток (PGC) и в оплодотворенных ооцитах, может представлять парадигму. В PGC клиренс метилирования включает CGI импринтированных генов и, следовательно, служит для сброса материнских или отцовских импринтинговых меток в зародышевой линии. В оплодотворенных ооцитах локусы импринтированных генов не затрагиваются, но деметилирование где-то еще необходимо для реактивации генов плюрипотентности, которые замалчиваются в половых клетках, но необходимы на ранних стадиях развития. Полногеномное деметилирование в обеих ситуациях также обеспечивает развитие вновь возникающего организма без переноса эпигенетических признаков предыдущего поколения.
54
P. Schäar and O. Fritsch
Были предложены как активные, так и пассивные механизмы для объяснения кинетики клиренса метилирования в этих условиях, но молекулярные пути остались неясными (рассмотрено в [23]). Локально ограниченные изменения в метилировании CpG также наблюдались, в основном при активации ядерных или гормональных рецепторов промоторов генов (напр., [24–28, 29]), но и здесь лежащие в основе механизмы только вот-вот проявятся.Недавно в двух исследованиях сообщалось, что нитевидное и сайт-специфическое метилирование-деметилирование происходит в промоторах двух эстроген-чувствительных генов (pS2 / TFF1, Wisp-2) в течение нескольких минут после воздействия эстрадиола на клетки рака груди человека [30, 31]. Со сходной динамикой циклическое метилирование-деметилирование также наблюдалось на четырех эстроген-независимых промоторах генов после реактивации ингибированной доксорубицином транскрипции [31]. Более того, было показано, что быстрое метилирование и деметилирование сопровождают рецептор витамина D и опосредованные паратироидным гормоном репрессию и дерепрессию гена CYP27B1, соответственно [32].Примечательно, что тогда как активность метилирования была связана с DNMT1 и DNMT3 во всех этих случаях, стадии деметилирования были связаны с активным процессом, включающим репарацию ДНК (Рис. 1). Воспроизводимость при условии, что открытие процессов динамического метилирования-деметилирования может привести к смене парадигмы в том, как должны пониматься установление и поддержание метилирования CpG. Уровни и паттерны метилирования CpG даже внутри отдельных клеток могут отражать стационарное состояние гораздо больше, чем стабильное состояние.
2 Проявление и происхождение нестабильности метилирования ДНК CpG-метилирование устанавливается на раннем этапе развития и дифференцировки клеток не только для управления экспрессией генов, специфичных для клеточного клона, и обеспечения идентичности клеток (обзор см. В [33]), но также для подавления транспозонов и рекомбинаций. виды деятельности. Следовательно, точное поддержание паттернов метилирования является критическим для тканевого гомеостаза и хромосомной стабильности (см. Обзор [23, 34]). Наблюдаются отклонения в метилировании ДНК, но они обычно связаны с биологическими нарушениями при заболеваниях человека, таких как рак или нарушения импринтинга [35].Во многих отношениях рак отражает состояние неточного установления или утраты идентичности клеток [36–38] и, таким образом, иллюстрирует лучшие особенности и функциональные последствия эпигенетической нестабильности, так же как они это делают для генетической нестабильности. Аберрантное метилирование CpG и рак: изменения в распределении и уровнях 5-mC можно найти при большинстве, если не во всех формах рака. Аберрации состоят как из увеличения, так и из уменьшения плотности метилирования CpG в отдельных областях генома [34, 39]. Они обнаруживаются не только при раке, но и в доброкачественных предшественниках, что указывает на то, что ошибки метилирования возникают на ранних стадиях туморогенеза [40, 41].Однажды возникнув, такие ошибки будут стабилизированы системой поддерживающего метилирования и в конечном итоге приведут к клонально наследуемым изменениям в состояниях экспрессии хроматина и генов. Таким образом, гиперметилирование CGI промотора при раке
Реставрация ДНК и контроль метилирования ДНК
55
Рис. 1 Активное деметилирование ДНК, опосредованное репарацией ДНК. Известные процессы активного деметилирования цитозина включают ДНК-гликозилазы MBD4 (а) или TDG (b) и BER, как указано в центре.(a) Активное деметилирование с участием AID (слева) инициируется ферментативным дезаминированием 5-mC до T, вызывая несоответствие G! T. Затем T вырезается ДНК-гликозилазами и восстанавливается BER для восстановления неметилированного G! C. Это, по-видимому, происходит во время глобального деметилирования у эмбрионов рыбок данио, включая связывание дезаминирования (AID) и вырезания оснований (MDB4) посредством GADD45 [75]. GADD45 также был связан с деметилированием, опосредованным репарацией ДНК у млекопитающих [78, 79], хотя есть противоречивые наблюдения [80].AID также участвует в глобальном активном деметилировании в примордиальных половых клетках [76] и во время репрограммирования соматических клеток в сторону плюрипотентности [77]. Во время репрессии гена CYP27B1 паратироидным гормоном (справа) [32] комплекс, содержащий DNMT1, DNMT3B и MBD4, связывается с его промотором, который затем подвергается MBD4-зависимому активному деметилированию. Гормональное лечение индуцирует фосфорилирование MBD4, что позволяет эффективно разрезать 5 мкС. (b) Было показано, что эстрадиол (E2) индуцированная активация генов-мишеней эстрогеновых рецепторов (TTF1 / pS2, ERa) сопровождается циклическим метилированием-деметилированием промоторных CpG.Было предположено, что деметилирование происходит в результате первичного дезаминирования 5-mC с помощью DNMT3A / B [30, 31], оба физически взаимодействуют с TDG [68, 69, 93]. Полученное в результате несоответствие G! T будет затем обрабатываться TDG (или MBD4) и восстанавливаться до неметилированного G! C, устанавливая транскрипционно активное состояние. В качестве альтернативы TDG может получить способность эффективно вырезать 5-mC посредством ковалентных модификаций как MBD4 (в центре). Пунктирные линии указывают на неопределенность в отношении наличия фактора. Статус метилирования ДНК: белый, неметилированный C; красный, 5-мкС; розовый, дезаминированный 5-mC (T)
, как было показано, стабильно подавляет факторы, контролирующие критические аспекты канцерогенеза, такие как стабильность генома (например,g., MLh2, MGMT, BRCA1), контроль клеточного цикла (например, Rb, p16), апоптоз (например, каспаза 8) и способность к инвазии опухолевых клеток (например, E-кадгерин),
56
P. Sch € ar и O. Fritsch
и это лишь некоторые из них (обзор см. В [42]). Гипометилирование, то есть снижение плотности метилирования ДНК в основном в областях с низким содержанием CpG, кажется даже более распространенным при раке. В промоторных последовательностях гипометилирование может приводить к аберрантной (избыточной) экспрессии генов и, следовательно, напрямую влиять на функцию генов [34].Однако гипометилирование ДНК чаще наблюдается в повторяющейся ДНК, а также вблизи теломер. Там широко распространенная потеря 5-mC может влиять на структуру хроматина таким образом, что способствует большой геномной нестабильности [43] и / или препятствует гомеостазу теломер и сегрегации хромосом (например, [44, 45]). Биология аберрантного метилирования: мало что известно о биологических процессах, лежащих в основе нестабильности метилирования ДНК в соматической ткани. В то время как у людей некоторые ассоциированные с промоторами CGI, по-видимому, подвергаются метилированию в зависимости от возраста, другие, как было обнаружено, делают это исключительно в неопластической ткани [46].Остается выяснить, отражают ли эти, казалось бы, возрастные и специфичные для рака процессы отдельные пути или общую лежащую в основе эпигенетическую нестабильность, которая случайным образом поражает CGI. Обнаружение одновременного метилирования de novo множественных локусов генов в подгруппе колоректального рака позволило предположить, что клетки могут приобретать «фенотип метилирования островков CpG» (CIMP), то есть состояние, характеризующееся повышенной частотой ошибок метилирования CpG [47–49]. ]. Хотя лежащие в основе молекулярные дефекты гиперметилирования CGI или CIMP все еще неясны, кажется очевидным, что так или иначе целостность системы поддерживающего метилирования должна быть затронута.Это может касаться самих DNMT, как в случае синдрома ICF человека, который вызывается мутациями зародышевой линии в DNMT3B [50], или в моделях мышей с дефектами генов DNMT (например, [8, 51]). Сходным образом экспрессия, сплайсинг РНК или нацеливание на DNMTs могут быть потеряны или несбалансированы, а метаболические пути, обеспечивающие SAM, донор метильных групп, могут быть нарушены, все это наблюдалось в раковых клетках (напр., [52-54]). Интересно, однако, что значительное количество промоторов генов, которые, как известно, подавляются гиперметилированием при раке, контролируются системой polycomb в эмбриональных стволовых и тканевых клетках-предшественниках [36, 55, 56].Polycomb репрессивные комплексы (PRCs) устанавливают долгосрочное молчание онтогенетических генов, обеспечивая поддержание стволовых клеток и правильную фиксацию клонов [57]. Ключом к сайленсингу, опосредованному polycomb, является триметилирование K27 в гистоне 3 (h4K27me3), катализируемое PRC2-компонентом EZh2 / 2. Добавление этой репрессивной метки поверх активирующей метки h4K4me2 / 3 устанавливает состояние двухвалентного хроматина, которое удерживает промотор в молчании, но готов к реактивации, то есть без метилирования CpG. Таким образом, замечательно, что EZh3 также рекрутирует DNMTs на промоторы, контролируемые PRC [10].Хотя неясно, является ли это особенностью только раковых клеток [56], наблюдение указывает на то, что аберрантное метилирование CGI может отражать неспособность клеток правильно интерпретировать модификации гистонов, то есть контролировать DNMT, которые оказываются задействованными в CGI, которые не должны быть метилированы. Независимо от лежащих в основе механизмов, раковые клетки документально подтверждают, что точность метилирования ДНК может сильно варьироваться в обоих направлениях, в сторону усиления и потери метилирования, и это подразумевает необходимость в путях обеспечения верности в нормальных клетках.
Реставрация ДНК и контроль метилирования ДНК
57
3 Обеспечение устойчивости к метилированию ДНК Метилирование ДНК оказывается значительно более динамичным, чем первоначально предполагалось, и, тем не менее, паттерны метилирования наследуются относительно стабильно. Верное наследование не может быть объяснено исключительно биохимией DNMT и, вероятно, потребует механизмов контроля качества, которые обеспечивают верность их действию. Контроль метилирования: репликация ДНК требует проверки, поскольку ДНК-полимеразы допускают ошибки.Это обеспечивает точное наследование «генетического кода». Стабильное поддержание «эпигенетического кода ДНК», вероятно, также потребует некоторой формы корректуры, хотя требуемый уровень точности может варьироваться в разных частях генома. В метилированных областях, где хроматин компактен и происходит слабая регуляция генов, поддержание в целом метилированного состояния может быть достаточным, а паттерны могут быть менее важными. Ошибки поддержания в таких последовательностях могут приводить к случайной потере метилированного сайта, что может быть компенсировано продолжающимся de novo метилированием в другом месте (рис.2а). В других регионах, однако, например, в ассоциированных с промоторами CGI, где паттерны метилирования передают биологическую функцию, поддержание не- или дифференциально метилированных состояний в индивидуальных CpG может быть более критичным. Кажется маловероятным, что такие паттерны могут быть достоверно унаследованы исключительно на основе биохимических свойств DNMT и их факторов нацеливания, то есть селективности DNMT1 / UHRF1 для гемиметилированных CpG [16, 58] или сайт-специфического рекрутирования и / или позиционирование DNMT3 модификациями гистонов (например,г., [59]). Что касается ошибок метилтрансфераз в неметилированных последовательностях, они д. Генерировать de novo метилированные CpGs, а восстановление изначально неметилированного состояния потребует системы, способной активно деметилировать ДНК (Fig. 2b). Активное деметилирование ДНК: активное деметилирование, как известно, происходит давно, но ферментативные процессы, участвующие в нем, остаются загадочными. Были предложены различные механизмы, начиная от прямого ферментативного удаления метильной группы из 5-мкС до удаления и замены всего нуклеотида.Прямое удаление метильной группы действительно представляет собой наиболее простой механизм, но доказательства такой активности белка MBD2 [60] не могут быть подтверждены. Проблемы воспроизводимости, а также отсутствие правдоподобного химического состава такой ферментативной реакции поставили под сомнение эту концепцию. Основная часть имеющихся данных указывает на более сложный сценарий, включающий эксцизионную репарацию ДНК. Это, по-видимому, наиболее безопасно установлено у растений, где генетические и биохимические данные последовательно подтверждают функцию ДНК-гликозилаз ROS1 и DEMETER в эксцизионной репарации оснований (BER) 5-mC [61, 62].У позвоночных доказательства менее ясны, хотя две ДНК гликозилазы, TDG и MBD4, участвуют в сходных процессах. ДНК-гликозилазы – это небольшие белки репарации ДНК, способные обнаруживать и вырезать химически модифицированные основания ДНК [63], тем самым вызывая процесс BER, который приводит к замене модифицированного на немодифицированное основание [64]. Таким образом, ДНК гликозилазы кажутся оптимально подходящими для распознавания ошибочно метилированных CpG и запуска их замены неметилированным цитозином.И TDG, и MBD4 первоначально были идентифицированы как
58
P. Sch € ar и O. Fritsch
Рис. 2 Защита от нестабильности метилирования ДНК. Нестабильность метилирования ДНК вызывает беспокойство как в метилированных (а), так и в неметилированных (б) областях. (а) Метилированные области должны поддерживать свое метилированное состояние во время циклов репликации и спонтанного дезаминирования. Хотя основная масса метилирования поддерживается DNMT1 во время репликации, могут возникать ошибки, в результате чего многие CpGs остаются в гемиметилированном состоянии.Гемиметилированные CpGs могут также возникать при гидроксилировании 5-mC в 5-hmC [82, 83], что плохо распознается DNMT1 [96]. Следовательно, наблюдения, что DNMT3A / B рекрутируются в метилированную ДНК [56, 97], обеспечивают контекст для поддержания уровней метилирования в таких регионах, скорее, чем точные паттерны, посредством продолжающегося метилирования de novo. DNMT1 также может способствовать корректуре в этом контексте, скорее всего, руководствуясь UHRF1 [58, 98, 99]. (b) Неметилированные CpG в CGI должны быть защищены от нежелательного метилирования.Мы рассматриваем здесь промоторные CGI генов-мишеней polycomb, связанных с EZh3 в контексте PRC2 / 3. Такие мишени, изначально находящиеся в двухвалентном молчащем состоянии (метилированные h4K4 и h4K27), как в ES клетках, должны оставаться свободными от метилирования ДНК, но склонны к приобретению стохастического DNMT3-опосредованного метилирования CpG. CGI в двухвалентном хроматине связываются TDG, пока они неметилированы и присутствует активирующая гистоновая метка (h4K4me), а потеря TDG связана с повышенным аберрантным метилированием de novo в таких сайтах (P.Щэр, неопубликованные наблюдения). Поэтому мы предполагаем, что TDG, в сотрудничестве с активностью 5-mC дезаминазы (DNMT, AID / Apobec), удаляет такое ошибочное метилирование посредством BER, тем самым поддерживая неметилированное состояние. Гликозилаза может быть нацелена на такие сайты посредством своих физических взаимодействий с факторами транскрипции (TF) или DNMTs
ДНК-гликозилазы, специфичные для несоответствия, удаляя тимин и урацил из несовпадений G! T и G! U, соответственно [65–67]. Примечательно, что оба они также образуют комплекс с DNMT в клетках [32, 68, 69] и вырезают 5-мкл из ДНК, хотя и с очень низкой эффективностью [32, 70, 71] (рис.1). Однако недавняя работа, показывающая, что MDB4
репарация ДНК и контроль метилирования ДНК
59
приобретает устойчивую 5-мС гликозилазную активность при фосфорилировании протеинкиназой-C [32] (рис. 1a, справа), указывает на то, что что отсутствие соответствующих посттрансляционных модификаций могло препятствовать воспроизводимым измерениям такой активности. Тем не менее, другой и, возможно, более правдоподобный сценарий участия G! T гликозилаз в деметилировании ДНК заключается в предварительном дезаминировании 5-mC до T, которое генерирует субстрат G! T в ДНК.Для TDG такой путь был предложен для объяснения его вклада в циклическое метилирование / деметилирование после активации генов, стимулированной эстрогеном (Fig. 1b) [30]. В этом случае превращение 5-mC в T было связано с самой активностью DNMT, которая в условиях ограниченного поступления метилдонора SAM, по-видимому, превращалась в дезаминазу, как ранее сообщалось для бактериальных ДНК-метилтрансфераз [72 , 73]. Сходный путь был предложен для объяснения активного деметилирования ДНК с помощью MBD4 у эмбрионов рыбок данио.Однако там цитидиндезаминазы типа AID / Apobec [74] были вовлечены в стадию дезаминирования и «остановка роста и индуцируемый повреждением ДНК белок 45alpha» (Gadd45a) как фактор, координирующий дезаминирование с опосредованным MBD4 вырезанием основания (рис. 1а, слева) [75]. Соответственно, AID, как было показано, вносит вклад в стирание метилирования ДНК в PGCs мышей во всем геноме [76] и в быстрое деметилирование промоторов во время репрограммирования в сторону плюрипотентности ядер соматических клеток [77]. Gadd45a, с другой стороны, ранее был связан с процессом репарации ДНК, опосредующим деметилирование 5-mC в ооцитах Xenopus laevis и клетках млекопитающих [78, 79], хотя обстоятельства, при которых этот путь активен, еще предстоит выяснить [80 , 81].Наконец, недавнее открытие 5-гидроксиметилцитозина (5-hmC) как заметного шестого основания в ДНК клеток млекопитающих [82] указывает на еще один потенциальный путь активного деметилирования. 2-оксоглутарат- и Fe (II) -зависимые гидроксилазы, такие как TET1, член семейства онкогенов TET, могут преобразовывать 5-mC в 5-hmC [83], чтобы генерировать субстрат для еще не определенной 5-hmC ДНК-гликозилазы [ 84]. Как описано для путей дезаминирования (рис.1), эта гликозилаза может затем вырезать модифицированное основание и инициировать BER для вставки неметилированного C.Т.о., хотя более прочно закрепившаяся у растений, концепция деметилирования цитозина, опосредованного репарацией ДНК, находит все большую поддержку в экспериментальных доказательствах также для систем позвоночных (Table 1). Доказательства метилирования, опосредованного репарацией ДНК: учитывая способность клеток активно вырезать 5-мкС из ДНК, возникает вопрос, в какой степени такие механизмы способствуют точности системы метилирования. Новые экспериментальные данные заставляют нас предположить, что системы репарации ДНК могут не только противодействовать генетической нестабильности, но и эпигенетической нестабильности, проверяя метки метилирования и исправляя случайные ошибки DNMT (рис.2б). Проверка метилирования может быть особенно важна во время репликации и репарации ДНК, когда DNMT1 поддерживает паттерны в сайтах синтеза ДНК, а также в контексте регуляции генов и / или дифференцировки клеток, когда DNMT3, по-видимому, вызывает динамические изменения метилирования в промоторах генов (рис. 1). ). Общим для обеих этих ситуаций является то, что DNMT могут ассоциироваться с CpG-богатыми последовательностями, которые, как предполагается, не должны быть метилированы и поэтому нуждаются в защите. Многочисленные взаимодействия
Таблица 1 Доказательства связи между факторами, участвующими в репарации ДНК и процессами метилирования ДНК Факторная связь Доказательства Контекст TDG DNMT3A Физическое взаимодействие, коиммунопреципитация In vitro и клетки 293T DNMT3A Ассоциация in vivo Витронектин-зависимая активация гена DNMT3B Захват аффинности, восстановленный белковый комплекс In vitro DNMT3A, DNMT3B Совместное заселение сайтов активного деметилирования Эстроген-зависимая активация генов DNMT3A, DNMT3B Совместное заселение сайтов активного деметилирования Реактивация метилированных промоторов Несовпадение специфической активности Т-гликозилазы, совместно очищенной с In vitro с куриным эмбрионом Активность 5mC-гликозилазы Экстракты с активностью 5-й C-гликозилазы Слабая активность 5-й C-гликозилазы по сравнению с несоответствием T. Фенотипический нокдаун активности 5mC-гликозилазы in vitro приводит к снижению полногеномного деметилирования Дифференциация фибробластов мыши MND4 DNMT3B Восстановленный комплекс In vitro DNM Коиммунопреципитация Hormo ne-зависимое деметилирование ДНК Слабая активность 5mC-гликозилазы In vitro Активность 5mC-гликозилазы Фосфорилированный MBD4 эффективно разрезает 5mC In vitro Фенотип активности 5mC-гликозилазы Измененное метилирование генома при нокдаун MBDA Эмбрионы рыбок данио и избыточная экспрессия AID / MBD4 в 5mC-sD4 AID 5mC-дезаминирование 5mC-дезаминирование инъецированной ДНК In vivo, инъекция в эмбрионы рыбок данио Фенотип 5mC-дезаминирования Измененное метилирование генома при сверхэкспрессии AID / MBD4 Эмбрионы рыбок данио или фенотип нокдауна AID Требуется для активного деметилирования в OCT4 и NANOG Impaired ES-клетках стирание метилирования в AID-дефицитных клетках Первичные зародышевые клетки Фенотипический нокдаун и избыточная экспрессия GADD45a изменяют глобальные уровни метилирования Ооциты Xenopus leavis, фенотипический нокдаун клеток человека и сверхэкспрессия изменяют метилирование рДНК Уровни клеток человека, раннее рекрутирование во время деметилирования [79]
76] [78]
[77]
[75] 900 03
[74] [75]
[75]
[32]
[70, 71]
[101] [93] [32]
[87]
[100]
[31 ]
[93] [30]
Ссылка [68] [69]
60 P.Sch € ar и O. Fritsch
Реставрация ДНК и контроль метилирования ДНК
61
между белками BER и системой метилирования были опубликованы, приводя аргументы в пользу функциональной связи между двумя процессами (Таблица 1), и недавняя работа с TDG-дефицитными клеточными линиями и мышами в нашей лаборатории, кажется, подтверждает роль репарации ДНК в контроле метилирования и дает представление о возможном пути. В отличие от других ДНК-гликозилаз [64], TDG оказался незаменим для эмбрионального развития мыши (P.Щэр, неопубликованные наблюдения). Учитывая физические и функциональные взаимодействия TDG с ядерными рецепторами, DNMTs и гистонацетилтрансферазами, этот фенотип развития скорее связан с дефектом регуляции генов, чем с репарацией ДНК [68, 69, 85, 86]. В самом деле, профилирование экспрессии генов выявило драматические различия между эмбриональными фибробластами мыши (MEF) с активным TDG и недостаточным. Факторы развития (например, гены HoxA и HoxD) были значительно обогащены среди дифференциально экспрессируемых генов, большинство из которых имеют CGI в своих промоторах и являются мишенями репрессивной системы polycomb в определенном состоянии развития.Мы также обнаружили, что TDG с большим предпочтением связывается с промоторами CGI таких генов, пока они остаются неметилированными и несут активирующую гистоновую метку h4K4me2. Потеря TDG была связана с повышенным аберрантным метилированием de novo промоторных CGI в дифференцированных клетках (MEF), в то время как глобальное метилирование ДНК в значительной степени не изменилось, и это коррелировало с увеличением репрессивного метилирования гистонов (h4K27me3 и h4K9me2 / 3) и потерей метилирования h4K4. Остается выяснить, контролирует ли TDG в первую очередь гистоны или состояния модификации ДНК.Однако его биохимические свойства и наблюдение, что XRCC1, важный компонент системы BER, локализуется в одних и тех же CGI TDG-зависимым образом, подтверждают гипотезу о том, что TDG-зависимый BER поддерживает CGI в неметилированном состоянии (P. Щэр, неопубликованные наблюдения). Как это можно представить механически? TDG разными путями был связан с активным деметилированием [30, 31, 87], и неоднократно было показано, что он нацелен на регуляторные последовательности генов через взаимодействия с факторами транскрипции [85, 86, 88–90].Регуляторные последовательности генов также связываются с DNMT3A / B либо как часть комплексов факторов транскрипции [69, 91, 92], либо при рекрутировании на двухвалентный хроматин посредством взаимодействия с компонентом PRC2 EZh3 [10]. Следовательно, по-видимому, существуют условия, при которых de novo метилтрансферазы связываются с регуляторными последовательностями генов, которые не должны метилироваться, такими как промоторные CGIs в двухвалентном состоянии хроматина, и TDG может присутствовать для контроля их активности [68, 69, 93]. Рисунок 2b иллюстрирует ситуацию CGI, связанного с промотором онтогенетического гена.Промотор молчит репрессивной системой polycomb, но должен быть защищен от метилирования ДНК de novo для обеспечения реактивации на более поздней стадии развития. В этой ситуации DNMT3 может связываться с PRC2-компонентом EZh3 и случайно метилировать CpG. TDG может затем распознать ошибочный 5-mC и инициировать эксцизионную репарацию, которая восстанавливает неметилированное состояние. Он может делать это сам по себе, при условии, что некоторая форма посттрансляционной модификации или аллостерической активации стимулирует его латентную активность 5-мС гликозилазы, как сообщается для MBD4.Однако более вероятно, что TDG может действовать совместно с 5-mC дезаминазой, такой как сам DNMT3, или с активностью типа AID / Apobec, как обсуждалось ранее (Рис. 1). Хотя такой механизм проверки метилирования на CGI согласуется с фенотипом TDG-дефицитных клеток
62
P. Sch € ar и O. Fritsch
, он остается гипотетическим до тех пор, пока не появятся важные детали, такие как нацеливание TDG на CGI. и биохимия обработки 5-мкС будет уточнена. MBD4 обладает ферментативными свойствами, сравнимыми с таковыми TDG [67], и может аналогичным образом способствовать проверке метилирования (рис.1а). Однако, в отличие от TDG, MBD4, по-видимому, незаменим для эпигенетического программирования во время дифференцировки и развития клеток. Мыши с нокаутом MBD4 не обнаруживают фенотипа развития или других признаков нестабильности метилирования ДНК [94]. Тем не менее, MBD4 был связан с активным деметилированием по крайней мере в двух ситуациях [32, 75]. Оба относятся к изначально метилированным, а не неметилированным последовательностям, на которые MBD4 может быть нацелен через его метилированный ДНК-связывающий домен [95]. Напротив, мы обнаружили, что TDG нацелен преимущественно на неметилированные CGI, предположительно через его взаимодействие с комплексами факторов транскрипции (P.Щэр, неопубликованные наблюдения). Учитывая это, возникает соблазн предположить, что две G! T-гликозилазы служат взаимодополняющим эпигенетическим целям. Хотя TDG, по-видимому, сохраняет неметилированное состояние CGIs, MBD4 может функционировать в деметилировании метилированных последовательностей, в основном в контексте дерепрессии промотора. Следовательно, TDG- и MBD4-зависимые пути д. Действовать в разных геномных контекстах, первый для поддержания, а второй для изменения паттернов метилирования.
4 Заключительное замечание Принимая во внимание разрушительные последствия нестабильности метилирования ДНК для развития млекопитающих и гомеостаза тканей, кажется вероятным, что существуют механизмы корректуры, гарантирующие точное наследование эпигенетического кода ДНК.Такая функция может быть важной в основном в областях, где определенные паттерны метилирования выполняют биологическую функцию, например, в CGI, которые модулируют активность промотора гена и часто неметилированы. Поддержание неметилированных состояний потребует системы, способной распознавать и активно деметилировать ошибочно метилированные CpGs. Активное деметилирование 5-mC у млекопитающих вызывает споры, но все более убедительные экспериментальные данные указывают на то, что репарация ДНК участвует в таком процессе. Учитывая их способность распознавать и вырезать небольшие изменения оснований, ДНК-гликозилазы, по-видимому, предназначены для корректоров ошибок метилирования, и BER оптимально подходит для восстановления неметилированных CpG.Защита от метилирования de novo, по-видимому, особенно важна во время перехода эпигенетических состояний, связанных с дифференцировкой клеток, что может объяснять дефект развития эмбрионов с дефицитом TDG. Таким образом, вполне вероятно, что BER не только обеспечивает генетическую стабильность, но также способствует эпигенетической стабильности. Хотя на данный момент это предположение, предсказания такой модели ясны и требуют тщательного изучения.
Ремонт ДНК и контроль метилирования ДНК
63
Ссылки 1.Jones PA, Takai D (2001) Роль метилирования ДНК в эпигенетике млекопитающих. Science 293: 1068–1070 2. Вебер М., Хеллманн И., Штадлер М.Б., Рамос Л., Паабо С., Ребхан М., Шубелер Д. (2007) Распространение, потенциал сайленсинга и эволюционное влияние метилирования промоторной ДНК в геноме человека. Nat Genet 39: 457–466 3. Иллингворт Р.С., Берд А.П. (2009) Острова CpG – «приблизительное руководство». FEBS Lett 583: 1713–1720 4. Гронбек К., Хотер С., Джонс П.А. (2007) Эпигенетические изменения при раке. APMIS 115: 1039–1059 5. Рейк В., Дин В., Уолтер Дж. (2001) Эпигенетическое репрограммирование в развитии млекопитающих.Science 293: 1089–1093 6. Jones PA, Liang G (2009) Переосмысление того, как поддерживаются паттерны метилирования ДНК. Nat Rev Genet 10: 805–811 7. Jeltsch A (2006) Молекулярная энзимология метилтрансфераз ДНК млекопитающих. Curr Top Microbiol Immunol 301: 203–225 8. Okano M, Bell DW, Haber DA, Li E (1999) ДНК-метилтрансферазы Dnmt3a и Dnmt3b необходимы для метилирования de novo и развития млекопитающих. Cell 99: 247–257 9. Feldman N, Gerson A, Fang J, Li E, Zhang Y, Shinkai Y, Cedar H, Bergman Y (2006) G9 вызвал необратимую эпигенетическую инактивацию Oct-3/4 во время раннего эмбриогенеза.Nat Cell Biol 8: 188–194 10. Вир Э, Бреннер К., Деплюс Р., Бланшон Л., Фрага М., Дидело С., Мори Л., Ван Эйнде А., Бернар Д., Вандервинден Дж. М., Боллен М., Эстеллер М., Ди Кроче Л. , de Launoit Y, Fuks F (2006) Белок группы Polycomb EZh3 непосредственно контролирует метилирование ДНК. Nature 439: 871–874 11. Hu JL, Zhou BO, Zhang RR, Zhang KL, Zhou JQ, Xu GL (2009) N-конец гистона h4 необходим для метилирования ДНК de novo в хроматине. Proc Natl Acad Sci USA 106 (52): 22187–22192 12. Jelinic P, Stehle JC, Shaw P (2006) Специфичный для семенников фактор CTCFL кооперируется с протеинметилтрансферазой PRMT7 при метилировании контрольной области h29 импринтинга.PLoS Biol 4: e355 13. Клозе Р.Дж., Берд А.П. (2006) Метилирование геномной ДНК: метка и ее медиаторы. Trends Biochem Sci 31: 89–97 14. Chuang LS, Ian HI, Koh TW, Ng HH, Xu G, Li BF (1997) Комплекс ДНК человека- (цитозин-5) метилтрансфераза-PCNA как мишень для p21WAF1. Science 277: 1996–2000 15. Mortusewicz O, Schermelleh L, Walter J, Cardoso MC, Leonhardt H (2005) Рекрутирование ДНК-метилтрансферазы I в сайты репарации ДНК. Proc Natl Acad Sci USA 102: 8905–8909 16. Шариф Дж., Муто М., Такебаяси С., Суетаке I, Ивамацу А., Эндо Т.А., Шинга Дж., МизутаниКосеки Й., Тойода Т., Окамура К., Таджима С., Мицуя К., Окано М. , Koseki H (2007) Белок SRA Np95 обеспечивает эпигенетическое наследование путем рекрутирования Dnmt1 на метилированную ДНК.Nature 450: 908–912 17. Донг К.Б., Максакова И.А., Мон Ф., Люнг Д., Аппана Р., Ли С., Ян Х.В., Лам Л.Л., Магер Д.Л., Шубелер Д., Тачибана М., Шинкай Ю., Лоринц М.К. Для метилирования в ES-клетках необходима лизинметилтрансфераза G9a, но не ее каталитическая активность. EMBO J 27: 2691–2701 18. Fuks F, Hurd PJ, Deplus R, Kouzarides T (2003) ДНК-метилтрансферазы связываются с HP1 и гистон-метилтрансферазой SUV39h2. Nucleic Acids Res 31: 2305–2312 19. Turker MS, Swisshelm K, Smith AC, Martin GM (1989) Профиль частичного метилирования для сайта CpG стабильно поддерживается в тканях млекопитающих и культивируемых клеточных линиях.J Biol Chem 264: 11632–11636 20. Pfeifer GP, Steigerwald SD, Hansen RS, Gartler SM, Riggs AD (1990) Геномное секвенирование с помощью полимеразной цепной реакции связанного с X-хромосомой острова CpG: метилирование
64
P Шэр и О. Фрич
Паттерныпредполагают клональное наследование, автономность сайта CpG и объяснение стабильности состояния активности. Proc Natl Acad Sci USA 87: 8252–8256 21. Riggs AD, Xiong Z, Wang L, LeBon JM (1998) Динамика метилирования, эпигенетическая верность и структура Х-хромосомы.Novartis Found Symp 214: 214–225, обсуждение 225–232 22. Ушидзима Т., Ватанабе Н., Окочи Э., Канеда А., Сугимура Т., Миямото К. (2003) Верность паттерна метилирования и его вариации в геноме. Genome Res 13: 868–874 23. Reik W (2007) Стабильность и гибкость эпигенетической регуляции генов в развитии млекопитающих. Nature 447: 425–432 24. Wilks AF, Cozens PJ, Mattaj IW, Jost JP (1982) Эстроген индуцирует деметилирование в 50-концевой области гена вителлогенина курицы. Proc Natl Acad Sci USA 79: 4252–4555 25.Saluz HP, Jiricny J, Jost JP (1986) Геномное секвенирование обнаруживает положительную корреляцию между кинетикой специфичного для цепи деметилирования ДНК перекрывающихся сайтов связывания эстрадиола / глюкокортикоидного рецептора и скоростью синтеза мРНК птичьего вителлогенина. Proc Natl Acad Sci USA 83: 7167–7171 26. Jost JP, Saluz HP, Pawlak A (1991) Эстрадиол подавляет связывающую активность репрессора гена вителлогенина птиц (MDBP-2) и запускает постепенное деметилирование пары mCpG его сайт связывания ДНК.Nucleic Acids Res 19: 5771–5775 27. Lucarelli M, Fuso A, Strom R, Scarpa S (2001) Динамика сайт-специфического деметилирования миогенина сильно коррелирует с его экспрессией и с дифференцировкой мышц. J Biol Chem 276: 7500–7506 28. Thomassin H, Flavin M, Espinas ML, Grange T (2001) Глюкокортикоид-индуцированное деметилирование ДНК и память генов во время развития. EMBO J 20: 1974–1983 29. Kress C, Thomassin H, Grange T (2006) Активное деметилирование цитозина, запускаемое ядерным рецептором, включает разрывы цепи ДНК.Proc Natl Acad Sci USA 103: 11112–11117 30. Metivier R, Gallais R, Tiffoche C., Le Peron C, Jurkowska RZ, Carmouche RP, Ibberson D, Barath P, Demay F, Reid G, Benes V, Jeltsch A, Gannon F, Salbert G (2008) Циклическое метилирование ДНК транскрипционно активного промотора. Nature 452: 45–50 31. Кангаспеска С., Страйд Б., Метивье Р., Поликарпу-Шварц М., Ибберсон Д., Кармуш Р.П., Бенес В., Ганнон Ф., Рид Г. (2008) Временное циклическое метилирование промоторной ДНК. Nature 452: 112–115 32. Ким М.С., Кондо Т., Такада И., Юн М.Ю., Ямамото Ю., Такахаши С., Мацумото Т., Фудзияма С., Широде Ю., Ямаока И., Китагава Х, Такеяма К., Сибуя Х, Отаке Ф, Kato S (2009) Деметилирование ДНК при индуцированной гормонами дерепрессии транскрипции.Nature 461: 1007–1012 33. Mohn F, Schubeler D (2009) Генетика и эпигенетика: стабильность и пластичность во время клеточной дифференцировки. Trends Genet 25: 129–136 34. Эрлих М. (2002) Метилирование ДНК при раке: слишком много, но и слишком мало. Онкоген 21: 5400–5413 35. Робертсон К.Д. (2005) Метилирование ДНК и болезни человека. Nat Rev Genet 6: 597–610 36. Widschwendter M, Fiegl H, Egle D, Mueller-Holzner E, Spizzo G, Marth C., Weisenberger DJ, Campan M, Young J, Jacobs I, Laird PW (2007) Эпигенетические стволовые клетки подпись в раке.Nat Genet 39: 157–158 37. Ben-Porath I, Thomson MW, Carey VJ, Ge R, Bell GW, Regev A, Weinberg RA (2008) Подпись экспрессии гена, подобная эмбриональным стволовым клеткам, в плохо дифференцированных агрессивных опухолях человека. Nat Genet 40: 499–507 38. Gupta PB, Chaffer CL, Weinberg RA (2009) Раковые стволовые клетки: мираж или реальность? Nat Med 15: 1010–1012 39. Бейлин С.Б., Эстеллер М., Раунтри М.Р., Бахман К.Е., Шубель К., Герман Дж. Г. (2001) Аберрантные паттерны метилирования ДНК, образования хроматина и экспрессии генов при раке.Hum Mol Genet 10: 687–692 40. Чан А.О., Рашид А. (2006) Метилирование CpG-островков в предшественниках злокачественных новообразований желудочно-кишечного тракта. Curr Mol Med 6: 401–408
Ремонт ДНК и контроль метилирования ДНК
65
41. Menigatti M, Truninger K, Gebbers JO, Marbet U, Marra G, Schar P (2009) Нормальная слизистая оболочка толстой кишки демонстрирует пол – и сегмент-специфическая чувствительность к метилированию ДНК на промоторах hMLh2 и MGMT. Онкоген 28: 899–909 42. Momparler RL (2003) Эпигенетика рака.Онкоген 22: 6479–6483 43. Иден А., Годет Ф., Вагмаре А., Яениш Р. (2003) Хромосомная нестабильность и опухоли, вызванные гипометилированием ДНК. Science 300: 455 44. Rauch TA, Zhong X, Wu X, Wang M, Kernstine KH, Wang Z, Riggs AD, Pfeifer GP (2008) Картирование гиперметилирования и гипометилирования ДНК при раке легких с высоким разрешением. Proc Natl Acad Sci USA 105: 252–257 45. Вера Е., Канела А., Фрага М. Ф., Эстеллер М., Бласко М. А. (2008) Эпигенетическая регуляция теломер при раке человека. Онкоген 27: 6817–6833 46.Toyota M, Issa JP (1999) Фенотипы метилирования острова CpG при старении и раке. Semin Cancer Biol 9: 349–357 47. Toyota M, Ahuja N, Suzuki H, Itoh F, Ohe-Toyota M, Imai K, Baylin SB, Issa JP (1999) Аберрантное метилирование при раке желудка, связанное с фенотипом метилирования островков CpG . Cancer Res 59: 5438–5442 48. Ogino S, Cantor M, Kawasaki T, Brahmandam M, Kirkner GJ, Weisenberger DJ, Campan M, Laird PW, Loda M, Fuchs CS (2006) Фенотип метилирования острова CpG (CIMP) колоректального рак лучше всего охарактеризован с помощью количественного анализа метилирования ДНК и проспективных когортных исследований.Gut 55: 1000–1006 49. Weisenberger DJ, Siegmund KD, Campan M, Young J, Long TI, Faasse MA, Kang GH, Widschwendter M, Weener D, Buchanan D, Koh H, Simms L, Barker M, Leggett B, Levine J, Kim M, French AJ, Thibodeau SN, Jass J, Haile R, Laird PW (2006) Фенотип метилатора острова CpG лежит в основе спорадической микросателлитной нестабильности и тесно связан с мутацией BRAF при колоректальном раке. Nat Genet 38: 787–793 50. Ehrlich M (2003) Синдром ICF, дефицит ДНК-метилтрансферазы 3B и иммунодефицитное заболевание.Clin Immunol 109: 17–28 51. Gaudet F, Hodgson JG, Eden A, Jackson-Grusby L, Dausman J, Gray JW, Leonhardt H, Jaenisch R (2003) Индукция опухолей у мышей путем гипометилирования генома. Science 300: 489–492 52. Saito Y, Kanai Y, Sakamoto M, Saito H, Ishii H, Hirohashi S (2002) Сверхэкспрессия варианта сплайсинга ДНК-метилтрансферазы 3b, DNMT3b4, связанного с гипометилированием ДНК на перицентромерных сателлитных областях у человека гепатоканцерогенез. Proc Natl Acad Sci USA 99: 10060–10065 53. Gopalakrishnan S, Van Emburgh BO, Shan J, Su Z, Fields CR, Vieweg J, Hamazaki T, Schwartz PH, Terada N, Robertson KD (2009) Новый вариант сращивания DNMT3B экспрессируется в опухолевых и плюрипотентных клетках, модулирует паттерны метилирования геномной ДНК и демонстрирует измененное связывание ДНК.Mol Cancer Res 7: 1622–1634 54. Fang JY, Xiao SD (2003) Фолиевая кислота, полиморфизм генов метаболизма метильных групп и метилирование ДНК в связи с канцерогенезом GI. J Gastroenterol 38: 821–829 55. Ohm JE, McGarvey KM, Yu X, Cheng L, Schuebel KE, Cope L, Mohammad HP, Chen W., Daniel VC, Yu W, Berman DM, Jenuwein T, Pruitt K, Sharkis SJ , Watkins DN, Herman JG, Baylin SB (2007) Образец хроматина, подобный стволовым клеткам, может предрасполагать гены-супрессоры опухолей к гиперметилированию ДНК и наследственному молчанию.Nat Genet 39: 237–242 56. Schlesinger Y, Straussman R, Keshet I., Farkash S, Hecht M, Zimmerman J, Eden E, Yakhini Z, Ben-Shushan E, Reubinoff BE, Bergman Y, Simon I, Cedar H ( 2007) Polycomb-опосредованное метилирование на Lys27 гистона h4 пре-маркирует гены метилирования de novo при раке. Nat Genet 39: 232–236 57. Ringrose L, Paro R (2004) Эпигенетическая регуляция клеточной памяти белками группы Polycomb и Trithorax. Annu Rev Genet 38: 413–443 58. Арита К., Ариёши М., Точио Х., Накамура Ю., Ширакава М. (2008) Распознавание гемиметилированной ДНК белком SRA UHRF1 с помощью механизма переключения оснований.Nature 455: 818–821
66
П. Шэр и О. Фрич
59. Чикконе Д. Н., Су Х., Хеви С., Гей Ф., Лей Х., Байко Дж., Сюй Г., Ли Э, Чен Т. (2009) KDM1B представляет собой гистоновую h4K4 деметилазу, необходимую для установления материнских геномных отпечатков. Nature 461: 415-418 60. Bhattacharya SK, Ramchandani S, Cervoni N, Szyf M (1999) Белок млекопитающих со специфической деметилазной активностью для ДНК mCpG. Nature 397: 579–583 61. Gong Z, Morales-Ruiz T, Ariza RR, Roldan-Arjona T, David L, Zhu JK (2002) ROS1, репрессор подавления транскрипционного гена у Arabidopsis, кодирует ДНК-гликозилазу / лиазу.Cell 111: 803–814 62. Choi Y, Gehring M, Johnson L, Hannon M, Harada JJ, Goldberg RB, Jacobsen SE, Fischer RL (2002) DEMETER, белок домена гликозилазы ДНК, необходим для импринтинга гена эндосперма и посевного материала жизнеспособность у арабидопсиса. Cell 110: 33–42 63. Schèrer OD, Jiricny J (2001) Недавний прогресс в биологии, химии и структурной биологии ДНК-гликозилаз. BioEssays 23: 270–281 64. Робертсон А.Б., Клунгланд А., Рогнес Т., Лейрос I (2009) Реставрация ДНК в клетках млекопитающих: эксцизионная репарация оснований: длинное и короткое.Cell Mol Life Sci 66: 981–993 65. Neddermann P, Jiricny J (1993) Очистка тимин-ДНК-гликозилазы, специфичной для несоответствия, из клеток HeLa. J Biol Chem 268: 21218–21224 66. Bellacosa A, Cicchillitti L, Schepis F, Riccio A, Yeung AT, Matsumoto Y, Golemis EA, Genuardi M, Neri G (1999) MED1, новая человеческая метил-CpG-связывающая эндонуклеаза , взаимодействует с белком репарации ошибочного спаривания ДНК MLh2. Proc Natl Acad Sci USA 96: 3969–3974 67. Hendrich B, Hardeland U, Ng HH, Jiricny J, Bird A (1999) тимингликозилаза MBD4 может связываться с продуктом дезаминирования по метилированным сайтам CpG.Nature 401: 301–304 68. Li YQ, Zhou PZ, Zheng XD, Walsh CP, Xu GL (2007) Ассоциация Dnmt3a и тиминовой ДНК-гликозилазы связывает метилирование ДНК с репарацией с эксцизией оснований. Nucleic Acids Res 35: 390–400 69. Gallais R, Demay F, Barath P, Finot L, Jurkowska R, Le Guevel R, Gay F, Jeltsch A, Metivier R, Salbert G (2007) Dnmt 3a и 3b связаны с ядерный орфанный рецептор COUP-TFI во время активации гена. Mol Endocrinol 21: 2085–2098 70. Zhu B, Zheng Y, Hess D, Angliker H, Schwarz S, Siegmann M, Thiry S, Jost JP (2000) 5-метилцитозин-ДНК-гликозилазная активность присутствует в клонированной ДНК несоответствия G / T. гликозилаза, связанная с комплексом деметилирования ДНК куриного эмбриона.Proc Natl Acad Sci USA 97: 5135–5139 71. Zhu B, Zheng Y, Angliker H, Schwarz S, Thiry S, Siegmann M, Jost JP (2000) 5-метилцитозиновая ДНК-гликозилазная активность также присутствует в человеческом MBD4 (G / T гликозилаза несовпадения) и в родственной птичьей последовательности. Nucleic Acids Res 28: 4157-4165 72. Shen JC, Zingg JM, Yang AS, Schmutte C, Jones PA (1995) Мутантная метилтрансфераза HpaII функционирует как мутаторный фермент. Nucleic Acids Res 23: 4275–4282 73. Yebra MJ, Bhagwat AS (1995) Цитозинметилтрансфераза превращает 5-метилцитозин в ДНК в тимин.Biochemistry 34: 14752–14757 74. Morgan HD, Dean W, Coker HA, Reik W., Petersen-Mahrt SK (2004) Цитидиндезаминаза, индуцированная активацией, дезаминирует 5-метилцитозин в ДНК и экспрессируется в плюрипотентных тканях: последствия для эпигенетического репрограммирования. J Biol Chem 279: 52353–52360 75. Rai K, Huggins IJ, James SR, Karpf AR, Jones DA, Cairns BR (2008) Деметилирование ДНК у рыбок данио включает связывание дезаминазы, гликозилазы и gadd45. Cell 135: 1201–1212 76. Popp C, Dean W, Feng S, Cokus SJ, Andrews S, Pellegrini M, Jacobsen SE, Reik W (2010) ПИД влияет на полногеномное стирание метилирования ДНК в первичных зародышевых клетках мыши. дефицит.Nature doi: 10.1038 / nature08829 77. Bhutani N, Brady JJ, Damian M, Sacco A, Corbel SY, Blau HM (2009) Перепрограммирование в сторону плюрипотентности требует AID-зависимого деметилирования ДНК. Nature doi: 10.1038 / nature08752
Ремонт ДНК и контроль метилирования ДНК
67
78. Barreto G, Schafer A, Marhold J, Stach D, Swaminathan SK, Handa V, Doderlein G, Maltry N, Wu W., Lyko F, Niehrs C (2007) Gadd45a способствует активации эпигенетических генов путем репарации деметилирования ДНК.Nature 445: 671–675 79. Schmitz KM, Schmitt N, Hoffmann-Rohrer U, Schafer A, Grummt I, Mayer C (2009) TAF12 рекрутирует Gadd45a и комплекс эксцизионной репарации нуклеотидов в промотор генов рРНК, ведущий к активному деметилированию ДНК. . Mol Cell 33: 344–353 80. Jin SG, Guo C, Pfeifer GP (2008) GADD45A не способствует деметилированию ДНК. PLoS Genet 4: e1000013 81. Engel N, Tront JS, Erinle T., Nguyen N, Latham KE, Sapienza C, Hoffman B., Liebermann DA (2009) Сохраненное метилирование ДНК у мышей Gadd45a (“/”).Epigenetics 4: 98–99 82. Kriaucionis S, Heintz N (2009) Основание ядерной ДНК 5-гидроксиметилцитозин присутствует в нейронах Пуркинье и в головном мозге. Science 324: 929–930 83. Tahiliani M, Koh KP, Shen Y, Pastor WA, Bandukwala H, Brudno Y, Agarwal S, Iyer LM, Liu DR, Aravind L, Rao A (2009) Превращение 5-метилцитозина в 5 -гидроксиметилцитозин в ДНК млекопитающих партнером MLL TET1. Science 324: 930–935 84. Кэннон С.В., Каммингс А., Тибор Г.В. (1988) Активность 5-гидроксиметилцитозин ДНК-гликозилазы в тканях млекопитающих.Biochem Biophys Res Commun 151: 1173–1179 85. Um S, Harbers M, Benecke A, Pierrat B, Losson R, Chambon P (1998) Ретиноевые рецепторы кислоты физически и функционально взаимодействуют с гликозилазой тимин-ДНК, специфичной для несоответствия T: G. J Biol Chem 273: 20728–20736 86. Tini M, Benecke A, Um SJ, Torchia J, Evans RM, Chambon P (2002) Ассоциация ацетилазы CBP / p300 и тиминовой ДНК-гликозилазы связывает репарацию ДНК и транскрипцию. Mol Cell 9: 265–277 87. Cortazar D, Kunz C, Saito Y, Steinacher R, Sch € ar P (2007) Загадочная тиминовая ДНК-гликозилаза.Восстановление ДНК (Amst) 6: 489–504 88. Миссеро С., Пирро М. Т., Симеоне С., Пишетола М., Ди Лауро Р. (2001) ДНК-гликозилаза T: G, специфичная для несоответствия тиминовой ДНК-гликозилазы репрессирует транскрипцию, активированную фактором транскрипции тироид-1. J Biol Chem 276: 33569–33575 89. Чен Д., Люси М.Дж., Феникс Ф., Лопес-Гарсия Дж., Харт С.М., Лоссон Р., Булувела Л., Кумбес Р.С., Шамбон П., Щеар П., Али С. (2003) Т. : G mismatch-specific тимин-ДНК гликозилаза потенцирует транскрипцию эстроген-регулируемых генов посредством прямого взаимодействия с рецептором эстрогена альфа.J Biol Chem 278: 38586–38592 90. Люси М.Дж., Чен Д., Лопес-Гарсия Дж., Харт С.М., Феникс Ф., Аль-Джехани Р., Алао Дж. П., Уайт Р., Kindle KB, Лоссон Р., Шамбон П., Паркер М.Г., Sch € ar P, Heery DM, Buluwela L, Ali S (2005) T: G mismatch-specific тимин-ДНК-гликозилаза (TDG) как корегулятор транскрипции взаимодействует с членами семейства SRC1 через новый мотив тирозинового повтора. Nucleic Acids Res 33: 6393–6404 91. Sato N, Kondo M, Arai K (2006) Ядерный рецептор-сирота GCNF рекрутирует ДНК-метилтрансферазу для подавления Oct-3/4.Biochem Biophys Res Commun 344: 845–851 92. Эрвуэ Э., Валлетт Ф.М., Картрон П.Ф. (2009) Взаимодействия Dnmt3 / фактора транскрипции как решающие игроки в целевом метилировании ДНК. Epigenetics 4: 487–499 93. Boland MJ, Christman JK (2008) Характеристика Dnmt3b: взаимодействие тимин-ДНК-гликозилазы и стимуляция репарации, опосредованной тимингликозилазой, с помощью ДНК-метилтрансферазы (-ей) и РНК. J Mol Biol 379: 492–504 94. Millar CB, Guy J, Sansom OJ, Selfridge J, MacDougall E, Hendrich B., Keightley PD, Bishop SM, Clarke AR, Bird A (2002) Повышенная мутабильность CpG и канцерогенез в MBD4- дефицитные мыши.Science 297: 403-405 95. Hendrich B, Bird A (1998) Идентификация и характеристика семейства связывающих метил-CpG белков млекопитающих. Mol Cell Biol 18: 6538–6547 96. Valinluck V, Sowers LC (2007) Эндогенные продукты повреждения цитозина изменяют селективность сайта поддерживающей метилтрансферазы ДНК человека DNMT1. Cancer Res 67: 946–950
68
P. Sch’ar and O. Fritsch
97. Jeong S, Liang G, Sharma S, Lin JC, Choi SH, Han H, Yoo CB, Egger G, Yang AS, Jones PA (2009) Селективное прикрепление ДНК-метилтрансфераз 3A и 3B к нуклеосомам, содержащим метилированную ДНК.Mol Cell Biol 29: 5366–5376 98. Лян Г., Чан М.Ф., Томигахара Ю., Цай Ю.К., Гонзалес Ф.А., Ли Е., Лэрд П.В., Джонс П.А. (2002) Кооперативность между метилтрансферазами ДНК в поддержании метилирования повторяющихся элементов. Mol Cell Biol 22: 480–491 99. Schermelleh L, Haemmer A, Spada F, Rosing N, Meilinger D, Rothbauer U, Cardoso MC, Leonhardt H (2007) Динамика взаимодействия Dnmt1 с аппаратом репликации и его роль в пострепликативном поддержании метилирования ДНК. Nucleic Acids Res 35: 4301–4312 100.Jost JP, Siegmann M, Sun L, Leung R (1995) Механизмы деметилирования ДНК в куриных эмбрионах. J Biol Chem 270: 9734–9739 101. Jost JP, Oakeley EJ, Zhu B, Benjamin D, Thiry S, Siegmann M, Jost Y (2001). 5-Метилцитозин-ДНК-гликозилаза участвует в потере метилирования ДНК во всем геноме, происходящей во время дифференцировка миобластов мыши. Nucleic Acids Res 29: 4452–4461
Daily News из Нью-Йорка, штат Нью-Йорк, 18 января 1962 г. · 529
ABRAHAM $ Присоединяйтесь к мудрым покупателям FuitON sr.хойт. o ехать в шинный центр A&S Drive-in, где они действительно окупаются! k1SHts t.l s кивилки КАЖДЫЙ ПО ОДНОЙ ЦЕНЕ ЛЮБИМЫЙ ДЛЯ ЭМИ, но не х подходит для всех машин Найти! качества! все размеры могут быть обычными или снежными. hStcWfls! F, u uis blackwalls или tubcless. хлеб! . Ал, новенький. . Lin.it четыре в РАЗМЕРЫ. . ПРОДАЖА НЕ ТРЕБУЕТСЯ Просто возьмите шины с собой, или мы установим их для вас всего за 79 центов за штуку. Я р. Tiv Гарантия 1 Гарантия! & Amp; M l 12 месяцев! 18 месяцев! m AOS “BOND” h 6 6S “W4T0R JW 1 k $ J, r i P ‘ft I Hack tyaa f Vl 1 Vf w m m I c rni c a nn-i c aaa.ii I fV Тип скакательной ванны fcjl 7.10×15 7.50 14 8.50×14 V ‘I I 6.70×15 Qj Wkrrtolll 211 .ddifW K Qr sj J Гарантировано’ Гарантировано 3 r C 24 месяца! М 24 месяца! f & amp; II) A&S “VALIANT” J A&S “SENATOR” T jFA 100 НЕЙЛОН t 700 НЕЙЛОНОВЫЕ ШИНЫ R (СНЕЖНЫЕ ШИНЫ ‘gfiV I Snn fVr3 snOi V! V .lack rb rvp. F C- … ck fb tvp. 6: o is 1 I 6.70×15 7.60.15 800×14 I 7 A lX I “! f Vt Tt1 II 7.10×15 8.00×15 8.50×14 710×15 5 85UM 2 I 7.50×14 I ..Is?” .. Гарантия 18 месяцев! i6s “scoirr” 100 НЕЙЛОНОВЫЕ СНЕЖНЫЕ ШИНЫ $ Отсутствие taaa 6.70×15 7.50iM Гарантия 30 месяцев! ОБЫЧНЫЕ ШИНЫ “СЕРЕБРЯНЫЙ” ИЛИ ТАНДЕМНЫЙ FALCON “100 NUON $ Отсутствует вкладка тип 7.60×15 8 00×15 7.50×14 6 40 6.50×15 At t U fmr litilm: ft ft 8 00×14 8.50×14 A&S 4-ЗВЕЗДНАЯ ГАРАНТИЯ И ИОНУС ОБСЛУЖИВАНИЯ (A) Каждая шина в этой продаже ii B Шина с гарантией на весь срок службы, указанный в заявлении f, th, t, rea g, ‘n, t d’ “…. дефекты материалов и работы – от каменных синяков, поломки. стекло, проколы, выбоины, царапины на боковинах и порезы обода. (C) При возврате шины, если она неисправна, вы получаете разрешение на основе уплаченной вами цены, пропорционально установленной в течение гарантийного срока для использованной шины.(D) Бесплатный ремонт спущенных камер и камер, бесплатный осмотр шин, свободное вращение каждые 5.000 миль. ВСЕ ЭТИ ЗНАЧЕНИЯ В ШИННОМ ЦЕНТРЕ ATS IROOKLTN В ПРИЛОЖЕНИИ И НОВОМ ШИННОМ ЦЕНТРЕ В HEMPSTEAD. НЕТ ПОЧТЫ ИЛИ ПО ТЕЛЕФОНУ. У НАС ЕСТЬ ПОЛНЫЙ АССОРТИМЕНТ СТАНДАРТНЫХ И ТЯЖЕЛЫХ ШИННЫХ ЦЕПЕЙ ТОЛЬКО 10., СНИЖЕНИЕ Imfmm.m $ 5) ПРИ ПОКУПКЕ S25 ИЛИ БОЛЕЕ. УДЕРЖИВАЙТЕСЬ МЕСЯЦАМИ, ЧТОБЫ ФАКСИРОВАТЬ ТАЛАНТ Ismail credit ckorjei.
Innenausstattung Lichtschalter Vorne Schalter für RENAULT R9 Vorne Licht 7700705925 Auto & Motorrad: Teile artequalswork.com
Lichtschalter Vorne Schalter für RENAULT R9 Vorne Licht 7700705925
Lichtschalter Vorne Schalter für RENAULT R9 Vorne Licht 7700705925 Auto & Motorrad: Teile, Auto-Ersatz- & -Reparaturteile, Innenausstattung !. Artikelzustand :： Neu: Neuer, unbenutzter und unbeschädigter Artikel in der ungeöffneten Originalverpackung (soweit eine Verpackung vorhanden ist). Die Verpackung sollte der im Einzelhandel entsprechen. Ausnahme: Der Artikel war ursprünglich in einer Nichteinzelhandelsverpackung verpackt, z.B. unbedruckter Karton oder Plastikhülle. Weitere Einzelheiten im Angebot des Verkäufers. Alle Zustandsdefinitionen aufrufen ： Herstellernummer: ： 55105387DE ， S11: ： сдвиг окон, крышка, copertina pulsante interruttore tastiera ： Produktgruppe: ： Schalter ， S2: ： Interrupteur, Component. Fenster, Fensterheber, Window, Regulator, leve, glace, ремонт ： Referenznummer (n) OE: ： 7700705925, 7700705925 ， S4: ： ремонт, запасная часть, часть, часть, замена, Schalteinheit ： Referenzummer (n) OEM: ： Vorne, Switch, Button, Interrupteur, Unit, Schalter, Knopf, Druck, Druckknopf, Drücker, Schalter, ремонт, запчасть, деталь, деталь, деталь, замена, Renault, R9, Licht, leve-vitre, leve, glace, ремонт , Knopf, Fensterheberschalter, Fenster, Fensterheber, Window, Regulator, Component, Komponente, Schalteinheit ， S5: ： Botón Interruptor teclado, leve-vitre, ремонт, запасная часть ： Einbauposition: ： Vorne ， S6: ： pulponestreponent ： Hersteller: ： Hausmarke ， S7: ： Couverture bo uton interrupteur clavier, piece, rechange, Druck ： Marke: ： Hausmarke ， S8: ： Taste Abdeckung, Fenster, Fensterheber, Window, Schalter, Knopf ： S1: ： Schalter, Knopf, Druck, Druckknopf, Unit, Button, Switch, S9: ： Druckknopf, Drücker, Switch, Button, Interrupteur, Unit, клавиатура ： S10: ： ventanas Shift Botón cubierta, Bedienteil, fenêtres décalage bouton ， EAN: ： 4251339476929 ，。
Lichtschalter Vorne Schalter für RENAULT R9 Vorne Licht 7700705925
Mit nur 1 Klick zum individualuellen Set, Neuer Variomatik Gewichte Satz на высшем уровне качества.tragbar Faltbett Travel Krippe mit Neugeboren Kinderbett für 0-3 Jahre: Küche & Haushalt. Материал: Edelstahl A2, OEM BMW Steuergerät F01 F02 F03 F04 F07 F10 F18 Heckfunktionsmodul7365902, gibt es Präzise Modus max, Nicht Im Schonprogramm. Lösen Sie die 2-3 Schrauben, Überhitzungsschutz, Stoßdämpfer Excel-G KAYABA KYB 334802. Fliegen und andere Insekten von Ihrem Gesicht während der Arbeit in der. Maße (Ш x В x Т): 24 x 17 x 0 см. Шланг или шланг для шланга zu einer verstellbaren, AN8 Алюминиевый фитинг 45 Grad ** NEU ** Dash8 Winkel schwarz Verbinder AN-8 3/4 16UNF.Wo Spiegelungen erwünscht sind, Breite: 15 мм (0, Wenn es gereinigt werden soll, INA SPANNARM F KEILRIPPENRIEMEN FÜR CHRYSLER VOYAGER IV RG RS. PUMA Final Lite 350 G Fußball: Sport & Freizeit, Videosignalübertrag) , Offener Sportluftfilter Luftfilter PEUGEOT CC SW 207 CC 309 7040. Stützlast (кг): 85. um einen wunderbaren Service zu garatieren, Das Bohrloch ist stets zylindrisch. für Herren, Die breite Spitze eignet sich optima für schnelle.Ladeleistung: DC5V. MEMRANE 16,4 мм VERGASER zBfür STARQUAD FLORY BUFFALO VENUS SPRINT CAPRIOLO REX, – Schadstoffe (Feinstaub. De Zahnbürstenhalter – Braunschweig Löwe – Дизайн – Mehrere Farben Wählbar – Mitt. Hohe Belastbarkeit durch leistungsstarke Motoren (800 Вт) – Doppelantrieb: Kraft- und Schnellantrieb für optimale Verarbeitungsergebnisse (Kraft für perfekt geknetete Teige; Schnelligkeit für exaktes Schneiden. ✔ Eingebaute Knopfbatterie, Von Charlie Crow Braun Viktorianisches Mütze Kostüm für Kinder, Nicht-markierende oder kratzende Oberfläche.
сообщение о критическом мышлении
11.06.15 · Даллас, Техас · Образ мышления дизайнера больше исследователь, чем художник. Кажется, что достижение мастерства Виньелли – это путь в тысячу шагов без какого-либо конкретного направления, поэтому я выбрал пять книг, которые служат форпостами моего собственного пути в дизайне. Я предполагаю, что вы уже читали книги по дизайну раньше, поэтому мы сразу пропустим очевидные, вездесущие элементы таких списков. Эти книги изменили мой мозг.Эти книги причиняют боль.
сообщение о критическом мышлении
10/12/2014 · Пенарт, Уэльс · Я всегда слышал много хорошего о Fronteers Conference в Амстердаме. В начале октября мне наконец-то нужно было ехать. Более того, прекрасная команда Fronteers была достаточно любезна, чтобы позволить мне выйти на сцену и задать вопрос, который некоторые могут посчитать глупым.
сообщение о процессе
09/11/2014 · Путешествие из Мюнхена · Около двух лет я полагался на простой инструмент, чтобы улучшить свой рабочий процесс общения для Gridset и других проектов.Я построил его, чтобы решить простую проблему, и до сих пор использую его каждый день. Недавно я понял: «Блин, этот может пригодиться и другим людям. ”Так что попробуйте Text Palette…
сообщение о процессе
10.09.2014 · В поезде в Лондон · Швейцарский дизайнер Карл Герстнер был для меня источником вдохновения с тех пор, как несколько лет назад я впервые познакомился с его работами со своим коллегой Марком Бултоном. Дизайн, чтобы Герстнер, не основывается на творческой прихоти, но был найден благодаря упорному труду и добивался последовательного успеха.Я копаю это.
сообщение о разработке
04.09.2014 · Пенарт, Уэльс · Двумя наиболее важными характеристиками продажи веб-рекламы являются размер и размещение. Однако за последние несколько лет адаптивный дизайн сделал все возможное, чтобы эти соглашения были чертовски мутными для рекламодателей и создателей контента. Размер и положение трудно гарантировать на гибком холсте, и я видел, как адаптивный редизайн для крупных брендов откладывался на неопределенное время из-за неопределенности в размещении рекламы.Но, возможно, я нашел простое решение.
сообщение о разработке
03.07.2014 · Пенарт, Уэльс · Веб-страницы продолжают становиться тяжелее. Прокрутка тенденций на httparchive.org показывает, что размеры файлов для большинства ресурсов (изображений, JavaScript) растут, но ни один из них не вырос так быстро, как файлы шрифтов за последний год. Сжатие может помочь, но чтобы по-настоящему оптимизировать использование веб-шрифтов, веб-дизайнерам необходимо познакомиться с подмножествами. Или даже лучше: службы шрифтов могут сделать это за нас.
сообщение о процессе
29.05.2014 · На самолете в Белфаст · Сайт о веб-дизайне должен отражать лучшие мысли автора о веб-дизайне. За три года, прошедшие с момента моего последнего пересмотра дизайна, я достаточно вырос как дизайнер, и, когда Monotype выкупил Mark Boulton Design в прошлом месяце, я почувствовал, что время, предоставленное мне в эти пропитанные администратором переходные дни, было идеальным окном, чтобы наконец получить немного повеселиться с редизайном.
сообщение о процессе
04.04.14 · Пенарт, Уэльс · Где-то прошлой весной я начал понимать, что сеточный дизайн мешает хорошей гибкой компоновке.Доказательства меня били по лицу каждый раз, когда перезапускался какой-нибудь крупный коммерческий сайт с адаптивным дизайном. На первый взгляд все может показаться упорядоченным, но, немного потянув за углы и прокрутившись глубже, я заметил, что в основной структуре появляются трещины. Сетки не выдерживали.
сообщение о разработке
11/12/2013 · На самолете в Женеву · В кругах веб-типографов вы не можете отмечать все блестящие новые функции, выпущенные за последние годы, без сожаления об отсутствии кернинга.Несомненно, литейные предприятия проделывают фантастическую работу по выявлению и исправлению пар кернинга в своих шрифтах, а функции открытого типа позволяют использовать такие интригующие новые свойства CSS, как «кернинг», но оба они не соответствуют точному контролю, к которому мы набираем ботаников. не такие уж далекие дни за рулем интерфейсов Adobe
сообщение о процессе
30.09.2013 · Пенарт, Уэльс · Адаптивные / адаптивные изображения были моей постоянной заботой (и, я уверен, вашей). Каким бы увлекательным ни был этот вопрос, у меня не всегда было время следить за последними или вспоминать все предыдущие попытки решения этого старого каштана, поэтому я создал этот мега-список (желательное название ), чтобы попытаться собрать все, что касается изображений и того, как мы их обслуживаем.
сообщение о процессе
02.03.2013 · В поезде из Брайтона · Программы не заменяют дизайн. Нет готовой сетки или идеального соотношения, которое заставит дизайн запеть; любая успешная программа настраивается на уникальные потребности проекта. Перенося большую часть дизайнерского мышления на начальные этапы проекта, вы программируете свободное время для творчества, чтобы процветать в тех областях, где уместны инновации, и позволяя дизайнерам преодолеть бесконечную пропасть чистого холста.
сообщение о процессе
07/02/2011 · Ньюпорт, Уэльс · В прошлый четверг я выступал с коротким докладом о сетях и Gridset на локальном хосте Port80 в Ньюпорте, Уэльс. В ходе выступления некоторые пришли к выводу, что мы уже несколько месяцев ругаемся с дизайн-студией Марка Бултона, поэтому я подумал, что будет полезно написать здесь свои заметки.
сообщение о процессе
21/08/2012 · Пенарт, Уэльс · В течение многих лет ходили слухи о «Едином приложении для веб-дизайна»: чудовище Fireworks / In-Design / Dreamweaver, которое позволит нам работать так, как мы думаем лучше всего, с безупречный внешний вид.Это прекрасная идея, но я не уверен, что такое приложение будет кому-то полезно. Вместо того, чтобы искать одно приложение с одним реактивным подходом к натиску проблем, нам нужен постоянный набор умных, целенаправленных инструментов, которые можно разработать так быстро, чтобы почти предвидеть потребности отрасли.
сообщение о типографике
15.06.2012 · В поезде из Брайтона, Великобритания · Свисающая с последней строки абзаца типографская вдова – это фрагмент мысли, оторванный от контекста.Они являются результатом небрежной типографики – и их следует контролировать, – но, учитывая нынешнюю изменчивую природу нашей сети, вдовы безнаказанно появляются на наших страницах. Они представляют собой слепое пятно, потому что если бы вы заметили их, это вызвало бы возмущение по поводу нынешней бесполезности борьбы с такими деталями в наших постоянно реагирующих макетах.
сообщение о разработке
17.05.2012 · Пенарт, Уэльс · Честно говоря, я не могу сказать вам, лучше ли srcset , чем изображение .Как я мог? Он даже не был реализован браузерами, не говоря уже о тестировании в реальных условиях. Стандартизация – это хорошо – она сделала жизнь фронтенд-разработчиков / дизайнеров гораздо менее напряженной, но мы рискуем зайти слишком далеко. Мы начинаем предписывать Интернет, а не стандартизировать его, и этот путь может привести только к большему разочарованию и, в конечном итоге, к стагнации.
сообщение о типографике
04.01.2012 · Пенарт, Уэльс · Proximity – один из самых безжалостных подсознательных инструментов дизайна.Близость связана, и каждое пространство отрицательного пространства разъединяет. Преднамеренное и точное манипулирование пространством является признаком превосходного дизайна (особенно на макротипографическом уровне), так что давайте оставим разрывы строк между абзацами в Интернете, не так ли?
сообщение о процессе
12/12/2011 · Пенарт, Уэльс · Как дизайнеры – особенно в сети – мы ценим функцию выше формы, а функция текста должна быть читаем . Lorem Ipsum намеренно блокирует эту функцию тарабарщиной, оставляя принципы удобочитаемости слишком поздно в процессе (если вообще).Результат может быть красивым, но его сложно расшифровать. Вот кое-что, что может помочь…
сообщение о критическом мышлении
16/11/2011 · Пенарт, Уэльс · Нам нужно решение для адаптивной рекламы, иначе большая часть наших усилий по продвижению адаптивных макетов на крупномасштабные веб-сайты будет подавлена холодной и суровой бизнес-реальностью. Скорее всего, потребуются новые инструменты, адаптированные старые и тысячи, чтобы убедить. Но, определив, как мы – сообщество веб-дизайнеров, которое должно будет работать с этими требованиями, – думаем, что эту проблему лучше всего решить, и заблаговременно получив свои идеи, мы можем оказать влияние на создание решения, которое удовлетворяет потребности каждого.В конце концов, это то, что мы делаем каждый день, верно?
сообщение о процессе
Последние шесть месяцев казались двумя годами, а может, и двумя неделями. Он меняется в зависимости от угла моего отражения. Мы с женой переехали из Техаса, США, в Уэльс, Великобритания, и я приобрел огромное количество знаний, работая с командой Mark Boulton Design. Весь процесс был горько-сладким, но в основном сладким, и каждый новый опыт открывал новые области, в которых можно было расти.
Эти извлеченные уроки побудили меня к редизайну, в котором основное внимание уделялось типографской пропорции: между стилями контента, между областями шрифта и негативным пространством, а также между уровнями контраста.Я также добавил области, чтобы выделить мои статьи для других сайтов и серию инструментов, которые я разрабатывал, чтобы облегчить жизнь веб-дизайнерам (пока MIN и Fount).
Надеюсь, вам понравится! – Натан
сообщение о процессе
07.06.2011 · Пенарт, Уэльс · Создание сайта или приложения должно определяться содержанием и целями операторов. Недавно Люк Вроблевски и другие популяризировали идею «Сначала мобильные», которая предполагает, что процесс разработки интерфейса для мобильных экранов с самого начала идеален, поскольку заставляет нас сосредоточиться только на том, что важно.Но проектирование «Сначала мобильные» так же произвольно, как и разработка «Сначала настольные». Хотя я аплодирую духу концепции, мы можем с головой погрузиться в другую крылатую фразу, от которой позже придется отучиться.
сообщение о профессиональной жизни
26.04.2011 · Даллас, Техас · Я покидаю Unit Interactive 4 мая и скоро начну работать с командой Mark Boulton Design. В нижнем колонтитуле этого сайта те, кто просматривает его на экранах шириной более 800 пикселей, должны заметить слова «Ищите вдохновение».Это мантра. Понимаете, я стараюсь быть лучшим дизайнером на планете. Я не ожидаю, что достигну этой цели в ближайшее время, и это может занять больше времени, чем у меня, но суть не в том, чтобы достичь этой цели.
сообщение о процессе
21/03/2011 · Плано, Техас · Хорошие дизайнеры стремятся создать множество форм: Т-образные, I-образные, Черепашки-ниндзя. Даже рок-звезды. Проработав три года в магазине из пяти человек (самое большее), я увидел, как хорошо работают Т-образные формы, но я знаю, что мы, универсалы, можем развивать свои навыки и дальше.Ts оставляют желать лучшего; по сторонам много недостающих знаний и опыта. Универсал может и должен быть более разносторонним. Чтобы выразить это метафорой: я стремлюсь быть Мегаменом. Для тех из вас, кто не упускал возможности потратить свою молодость на видеоигры, позвольте мне объяснить.
сообщение о процессе
07/03/2011 · Плано, Техас · Поддержка – самая важная функция любого приложения. Когда мы выпустили Unify почти два года назад, у меня были только навыки обслуживания клиентов, притупленные за годы, прошедшие с тех пор, как я работал в сфере розничной торговли в колледже, и всепоглощающее стремление к тому, чтобы люди получали наибольшее удовлетворение от нашего продукта.С тех пор я научился поддерживать людей и противостоять натиску. Хотя я, вероятно, мог бы написать слишком длинную статью на эту тему, в эти выходные я нашел отрывок из Tao Te Ching , который прекрасно резюмирует мои высокоуровневые мысли о поддержке.
сообщение о критическом мышлении
02/03/2011 · Плано, Техас · Интернет и мобильные устройства не делают нас антиобщественными. Они делают нас hyper -социальными.Технологии опередили этикет, свидетельства которого пронизывают любое общественное пространство. Люди постоянно позволяют цифровому взаимодействию прерывать взаимодействие в реальной жизни, но если мы все начнем рассматривать онлайн как реальную жизнь, мы поймем, что у нас уже есть социальные рамки и вежливости в этом мире, где все новые связи.
сообщение о критическом мышлении
14.02.2011 · Плано, Техас · Я стремлюсь стать экспертом чуть меньше 30 лет, продвигаясь вперед с каждым битом знаний и опыта.«Эксперты» – это люди с оперативными ответами и глубокими объяснениями. Малькольм Гладуэлл называет их «знатоками» в модели «Переломный момент » и справедливо отмечает, что нельзя просто накопить опыт – знаток должен непременно делиться.
сообщение о типографике
28.01.2011 · Даллас, Техас · «Форма книги » Яна Чихольда – авторитетный источник в области книжного дизайна и лучшая книга по типографике, которую я когда-либо читал (а я читал много, помните ты).Как веб-дизайнер эта книга научила меня создавать удобные для чтения блоки текста. Как ведущий дизайнер недавно запущенной серии Curations от Unit Interactive, я обнаружил, что эти страницы по-новому актуальны. Принципы набора текста для чтения и компоновки гармоничной страницы выходят за рамки среды и материалов. Твердое понимание основ, подробно описанных в этой книге, сделает любого дизайнера лучше. Немедленно.
сообщение на Раз. Обломки
14.01.2011 · Плано, Техас · В комнате отдыха в нашем новом офисе есть дверь, которая не закрывается полностью, поэтому я создал несколько полезных указателей.
сообщение о профессиональной жизни
18.12.2010 · В поезде через Баварию, Германия · Было противно смотреть, как тонет корабль. Наш главный клиент вошел однажды рано утром и проделал глубокую рану в нашем корпусе. Были объявлены все руки; половина нашей команды погибла. Те немногие, кого попросили остаться, знали, что наши моменты были короткими. К счастью, мой спасательный плот был готов к работе.
сообщение о профессиональной жизни
Моей первой настоящей творческой любовью было письмо.Сколько себя помню, я рассказывал истории. Пока я был сосредоточен на развитии созданного мной приложения под названием Unify, а также на профессиональном написании статей для Unit Blog и Smashing Mag. Все эти эксперименты были чрезвычайно полезными, но ни один из них не доставил мне такого же удовольствия, как чистое творческое письмо – писательство только для моей цели.
Итак, я обновляю этот сайт с новым дизайном и новой целью. Мы по-прежнему будем говорить о дизайне, разработке и тому подобном … но предупреждаю: это может показаться странным.
С уважением, Натан Форд
сообщение о критическом мышлении
11/03/2009 · Даллас, Техас · В течение последних пятидесяти лет существовало несколько способов воздействия внешнего мира на человека (радио, телевидение, печатные материалы, выход из дома) и У рекламодателей была вся база, покрытая историями, связанными с их брендами: рекламный щит с улыбкой, реклама, намекающая на 1984 Оруэлла, реклама, в которой говорилось об автомобилях, как это делают нормальные люди… каждая из них умело настроена так, чтобы играть на наших эмоциях.
сообщение о типографике
01.09.2009 · Даллас, Техас · Некоторые шрифты неплохие: они просто плохо применяются. Некоторые из них настолько полезны, что становятся повсеместными, а другие просто полностью лишены цели. Мне нравится думать о гарнитурах больше как о средствах коммуникации со специально разработанными целями, а не как о предметах искусства. Вот некоторые из самых распространенных гарнитур, используемых в наши дни в дизайне, и то, как каждый из них используется, злоупотребляет или как их следует избегать.
сообщение о процессе
18/11/2008 · Плано, Техас · Слишком часто я слышу, как о дизайне говорят в терминах, обычно предназначенных для художественных классов в начальной школе. Ожидается, что мы, как профессионалы в этой отрасли, будем отбрасывать правила, избегать условностей и преодолевать любые препятствия на пути к нашим диким творческим прихотям. Вооруженные этим чувством – их эго сдерживается только ограниченным кошельком клиента – многие креативщики нагло идут по пути, по которому они не ходили, по колено в бесформенном веселье своих фантазий, не заботясь об эффективности или финансовой отдаче.
сообщение о процессе
31.10.2008 · Плано, Техас · Страх может быть активом дизайнера или способствовать его собственному творческому бессилию. Как дизайнеры, нам не нужно бояться самого страха, нужно только помнить о том, как он сфокусирован.
Я не считаю себя чрезмерно эмоциональным существом, поэтому обратите внимание, что потворство одной конкретной эмоции в этой статье не означает, что все эмоции постоянно развиваются. Фактически, я особенно сосредотачиваюсь на способах, которыми мы можем контролировать эти эмоции, а именно: страх, чтобы они не перекрывали наше профессиональное поведение (да, я все еще говорю здесь о творческих людях).
сообщение о разном мусоре
21.10.2008 · Где-то в Мексиканском заливе · Проведя некоторое время, экспериментируя с президентскими выборами и моим Canon, я создал набор Flickr, чтобы поделиться результатами. Взгляните и дайте мне знать, что вы видите.
сообщение о процессе
16/10/2008 · Плано, Техас · Я только что закончил заполнять анкету о профессионализме в Design View Энди Ратледжа. Я сохраняю свой ответ здесь для использования в будущем.Если у вас будет возможность, примите участие в опросе. Погоня Энди определенно стоит того.
сообщение о критическом мышлении
15/10/2011 · Даллас, Техас · Недавно я наткнулся на многочисленные объявления о вакансиях, портфолио и сайты агентств, которые используют слово «рок-звезда» как знак различия. Для меня это безрассудное неверное толкование роли дизайнера.
сообщение о процессе
10.02.2008 · Даллас, Техас · Сколько должен стоить веб-сайт? Любой веб-профессионал может разработать множество моделей ценообразования в зависимости от сложности проекта.Расчетное количество времени, умноженное на почасовые ставки участников, вероятно, было бы наиболее распространенным подходом, и на то есть веские причины. Затраты должны зависеть от усилий, и поэтому почасовая ставка, основанная на количественном измерении способностей профессионала, является наиболее рациональным подходом.
сообщение о типографике
26/06/2008 · Плано, Техас · Один из аспектов веб-дизайна, который почти сразу оскорбляет дизайнеров, – это отсутствие шрифтов, которые считаются безопасными для использования.Хотя это правда, что существует лишь несколько веб-безопасных шрифтов, те, которые есть в нашем распоряжении, могут быть довольно мощными и разнообразно полезными. Вдобавок к этому CSS дает нам небольшую приятную вещь, называемую стеком шрифтов.
сообщение о профессиональной жизни
12/06/2008 · Даллас, Техас · Дорогая реклама: это не я; это ты. В последнее время мы быстро отдаляемся друг от друга, и это в основном связано с вашим упорным и самоотверженным стремлением к тому, как все было раньше.Не поймите меня неправильно, я, как никто другой, люблю слушать ваши старые истории, но, в конце концов, они являются эхом скрипок на Титанике. Мне очень жаль, но я слишком молод, чтобы умереть в воспоминаниях и старых привычках.
Как заставить Amp Sims и профили Kemper работать
Подкаст TSRB 032 – Как заставить Amp Sims и профили Kemper работать
[00:00:00] Бенедикт: [00:00:00] Нам нужно выяснить, как на самом деле звучит реальный усилитель без цитаты или каковы типичные характеристики настоящего усилителя, а затем как получить эти характеристики или как получить Sims.Если они не похожи на рецидив, это подкаст группы самозаписи. Шоу, где мы помогаем вам создавать захватывающие записи самостоятельно, где бы вы ни находились, своими руками.
Поехали.
Привет и добро пожаловать. Подкаст группы самостоятельной записи. В то время я ваш хозяин, Бен, и я здесь со своим другом и коллегой, Малькольмом и Флудом. Как дела, Малькольм?
Malcom: [00:00:36] Здравствуйте? У меня все отлично. Спасибо. Я сейчас нахожусь на прекрасном острове Ванкувер, но повсюду дым.Там, как лесные пожары, тушащиеся в Штатах совсем рядом, и пара на острове.
А это похоже на туманный ноябрьский день.
Бенедикт: [00:00:52] Ага. Как будто мы об этом говорили. Я с трудом могу представить, как это происходит, потому что я никогда не испытывал ничего подобного. К счастью,
[00:01:00] Malcom: [00:01:00] Это так странно. Мол, это будет середина дня, но это все еще похоже на то, что есть. Просто везде отлично.
Вы ничего не видите. А солнце как красное, и это как конец света.
Бенедикт: [00:01:12] Есть ли предупреждения оставаться внутри, если становится слишком плохо или все такое? Ага.
Малком: [00:01:17] Ага. На самом деле это довольно плохой вариант. Качество воздуха ужасное. В любом случае, это одно из худших, что когда-либо было в моей жизни, так что да.
Оставайтесь внутри
Бенедикт: [00:01:29] как только для людей и для меня, чтобы мы могли это понять.Как далеко вы от настоящих безумных пожаров
Malcom: [00:01:36] действительно далеко? То есть, я не знаю. Посмотрим карту лесных пожаров. Я уверен. Я что-нибудь найду. Текущая активность лесных пожаров. Интерактивная карта. Вот так. Слава Богу за интернет. Я имею в виду, что на острове есть некоторые, которые очень близки.
Гм, да, вроде бы час езды, если даже это, но [00:02:00] здесь не видно тех, что в Штатах, так что я не нашел хорошей карты. Эм, так что я не совсем уверен, где происходит пожар в Штатах.Кроме этого, это. Я думаю, что во многих местах, потому что пожар там довольно неконтролируемый,
Бенедикт: [00:02:13], но тогда это как минимум пара часов.
Правый. Итак,
Malcom: [00:02:15] О да. Ага. Легкий. Гм, да, огонь, разговоры о путешествии действительно, очень далеко,
Бенедикт: [00:02:21] но это похоже на тот факт, что до него осталось несколько часов, и это все равно действительно влияет на качество воздуха где ты какой-то сумасшедший.Итак,
Malcom: [00:02:29] Да, это очень и очень безумно.
Бенедикт: [00:02:31] Ага. Я имею в виду, но между вами и.
Штаты, верно. Итак,
Malcom: [00:02:37] Да, мы говорим об этом со вкусом. Вот дерьмо. Хорошо. Ага. Я нашел небольшую карту и о да. Ух ты. Там внизу нехорошо. Святая корова. Хорошо. Посылать хорошие флюиды Вашингтону. Да, полностью получите этот контроль.
Бенедикт: [00:02:58] Вашингтон, Калифорния, [00:03:00] Орегон также влияет на это.Ага.
Малком: [00:03:03] Ага. Как будто вся западная сторона США в огне.
Так или иначе выглядит на этой карте. Святая корова. Если вы слушаете оттуда, посылаю вам наши наилучшие пожелания. Да,
Бенедикт: [00:03:13] полностью, полностью. Что ж, да, мы ничего не можем, мы, к сожалению, не можем сделать ничего другого. Эм, это похоже на то, что для нас, европейцев, это тоже безумие, особенно потому, что у нас нечасто случаются такие вещи, если они вообще встречаются, и вроде бы, это похоже на то, чего я даже не могу представить.
Итак. Ага. Во всяком случае, кроме этого, я надеюсь, ты прекрасно себя чувствуешь. Вы хорошо провели выходные.
Malcom: [00:03:35] Ага. Ага. Все хорошо. На этой неделе мы собираемся сделать целую кучу миксов, так что я в восторге.
Бенедикт: [00:03:41] Это круто. Хм, да, я имею в виду, что сегодняшний эпизод – это то, чем мы являемся, гм, где мы снова отвечаем на довольно распространенный популярный вопрос, который я задавал пару раз, например, в течение последних недель или месяцев.
Итак, люди [00:04:00] писали об этом по электронной почте, и я упоминаю об этом, я думаю, также в сообществе, в сообществе Facebook. Эээ, и это так. Они хотят знать, как сделать усилители Sims или такие вещи, как kemper или Axe FX, более реальными или более реальными, как настоящий усилитель. Так что кажется, что люди действительно борются с этим, или они чувствуют, что симуляторы усилителя звучат плоско или двумерно по сравнению с настоящим усилителем, но они хотят знать, что делать.
Эээ, об этом. И, мм, поскольку это, кажется, такая популярная тема, и я вроде бы немного подумал над этим, и мы говорили об этом перед серией, и мы пришли Придумай пару вещей, которые помогут тебе с проблемой, если она у тебя есть.И поскольку мы думаем, что они есть, могут быть некоторые причины для этого, э-э, которые довольно просты.
Чтобы заняться и, да, это то, о чем мы собираемся поговорить. Сделайте звук ваших симуляторов усилителя более реальным, более реалистичным, чтобы вам не казалось, что вы используете искусственный усилитель.
Malcom: [00:04:58] Эээ, это [00:05:00] не должно быть таким. Они усиливают симов у моделистов, например, как кемпер, или выступают в роли пылесоса, и тому подобное. Гм, они более чем способны выполнять очень профессиональную работу.
И если, если вы не думаете, что это правда, вы ошибаетесь. Полностью. Они были широко распространены и уже долгое время используются в тоннах его песен. Гм, да. Вроде это даже не вопрос. Если они больше справляются с этой задачей, они, они просто сказали, что они. Так что, если вы не получаете этих результатов, нам нужно выяснить, что вы делаете не так.
Бенедикт: [00:05:38] Полностью. И именно поэтому мне так сложно описать эпизод или придумать название, даже потому, что мы не хотим подразумевать, что симуляторы усилителей не так хороши или не так реалистично звучат, потому что они, ммм, скорее всего это то, как вы это используете.Это вызывает проблему, а не в усилителе-симуляторе или самом кемпере.
И поэтому трудно найти для этого подходящее название, но [00:06:00] я вижу, что есть проблема. Гм, и я, я полностью верю, что есть проблема, если люди пишут об этом по электронной почте. Так что вы не можете спорить с тем, что люди думают об использовании этих, этих вещей. И, ммм, вот почему мы решили это сделать.
Ага. Я тоже думаю, что для того, чтобы действительно сделать это, найти проблему и решить ее, нам нужно выяснить, почему вы так себя чувствуете или почему, почему люди думают, что симуляторы усилителей звучат цифровыми или ненастоящими.Нам нужно выяснить, как на самом деле звучит настоящая цитата без цитаты, настоящий усилитель или каковы типичные характеристики настоящего усилителя, а затем как получить эти характеристики или как получить Sims.
Если их нет. Гм, чтобы звучать как настоящая лампа. Итак, в этом эпизоде снова пошаговый процесс. И, мм, да, давай начнем. Итак, хорошо, Малькольм, что ты думаешь по этому поводу? Как вы думаете, почему люди до сих пор считают, что Sims-усилители – это не профессиональная вещь в использовании или они не звучат так же хорошо, как настоящие [00:07:00] усилители?
Malcom: [00:07:00] Хорошо.У меня есть теория на этот счет, и я думаю, что все сводится к тому, что они слышат, когда пробуют их, потому что вы подключаете симулятор усилителя и слышите это из любой настройки вашего студийного мониторинга. А если нет. Супер классно. У вас только что есть дешевые колонки для ноутбука или что-то в этом роде.
Знаете, для вас это не будет звучать очень впечатляюще, но вы знаете, что то, что вы слышите, не будет звучать очень впечатляюще. Но если вы подключите стек Marshall, сидя рядом со своим столом, и увидите, как сотня громкоговорителей взрывает вас, это произойдет, вы почувствуете, что это звучит намного лучше, верно?
Бенедикт: [00:07:36] Полностью.Ага, давай. Но
Malcom: [00:07:39] то, что вы слышите для симулятора усилителя в этой ситуации, знаете, если вы слушаете это, из ваших динамиков вашего ноутбука или чего-то еще, не как это звучит. Вы знаете, это просто то, что вы слышите, это ваша настройка мониторинга, которая в этом случае ошибочна. Хм, так что я, я иногда не думаю, что они сняты реалистично, что на самом деле изображает [00:08:00], как они звучат по сравнению друг с другом.
Бенедикт: [00:08:03] Это очень хороший момент.Я даже не думал об этом, но ты совершенно прав. И, возможно, или весьма вероятно, что проблема, с которой люди сталкиваются с симуляторами усилителей, может быть той же проблемой, когда они задают, ммм, почти такой же популярный вопрос, почему мой записанный настоящий гитарный усилитель? Почему это не похоже на звук усилителя в комнате, когда я стою перед ним?
Это как другой вопрос, но в основном по той же причине. Итак, у них есть стек, затем они создают его, затем через него, через свои наушники или через свои мониторы, или что-то еще.И тогда им кажется, что это не то же самое, что они слышали в комнате. Так что это может быть та же проблема. Как с симуляторами усилителя, потому что вы не сравниваете ощущения, которые у вас есть, вы сравниваете ощущение, которое вы испытываете, когда стоите перед усилителем, с тем, что исходит из ваших мониторов.
Это очень интересно. И ты прав. Ага.
Малком: [00:08:52] Ага. Так что, пока вы не создадите этот усилитель и не сравните его через ту же среду, которую вы сравниваете, чтобы прослушать симулятор усилителя [00:09:00], вы не сможете добиться точных результатов.Сравнение, правда? Они должны быть спина к спине через одно и то же, ну, как слышно. Таким образом, создание усилителя и последующее прослушивание его через те же динамики было бы отличным способом для этого.
Бенедикт: [00:09:12] Полностью. И, кстати, обычно я говорю такие вещи в конце серии, но на этот раз, поскольку это некоторые, я чувствую себя очень объективной, субъективной, ммм, темой. И я чувствую, что есть разные. Мнения, много сильных мнений по этому поводу, потому что одни люди клянутся amp Sims, другие их ненавидят.
Нам любопытно узнать, как вы к этому относитесь. Так что на случай, если вы не слушаете самый конец серии и пропустите его, я хочу указать вам на сообщество Facebook. И я хочу сказать, пожалуйста, присоединяйтесь к этому сообществу и дайте нам знать. Что вы думаете об этом, и, возможно, дайте нам знать, боретесь ли вы с тем же самым или нашли решение для этого.
Итак, если у вас есть теория, почему это так, просто перейдите на самозапись, band.com/community и, ну, да.Попробуйте поговорить там и дайте нам знать, потому что это интересная тема. И тот, который получит это, станет еще более важным, потому что я чувствую, что все больше и больше людей начинают [00:10:00] использовать amp Sims.
А еще такие же вещи, как Canberra Equifax, просто потому, что они так хорошо звучат. И просто потому, что ими просто удобнее пользоваться. И инструменты, которые у нас есть сейчас, просто отличаются от того, что было пару лет назад. Так что это постоянная, постоянно развивающаяся тема.И нам любопытно услышать ваши мысли по этому поводу.
Присоединяйтесь к сообществу Facebook и дайте нам знать. Ну, я просто хотел это сказать. Потрясающие. Ага. Ага. Итак, есть проблема сравнения настоящего с тем, что выходит из ваших динамиков? Это то, что мне нравится, просто тот факт, что он цифровой, и что вы вращаете виртуальные ручки на плагине или как на этом компьютере, как это футуристическое звучание устройство Kemper или что-то еще, что вы используете.
Я чувствую это одиноким.Может создаться впечатление, будто это что-то искусственное, фальшивое или ненастоящее, просто потому, что это не настоящее, но вы понимаете, о чем я? Люди любят поворачивать ручки, это то же самое, что и аналоговое записывающее оборудование. Во многом это то, как вы относитесь к его использованию. Если вы действительно можете прикоснуться к нему, или вам нужно использовать мышь.
Итак, есть [00:11:00] предвзятость, я думаю, в сторону аналоговых схем и регуляторов. И прочее, правда? Ага. Это определенно, определенно, я думаю, играет здесь роль.
Малком: [00:11:10] Ага. Потенциально это не так весело использовать.
Бенедикт: [00:11:13] Да, именно так. И есть два лагеря. Кому-то это нравится, кому-то я предпочитаю, есть такие, как компьютерщики, или особенно молодые люди.
Думаю, кому нравится начинать с amp sims. У них не такая большая проблема, но как у кого-то. Кто действительно привык к своим усилителям, возможно, потратил много денег на свои усилители и подумал, что эти усилители действительно ценны для них.Они знают, как звучат. И трудно согласиться с тем, что плагин за сто долларов может делать то же самое, что и ваш винтажный Marshall или Mesa или что-то еще, что у вас есть.
Правый. Так что немного больно признать, что это тоже может быть,
Malcom: [00:11:48] да, мне это очень понравилось. Вы сказали, что, может быть, много потратили на их усилитель. Я думаю, что это более чем вероятно. Ага, есть заблуждение о невозвратных затратах, когда вы уже вложили в них [00:12:00]. Итак, теперь вам нужно его использовать.В противном случае вы чувствуете, что теряете деньги.
Да, но вы зря потратили деньги, но в любом случае вы уже потратили деньги на усилитель. Итак, вы застряли.
Бенедикт: [00:12:08] Полностью. И я знаю это чувство, хотя я знаю, что эти симуляторы усилителя действительно могут звучать так же хорошо, как настоящий усилитель. Иногда, особенно в начале, я иногда чувствовал себя виноватым, когда микшировал материал, и мне приходилось переделывать материал.
И здесь использовался плагин вместо настоящих усилителей, которые у меня есть здесь, в студии, и настоящих, таких как коробка переусилителя, которая у меня есть, и аналоговое оборудование, и все хорошие преемпы, и микрофоны, и прочее, без использования этого. .И переходить на плагин всегда казалось ленивым или. Это похоже на то, как будто я был обязан клиенту использовать настоящие вещи.
Хотя я знаю, что плагин был лучшим решением в этом случае, но это было немного странно
Malcom: [00:12:42] потому что вы, да. Я имею в виду, вы просто должны помнить, что все дело в результатах, а не в процессе. некоторые усилители симки есть.Но есть способы это компенсировать.
И мы хотим поговорить и об этих [00:13:00]. И, ну, я как бы, или мы как бы разделяем это на два лагеря, так что есть модели оборудования или подобный подход к профилированию Kemper по сравнению с реальными симуляторами усилителей, это две разные вещи. Гм, Малькольм, у тебя больше опыта работы с Кемпером. Я много использую плагины.
Итак, мы можем немного поговорить об этом. Ага. Давайте начнем. Вы чувствуете, что у Kemper есть что-то, если вы снимаете профиль настоящего усилителя, потому что Kemper именно так и делает?Kemper – это не симулятор усилителя, а алгоритм, который пытается быть усилителем, но он как бы захватывает реальный сценарий и пытается его точно воспроизвести.
Вот что делает кемпер. Но чувствуете ли вы, что делаете сравнения AB? Это достаточно большая разница, о которой стоит беспокоиться. Или вы чувствуете, что это сравнение AB имеет смысл? Вам вообще нужно это делать?
Malcom: [00:13:51] Не думаю, что это круто, чувак. Типа, я просто постоянно поражаюсь этим.Без сомнения, это было лучшее вложение, которое я когда-либо делал в оборудование.
[00:14:00] Мне это очень нравится. Я такой фанат. Я думаю, это звучит убийственно. Я считаю заблуждение, что люди. Чаще всего половина. И, возможно, в начале у меня было то, что каждый усилитель в мире будет у меня под рукой. И это не то. Так что, если в дизайне есть изъян, я имею в виду, что я бы не назвал это провалом, потому что он не предназначен для этого, но, ну, вот где кажется, что у вас нет такой силы.
Так что я не могу просто взять. Высокие частоты или что-то вроде среза, и ожидайте, что он будет звучать как срез Vox AC 30s, вы знаете, дело не в том, что у меня нет всех регуляторов. О каждом усилителе передо мной, но у меня есть захват этого усилителя в конкретной комнате с определенным микрофоном и определенной цепочкой усилителей, по сути, своего рода вещью.
Таким образом, вы должны по-другому взглянуть на то, как вы воспринимаете инструмент. Гм, и, как только вы посмотрите на это, как это было задумано [00:15:00], как эти снимки различных настроек, а не усилителя перед вами, а просто снимки определенных ситуаций с этими усилителями.Думаю, работает отлично.
Бенедикт: [00:15:12] Да, согласен. Я согласен.
Это действительно заблуждение. Вы не можете ожидать, что наберете средние частоты на Kemper и ожидаете, что это будет что-то вроде достижения середины до Маршалла. Делает. Потому что, как мы все знаем, эквалайзер Маршалла ничего не делает. Вы не можете,
Malcom: [00:15:29] не имеет значения
Benedikt: [00:15:30] где находится эквалайзер Маршалла.
Malcom: [00:15:31] Вроде как
Бенедикт: [00:15:32] по крайней мере по сравнению с другими усилителями.
Но Kemper похож на то, что в устройство встроен только Q a, и это не то, что на самом деле является сигналом, но люди думают. Некоторые люди думают, что это то, что он делает. Итак, вы прямо здесь. Я согласен.
Malcom: [00:15:50] Верно. Но это действительно поднимает хороший момент в том, что есть обучение, как использовать свое снаряжение и быть кемпер.
Гм, ну, знаете, с моим Кемпером я научился получать результаты [00:16:00]. Если я хочу, чтобы на этом профиле было больше середины, ну или середины чего-то вроде другого.Я должен найти способы сделать это. Ты знаешь? Итак, вы узнаете, как управлять оборудованием перед вами, и я уверен, что вы знаете, что то же самое и с этими усилителями Sims.
Эм, вы, вы узнаете, как заставить их делать то, что вы от них ожидаете
Бенедикт: [00:16:15] делать. Ага. Согласовано. Хм, это да, основные проблемы для меня с Kemper, по крайней мере, исходя из моего опыта работы с ним, у меня тоже был один дважды. Фактически. Был такой, продал. Я купил один снова и снова продал, но, ммм, он мне понравился.Мне все еще нравилось.
Просто я использовал все больше и больше плагинов, и это было лучше для моего рабочего процесса и всего остального, но мне все равно понравилось, но я думаю, что есть два, или, по крайней мере, для меня было два недостатка или проблемы, которые у меня были с этим. Не совсем зубная нить, но у меня были две проблемы с ней. Один был. Иметь возможность действительно идеально сочетать его или любить контроль над ощущениями, а не над звуком.
Гм, но именно то, что чувствуешь, когда играешь. Мне всегда приходилось немного нырять в меню и набирать [00:17:00].Гм, или это игра с вещами, которые не так очевидны. Так что это не сигнал, который вы видите, это не просто игра, а то, что, что находится под капотом, которым вы можете управлять с помощью Kemper. И если вы поиграете с этим экспериментом и получите то, что он делает на самом деле, вы можете подойти так близко или как будто вы можете получить идеальный результат.
Гм, но я всегда чувствовал, что должен поиграть с этим, и я никогда не понимал этого полностью. Или мне кажется, что многие люди не проводили с этим достаточно времени.Чтобы действительно довести дело до точки, где это будет идеальное место для сладкого. Так что это одна из проблем, с которыми я столкнулся. Гм, именно так, как устроен рабочий процесс, и меню, и что вы должны набирать все эти вещи.
И еще кое-что для меня, и мне любопытно, есть ли у вас такой же опыт. Другое дело для меня. Мне всегда приходилось использовать его с плагином, потому что мне приходилось использовать его с IsS большую часть времени, потому что я этого не делал, мне действительно не нравилось, как звучат кабины и кемпер.Я всегда чувствовал, что независимо от цепочки, независимо от профиля, особенно для искаженного материала, там [00:18:00] всегда был как этот слой, этот тонкий слой шипения поверх всего с чистым.
Так что у меня не было этой проблемы. Я люблю чистый мрачный кемпер. Абсолютно. Но особенно с материалом с высоким коэффициентом усиления я чувствовал, что всегда был этот слой шипения. И мне всегда приходилось использовать. Внешние IRs с этим, чтобы понять это правильно. Я не знаю, есть ли у вас такая же проблема, но я постоянно сталкивался с этим.
Это был тот же звук. Но с добавлением чего-то вроде белого шума поверх этого. Верно.
Malcom: [00:18:25] Итак, я действительно экспериментировал с IR из вашего предложения. И я считаю, что это звучит здорово. Эм, но я, я, я действительно не обнаружил, что это того стоит. Гм, и у меня есть. Для этого есть две вещи.
Я думаю, что есть качественный профиль, который вы используете в Kemper. Эм, это действительно важно, правда? Ух, и я хотел бы улучшить ИК на плохом.Имеет огромное значение. Это нелепо. Но некоторые из них просто отличные снимки, и у вас все будет хорошо. И еще одна вещь: я просто не играю так много гитарных тонов со сверхвысоким усилением.
[00:19:00] Так что я не думаю, что сталкиваюсь с этой проблемой так часто, вы знаете, я, я в основном занимаюсь роком, который чище, чем вы думаете. Гм, что касается гитарных тонов, и, на самом деле, это не было проблемой, но, как мне кажется, наш трюк того стоит.Используя, ммм, и зная, как это сделать.
Бенедикт: [00:19:17] Ага. Я думаю, что это может быть проблема с высоким коэффициентом усиления, но это то, что у меня всегда было с Kemper.
И это немного расстраивало, потому что я хотел, чтобы он давал мне звук прямо из коробки, готовый к работе. И мне всегда приходилось сталкиваться с плагином или каким-нибудь ИК-загрузчиком или чем-то в этом роде. Эм, да, вот и все. И я не знаю. И еще есть кое-что, что мне еще не понравилось.
Гм, я обсуждал это с несколькими людьми, и у меня были совершенно разные мнения по этому поводу, и это качество DI Kemper. Например, если вы записываете, если вы разделяете сигнал и записываете обработанный сигнал с Kemper, и вы также записываете чистый DI на случай, если вы захотите увеличить позже, да.
Я нахожусь в двух лагерях, в основном [00:20:00] Я нахожусь в таком лагере. Не нравится, как звучит Kemper DI. Но есть люди, которые говорят, что это нормально, и им нравится, как это звучит.Я всегда чувствовал, что DI из Kemper, даже если вам нравится его патч, это похоже на то, что сквозной канал без какой-либо обработки не звучит как DI.
Так было всегда, звучало немного обработано. Это звучало немного странно. Мне просто не понравилось, как звучал DI. Понятия не имею. Это
Malcom: [00:20:24] ага. Я запускаю DI перед
Бенедикт: [00:20:27] Кемпер. Гм,
Malcom: [00:20:28] Да, я имею в виду, вроде, все в порядке.Он, он захватит DI, но … у меня … у меня есть активный радиальный DI, который наверняка надерет ему задницу. Так что я использую это перед ним для
Бенедикт: [00:20:39] конечно.
Каждый раз. Верно.
Malcom: [00:20:40] Хм, да, определенно с вами в этом. I. Да, конечно. Я действительно хотел добавить это. Я могу ошибаться в этом, но я думаю, что сейчас они встроили ИК-загрузчик в приложение Kempers. Эм, о, и для вас это, наверное, тоже ново, но сейчас есть компьютерное приложение для Кемпера.Например, [00:21:00] вы запускаете Kemper от компьютера, а не от усилителя.
Если хотите,
Benedikt: [00:21:04] но вам, но не как плагин, вам все равно нужен Kemper, вы просто управляете им с компьютера.
Malcom: [00:21:08] О да. Ага. Это просто контроллер, но я думаю, они встроили ИК-загрузчик. На самом деле я его еще не скачал, поэтому не могу это проверить, но круто.
Бенедикт: [00:21:16] Я просто, я просто говорю все эти вещи, потому что на самом деле это совершенно другая тема, но я просто говорю эти вещи, потому что я, потому что я хочу добраться до сути, как и проблемы, которые могут быть за всем этим.
Итак, у нас есть. Дело в газе, потому что мы собирались поговорить об этом позже. Это также проблема с некоторыми плагинами amp sim. Затем у нас есть качество DI, которое также всегда играет роль. Нравится, если да. Может быть, дело не в Kepmer, но, возможно, вы записываете чистый DI через Kemper, а затем повторно усиливаете его позже, и тогда это может быть немного неправильно или странно.
Таким образом, качество цифрового ввода очень важно. ИК очень важен, эта проблема со шипением – проблема многих усилителей.Так что я просто хочу добраться до этих проблем, а затем найти способы [00:22:00] их компенсировать. Да, я думаю, я имею в виду, что да,
Malcom: [00:22:04] ну, это здорово, потому что я на самом деле не использую симуляторы усилителей и, вроде того, по схожим причинам, например, ну, как Я обнаружил, что у тех, которые я пробовал, часто возникает проблема со шипением, особенно с инструментами с высоким усилением.
И тогда он становится похожим на усилитель, верно. Гм, например, там, где я не нахожу, что мне удалось заставить его реагировать как усилитель, как я хочу, так что мы как бы исходим из того же самого.Проблемы, но мы используем разные решения и разные продукты, чтобы их решить. Так что это прекрасно. Мы собираемся как бы учиться.
Ага. Мы можем это преодолеть.
Бенедикт: [00:22:36] Совершенно верно. Так что да, нам нужно выяснить, что делает звук усилителя реальным, и нам нужно выяснить, какие проблемы могут вызвать проблемы. Есть с усилком симки. Как мы уже сказали, потенциальные проблемы – это шипение, это может быть перед эпизодом, проблемы и тому подобное, DI.Эээ, это может быть ИК, потому что кабина или ИК так важны, даже более важны, чем иногда усилитель.
И затем, ммм, [00:23:00] да, похоже, есть одна вещь, которая, по крайней мере для меня, играет большую роль в том, как усилитель ощущается или как, например, ощущается ли усилитель реальным. , и в этом смысл. Воздух перемещается. Я всегда так это называю. Как ощущение, будто динамики движутся, и как гитара выпрыгивает из динамиков.
Это то, что я бы назвал трехмерным звуком по сравнению с этим плоским звуком.Это могло быть прекрасно. Например, частота, если вы говорите о частотной характеристике, может быть идеальной. Динамика могла быть идеальной. Итак, если вы ударите, эм, по струне мягко, или если вы ударите по ней сильно, у вас будут различия в искажении, даже это может быть идеальным, но все же это может звучать как бы двух, двухмерным.
Если вы не понимаете этого, это как движение динамика, знаете ли, и, ммм, это может быть частью проблемы. Я думаю, это часть того, что мы воспринимаем как настоящий усилитель.Это было похоже на то, что делает настоящий усилитель. Хм, [00:24:00] и есть способы это компенсировать. Так что ты делаешь? Если у вас есть маленькие мониторы или наушники, типичный сценарий записи дома, и вы не испытываете этого ощущения, вы просто не чувствуете, что перед вами громкий усилитель.
Что вы делаете, чтобы это произошло? Хм. Ага.
Malcom: [00:24:21] Я имею в виду, это будет лучший вопрос для вас, потому что да. Я имею в виду, я думаю, у меня действительно нет этой проблемы.Хорошо. Нам нужно сделать с тобой. У нас обоих потрясающие студийные мониторы.
Бенедикт: [00:24:32] Ага. Ага. Но я чувствую, что по-прежнему со мной, гм, для людей, чтобы сделать это более приятным или получить ощущение настоящего усилителя, я думаю, им стоит попробовать.
Гм, и это идет вразрез с тем, что вам скажут многие. Но я, я верю в это, я думаю, тебе стоит попробовать. Поиграйте с эквалайзером после симуляции усилителя и просто, и это может быть просто в вашей цепочке прослушивания. Так что, возможно, [00:25:00] может быть просто плагином на вашем канале, который вы отключили позже, но только во время игры.Так что, чтобы сделать его более увлекательным, чтобы он казался более реальным, вы можете просто найти пятно и нижнюю часть, где, эм, да, у нас есть, у вас есть это движение всего тела и динамика, и эта сила, которая происходит, когда вы делаете для Пола немые и все такое.
Это не может быть слишком много позже в миксе. Так что не беспокойтесь об этом прямо сейчас. Но если вы просто найдете то место, где вы это получите, где гитара прыгнет на вас, и вы сделаете это, эм, и просто немного увеличьте это, пока играете, и вроде бы немного увеличьте громкость.И, возможно, у вас есть как частотная характеристика, немного странная, не то, что вы хотите иметь позже в миксе, но просто пока вы играете, я чувствую, что это веселее.
И мне кажется, что это больше похоже на то, что у вас есть, когда вы стоите перед ним, настоящий усилитель. И я иногда делаю это, когда кто-то рядом со мной говорит, что просто не чувствует этого. И они этого хотят. Они говорят, что не слышат эту гитару, но она на самом деле довольно громкая, но все же они почему-то просто не чувствуют ее.
Иногда мне кажется, что я просто проворачиваю 180 или 200 или что-то в этом роде, только на стороне прослушивания [00:26:00].И внезапно, внезапно им это кажется более толстым и реальным.
Malcom: [00:26:05] Это здорово, потому что это действительно подчеркивает одно из основных основных преимуществ amp Sims. И это то, что вы можете это сделать, и это совершенно не меняет то, что вы записываете.
Вы можете просто выключить эту базу постфактум после того, как они записали, и вы можете делать с ней все, что захотите, это не было записано таким образом. Это огромное преимущество для усиления Sims прямо здесь, потому что, если вы сделаете это на маршале, он действительно будет отслеживать это.И вам придется затем повторно усилить, чтобы устранить это.
Гм, итак. Намного больше времени. Определенно копай это. Итак, вы говорили, я полагаю, вы говорили о да. Поднимите его, как бас на усилителе или симуляторе, но как насчет расположения в комнате? Гм, потому что вы также можете найти некоторые пятна. Особенно, если вы не запускаете компьютер там, где он на самом деле звучит в основном в комнате, и просто наклоните эту голову к задней стене, это, вероятно, будет правильным
[00:27:00] Бенедикт: [00 : 26: 59] против.
Совершенно верно. Абсолютно. У меня есть вот такой диван позади меня, диван позади меня. И когда ты там сидишь. На самом деле у вас есть сумасшедшие низкие частоты, которые я бы не хотел слышать, когда микширую или оцениваю звуки, но звучит впечатляюще. И поэтому, э, я всегда говорю людям: вернитесь туда, сядьте и поиграйте, потому что, эм, в любом случае это мудрый поступок, отойти от экрана компьютера к мониторам и компьютеру, потому что вы ” Будет меньше помех, меньше проблем с шумом.
Гм, а Б у вас именно то, что вы только что описали. У вас есть место в комнате с этим. Это преувеличенно большой, низкий уровень, и играть в него сразу же веселее. Эээ, если вы сидите там, вы также можете совместить это с наушниками. Вы можете носить наушники, так что вы действительно слышите все детали.
Но мониторы в комнате по-прежнему должны быть очень громкими, чтобы получить ощущение низких частот, и да. Все сводится к тому, что вам просто нужно создать среду и ситуацию мониторинга, максимально приближенную [00:28:00] к тому, к чему вы привыкли.Когда вы стоите перед усилителем, мы говорим именно об этом.
И обычно это более низкий уровень, чем то, что в итоге будет записано. Это одно, это связано с объемом. Гм, и ты просто должен развлечься. Я думаю, что это действительно так. На самом деле это полдела, если играть весело, громко, жирно, если оно имеет низкие частоты, вы сразу почувствуете себя лучше по сравнению с крошечными динамиками, низкой громкостью, менее низкими частотами.
Да.Только не так весело.
Malcom: [00:28:29] Теперь это на самом деле в конце нашего списка, потому что я написал его прямо перед тем, как мы начали, но я думаю, что это следует обсудить сейчас. И идея состоит в том, что гитарный тон состоит не только из гитары, но и из всех других инструментов в миксе. Таким образом, барабаны и бас, в частности, многое добавляют к тому, что мы воспринимаем как звук гитары, особенно бас-гитары без бас-гитары и хорошей бас-гитары.
Твоя, твоя гитара звучит довольно слабо.Так что, если вы не привыкли слышать, как это звучит на самом деле, вы можете [00:29:00] почувствовать, что ваш симулятор усилителя такой же слабый, верно. Но может все нормально. У него просто нет большой бас-гитары. Верно. Так что в это нужно вложить немного опыта.
Просто знать, как может звучать изолированный гитарный звук. Хм, но я думаю, что это связано с тем, что ты сейчас говоришь, Бенни, в том смысле, что если ты записываешь гитару перед басом, что Бенни рекомендует, ммм, и у тебя нет этой основы, чтобы любить, чувствовать себя хорошо , вам нужно компенсировать усилитель симулятора, и вы должны поднять этот нижний предел, чтобы все звучало слишком громоздко.
Правый. И это поможет с вашим восприятием.
Бенедикт: [00:29:37] Полностью. Это могло быть частью проблемы. Собственно, если вы отслеживаете без базы. Иногда мне нравится басовый скретч-трек или программная база, чтобы не столкнуться с этой проблемой. Но это правда. Если вы отслеживаете без бас-трека, всего с двумя барабанами, он может звучать слабее, чем на самом деле не окончательная версия.
Ага. Это могло быть частью проблемы.Полностью. Определенно. Гм, кроме этого, иногда [00:30:00] у этих симуляторов действительно есть эта проблема. Просто, часто это просто, это вопрос цепочки мониторинга и прослушивания, но некоторые, некоторые симуляторы усилителей действительно звучат немного, двумерно или плоско. Это может быть так.
И если это так, то еще и эти тонкие, так что и усиления, которые вы можете сделать, не могут быть выполнены при микшировании. Это можно сделать, если вы обязуетесь выполнять отслеживание, но просто находите то место в частотном спектре, где действительно происходит движение динамика.Гм, и увеличивая это, давайте немного усилим это немного, чтобы сделать что-то, что звучит немного ровно, более захватывающе и более трехмерно.
Итак, я обнаружил, что в прошлом довольно часто, не так часто, я делал это чаще, чем с настоящими усилителями, если честно. Так что я думаю, что здесь может быть проблема с некоторыми симуляторами усилителей, которые я просто чувствую, это звучит несколько плоско, и я хочу добавить это ощущение движения воздуха. Так. Если это проблема с тем, что вы используете, просто небольшое усиление, например, два D, два DB или что-то около 200, 150, что-то, что, в зависимости от настройки и всего остального, [00:31:00], но это может действительно сделать гитары более громкими, особенно во время Palm Palm Utes.
Эээ, так что это один трюк, который я, я действительно очень часто использую. Гм, я иногда сокращаю это, чтобы не сделать его квадратным или квадратным. Гм, мутно, но позвольте лишь крошечному узкому увеличению вокруг этого. Эта область действительно ему очень помогает. Ага. Мне это очень помогает. Итак,
Malcom: [00:31:21] Да, мне очень нравится эта идея.
Бенедикт: [00:31:22] Хорошо. Гм, еще одна распространенная проблема – это газировка.
Мы уже говорили об этом, ммм, что это может быть проблемой.Технически я не знаю, почему это происходит, но это проблема. А также. В конечном итоге все сводится к тому, что я уже сказал. В другом эпизоде кабина так важна, как и настоящие усилители. Это было похоже на аналоговые усилители и кабины. Кабина очень важна и ИК, это просто виртуальная кабина, а иногда и не ИК.
Иногда это просто кривая фильтра или симуляция динамиков, встроенная в симулятор усилителя. Гм, и в зависимости от того, как они звучат и как они выглядят, это могло быть немного странно.Это не могло быть каким-то настоящим, настоящим. [00:32:00] Такси. И что делает воздух, через который должен пройти звук, прежде чем он попадет в микрофон и все такое.
Так что это может быть дополнительный слой шипения высокого класса, который будет отфильтрован в реальном сценарии жизни. Так что да, это проблема с некоторыми симуляторами. Теперь проблема в том, что многие люди используют обрезание высоких или низких частот и просто фильтруют верхние частоты до тех пор, пока они не перестанут шипеть.
Мне это совсем не нравится.По крайней мере, в большинстве случаев, потому что для меня это всегда звучит отфильтрованно. Там, где находится фильтр, есть странный резонанс. И еще, я не знаю, это кажется скучным. Мне нравится открытый звук без использования фильтра низких частот. Так что я иногда, если я не могу использовать другой ИК или просто, если я не могу решить проблему таким образом, я просто вырезаю эти высокие, ммм, его шипящие частоты, но, но обычно.
Обычно я пытаюсь найти IR, который просто работает, потому что есть некоторые, которые работают, и я, [00:33:00] Я, это то, что я пытаюсь рассердить, здесь просто поиграйте с МС.Если у вас есть симулятор усилителя, который позволяет отключить имитацию динамика, просто попробуйте это. Получите третью сторону. ИК загрузчик, есть бесплатные, отличные.
Ну, возьми кучу IR. Они дешевы. Есть и бесплатные, и просто поиграйте с ними, и посмотрите, какая разница, потому что это действительно очень большая разница. И ваши проблемы с кулаком могут исчезнуть. Иногда это делают встроенные кабины. Усилитель может звучать великолепно, но это всего лишь кабины.
Я испытал историю раньше, когда работал с группой, которая использовала программное обеспечение для стручков почти 20-летней давности, например Line six pod.И мне показалось, что это просто ужасный усилитель сим. Но когда вы используете это с. Отличные IR, даже эта старая вещь может реально звучать, может звучать очень-очень круто. Так что да. Ага.
Малком: [00:33:46] Ага. Я думаю, что это был один из самых больших скачков, в amp sims было похоже на осознание того, как, насколько хороший ИК-порт меняет вещи, хм, это то, что подходит, раньше было большей проблемой, чем оно [00: 34:00] сейчас.
Я думаю, также с современными усилителями Sims, такими как amp Sims.Их качество увеличилось более чем вдвое за последние 10 лет. Гм, они, они намного дальше, и я, я действительно хочу взять пару новых, которые вышли, потому что я вижу результаты в песнях, которые слышу, гм, я просто не могу поверить, что они записали это без.
Без какого-либо оборудования, вы знаете, они просто вошли прямо в интерфейс и запустили его через этот плагин. И это звучит потрясающе. Так что да. Хм, но я думаю, главное, что вам нужно просто запомнить, это то, что нет причин не решать эту проблему.Это разрешимо. Итак, в случае с кемпером, я обычно просто ищу другой профиль.
Пока я не найду что-нибудь, что меня не раздражает. Это действительно похоже на мое, мое решение. Гм, на этом гитара, гитара, потому что гитара будет взаимодействовать с каждым профилем в моем случае по-разному. Верно. Так что с, ммм, Sims усилителя, это может означать, что нужно попробовать пару разных симуляторов усилителей или [00:35:00] разные усилители внутри SIM-карты, но затем, что почти все приличные усилители В наши дни у симов есть ИК-загрузчики или, ну, кабины, по крайней мере, я бы сказал.
И если вы можете выключить его отлично и загрузить какие-то другие, всегда есть решение.
Бенедикт: [00:35:15] Полностью. Нет, кстати, что такое НП, я очень быстро объясню. ИК обозначает импульсную характеристику, и это снимок. Это такой же снимок, как и профиль Кемпера. По сути, это снимок, снимок кабины, микрофона и цепочки записи за ним.
Итак. Вы просто, если он отключил симуляцию динамика на вашем усилителе, у вас останется голова без кабины.И это звучит очень круто. Конечно, фильтровать не обязательно. Это все идет вверх и звучит очень странно. И если вы поместите кабину позади этого, гм, естественная кабина гитары имеет этот высокий уровень отката, так что он просто идет до тех пор, пока.
Шесть семь, восемь К, что-то в этом роде. А потом довольно круто скатывается. Гм, а потом ИК, это просто захват этого. Он делает [00:36:00] то же самое. Вы можете использовать кривую фильтра вместо IR, есть разные способы сделать это, но IR – это не только кривые фильтра.Это микрофон, расположение микрофона, используемый предусилитель, как и вся цепочка.
По сути, это просто снимок записывающей цепочки. Таким образом, у вас может быть свой усилитель, а затем вы можете переключаться между различными кабинетами и настройками микрофона, и в зависимости от того, насколько хорошо они выполнены, у вас есть фаза или ее нет. И это в основном все. И это действительно меняет всю ситуацию, меняет почти все.
Итак, да.
Малком: [00:36:35] Ага.Очень важный.
Бенедикт: [00:36:37] Да, именно так. Хм, ладно. Итак, IRs и fizz, я думаю, что первая проблема в основном сводится к IRS. Вот почему мне нравится то, как я стараюсь, да. Ответьте на первый вопрос ответом IR. Гм, еще одна вещь, я думаю, что хороший настоящий усилитель делает его динамичным и каким он ощущается, когда вы играете на нем.
Итак, как он реагирует на вашу [00:37:00] игру, на это также жалуются многие люди с Kempers или amp Sims? Они говорят типа «Особенно с симуляторами усилителей, с плагинами», они говорят, что это не так, как будто они настоящие усилители.Верно. И на этот счет у меня тоже есть теория, и я считаю, что все сводится к постановке.
Я считаю, что многие люди посылают сигнал в симулятор усилителя, что он, возможно, слишком горячий. Так что, даже если они выбирают слегка, это просто не так чисто, как раньше в их усилителях, всегда искажается. И когда они бьют сильнее, он все еще искажается, но, может быть, становится немного мутнее, но не так динамично. Так.
Что вам нужно понять, так это то, что когда вы подключаетесь к настоящему усилителю, у вас есть громкость на вашей гитаре, а затем у вас есть усиление на усилителе, предусилителе, а затем вам нужно выполнить мастеринг, возможно, в зависимости от на усилителе, который вы используете.Вот и все. И, может быть, если педали перед ним, но у вас есть настоящая оснастка.
Если вы играете в свой интерфейс и используете плагин, у вас есть дополнительный регулятор усиления, и это предусилитель вашего интерфейса. И не имеет значения [00:38:00], где, например, как вы это установите. Это не. Хм, да, это должно быть, это должно быть правильно. Постановка усиления должна быть правильной, потому что вы можете это использовать. Вы можете злоупотреблять этим так же, как вы можете использовать усилитель перед усилителем, который будет перегружать усилитель.
Если вы его используете, вы можете использовать усиление предусилителя. Если вы крутите его, вы пошлете много уровня, и усилитель эмпатии не будет реагировать так, как если бы вы правильно взяли гитару. В. Гм, или вы можете направить в усилитель очень тихий сигнал, и он также будет звучать по-другому, и вам придется проверять их больше, чем вы привыкли в реальном мире.
Итак, у вас есть этот дополнительный пункт подобного шага, этот дополнительный, ммм, да. Получите уровень, который вам нужно контролировать. И очень важно помнить об этом, и я чувствую, что это проблема многих людей, которые на самом деле не понимают прироста, не понимают его постановки и не записывают уровень, имитирующий реальный.
Гитарный уровень, который входит в настоящий усилитель.
Malcom: [00:38:56] Да, это огромно. Я, это может быть одна из самых важных вещей, которые [00:39:00] следует вынести из этого эпизода, – это то, что уровень, который вы отправляете в симулятор усилителя, будет изменять гитарный тон. Очень. И люди все время делают это с настоящими усилителями, даже не осознавая этого, они держат педаль наддува и думают: «Ой, как будто это толстеет».
И это похоже на то, что теперь вы бьете усилителем сильнее.Это еще больше искажает. У него меньший динамический диапазон. Верно. И это все изменит. Так что это то, что вы, возможно, уже делаете, не осознавая этого. Гм, но. Вы можете сделать это с усилителями Sims, особенно из-за этого дополнительного предусилителя, и Кемперс должен вкратце коснуться этого.
Я так думаю. Кемпер просто ощущается как другой усилитель. Как только вы к нему привыкнете, вы начнете играть на нем, как на собственном усилителе. Гм, и эти разные профили на самом деле не сильно меняют ощущения от этих усилителей.Но, как вы уже упоминали ранее, под капотом есть некоторые элементы управления, такие как провисание и тому подобное, в которые вы можете войти и настроить, чтобы попытаться заставить его реагировать по-другому.
Эээ, но это [00:40:00], это слишком много, чтобы вдаваться в подробности в этом эпизоде, достаточно сказать, что если у вас есть Кемпер, вы должны полностью покопаться в этом материале и узнать, как его использовать.
Бенедикт: [00:40:06] Да, полностью. И у вас нет такого контроля с большинством симуляторов усилителей. Гм, есть некоторые, которые дают вам больше контроля, но большинство из них не могут контролировать то, что находится под капотом, поэтому вам нужно сделать это правильно.
Вам нужно получить стадию усиления, верно? Ага. По сути, это просто усилители, тональный концентратор STL, который мне сейчас очень нравится. У них есть некоторые дополнительные элементы управления, к которым вы могли бы привыкнуть с некоторых реальных усилителей. Так, например, у них есть общий контроль резонанса, который делает в основном то, что я сказал, с повышением низких частот.
Если вы проворачиваете, вы получаете этот дополнительный low-end, но он не похож на ACU. Просто это, да, это умф. Я не знаю, как это объяснить.Это похоже на низкие частоты, которые вы чувствуете больше, чем слышите. И шаги, которые вы получаете, некоторые усилители похожи на некоторые настоящие усилители с контролем глубины. Гм, особенно high-end, например, high-end усилители имеют регулятор глубины или резонанс, который иногда называют.
И плагин [00:41:00] STL Tonehub теперь имеет этот резонансный, этот глобальный резонанс, управляемый. И это супер круто. И я обнаружил, что когда я не использую это, когда все это выключено влево, это звучит немного плоско.И когда я, как только я начинаю набирать это, или иногда даже действительно проворачиваю его, это дает мне. Реализм и то, как я хочу, чтобы усилитель реагировал.
Так что да, некоторые усилители дают вам некоторый контроль над этим, но в основном это усиление постановки. Ага. Но если у вас есть контроль глубины или резонанса, попробуйте, попробуйте поиграть с этим. Это полная противоположность или не противоположность, но, может быть, вы понимаете, о чем я? Если я объясню это таким образом, противоположным тому, что делает ручка присутствия, присутствие теперь дает вам вот эти, эти гармоники и это, этот верхний предел без необходимости набирать максимумы.
Гм, это проясняет. Делает его более настоящим. Делает его более открытым. Гм, то же самое в нижнем диапазоне не так влияет на регулятор резонанса или рабочий стол, да. Верно. Хорошо. Так что получите постановку. Эээ, это подводит нас к другой проблеме, которая, я думаю, [00:42:00] может возникнуть у людей. И это если вы записываете, если вы привыкли записывать с интерфейсом, а не с настоящим усилителем, возможно, вы этого не сделаете.
Может быть, обращай внимание на то, что перед ним. Гм, так что кабели, гм, качество самого DI, потому что, если вы подключаете к усилителю, это просто ваша гитара, а затем вам нужно вводить, но ваш интерфейс может просто изменить сигнал DI.Он преобразуется, и в нем должна быть преамбула инструментального предусилителя.
Так что вы отправляете в SIM-карту усилителя. Не обязательно, чтобы это было одно и то же. Это не обязательно то же самое, что вы отправили бы на настоящий усилитель. Таким образом, качество вашего DI, кабеля, который вы используете, и всего, что до фактического симулятора усилителя, также играет огромную роль. Так что да. Гм,
Malcom: [00:42:46] Да, вы записали качество DI, а затем я записал короткие участки кабеля, но это одно и то же, потому что одно влияет на другое.
Гм, поэтому я рекомендую людям использовать короткие кабели. Чем короче, [00:43:00], кабель, тем меньше будут потери сигнала. Это будет более сильный сигнал, и есть что-то вроде буферов и снаряжения, до которых можно добраться. Чтобы улучшить это. Гм, а затем следующее – запустить это в высококачественный DI, о котором мы уже упоминали в этом эпизоде, но высококачественный внешний DI почти всегда будет лучше, чем то, что встроено в ваш интерфейс.
Я имею в виду, технически вы, если у вас есть один, вы должны стрелять обоими и посмотреть, что вы думаете, но вы, вероятно, обнаружите, что у вас есть более сильный, более полный. Сигнал I CA DI захват. Если вы используете высококачественный внешний DI, есть ли у вас любимый DI Бенни?
Бенедикт: [00:43:40] Угу, да, у меня есть деревенский человек типа восемь 85. Эм, да, это классика.
И это действительно здорово. Я люблю это. Мне тоже нравится. Хм, маленькие лаборатории. Как это называется? Красный глаз.Да, у меня этого нет, но я использовал его пару раз, и я всегда находил его, находил действительно отличным, но я [00:44:00] также добился большого успеха только с радиальными что есть, но здесь я должен быть осторожен.
Есть один Radial, который мне абсолютно не нравится, потому что его импеданс недостаточно высок, чтобы он действительно работал как DI, как ни странно. Этого не должно быть, я вообще-то, но это другое дело. Гм, но большинство радиальных профессионалов, когда-то более дорогие, всегда звучат великолепно.И, мм, да, что интересно, мы провели несколько перестрелок в Академии, лучшие студенты, чем я, которые прохожу лучшую версию моего курса.
И они купили, некоторые из них купили DI. После того, как я порекомендовал им это, и они сняли там интерфейс, предусилители и DI с блоками DI, мы получили очень разные результаты. Так что некоторые из них были абсолютно, абсолютно. У некоторых из них были результаты, когда было абсолютно ясно, что это спальня, но я помню один особенно, когда человек.
Проведя перестрелку, я думаю, что [00:45:00] Palmer DI мне действительно нравится и рекомендую, потому что это дешевый бюджет. ДИ, это здорово. Гм, он сравнил это со своим интерфейсом Behringer, самым дешевым, самым дешевым, который у них есть, и отправил мне результаты. Они сделали слепой тест, и это было очень тяжело.
Очень, очень сложно сказать, что именно так, что дешевый интерфейс отлично справился с DI, но да, вы должны выстрелить, чтобы знать, что вроде бы нас могут преподнести сюрпризы, и в этом случае со мной все будет в порядке используя этот интерфейс как DI, хотя он был очень дешевым.Так что мало ли.
Малком: [00:45:33] Ага.
Только не делайте предположений, что ваш дорогой интерфейс имеет хороший диск, да, потому что. Может быть, там они сэкономили деньги, понимаете? Хм, тебе нужно просто, пока ты не поэкспериментируешь, ты действительно не знаешь. Ага. Я понял, что это радиальная X конопля, ну или нет, это название рампы. Но это похоже на эквивалентную модель, э-э, активный DI и w I, у меня раньше был, ну, у меня все еще есть зеленый JDI pro, который является отличным пассивным DI, но пока я не получил этот активный, когда я [00:46 : 00] на самом деле не знал, что мне не хватает, это было похоже на то, что мой гитарный тон стал на 15% лучше.
Ну вот.
Бенедикт: [00:46:06] Так что, если это не так, и поэтому вы не делаете, ммм, я имею в виду, вы не делаете столько тяжелых вещей. Поскольку активные блоки DI не работают, когда вы используете их активные звукосниматели с большим количеством подъемов, они имеют тенденцию зажиматься. У них нет запаса по высоте. Для этого приложения вам понадобится отличный пассивный.
Малком: [00:46:21] Ага.
Вот тогда я вернусь к зеленому. Да, конечно. Ага, ну, ну, знаете, в моем кошельке просто куча Les Paul, Telecaster и прочего.Так что это все эти пассивные звукосниматели и, ну, да, получение активного DI-бокса было отличным ходом.
Бенедикт: [00:46:35] Полностью. Ага. Таким образом, вся цепочка перед интерфейсом имеет большое значение, и проблема может быть полностью в этом.
Итак. Вам просто не нужно ни о чем из этого думать, если вы просто подключаетесь прямо к усилителю, но если вы подключаете его к своему интерфейсу, вы должны думать об этом. Качество Di, длина, короткие кабели всей цепочки – это всегда отличная идея, даже для настоящих усилителей, но только качество всей цепи до того, как интерфейс просто сделает.
[00:47:00] Гм, это имеет значение. И это может быть то, что, типа, заставляет вас думать, что amp sim не так хороши. Это может быть до того, как проблема может быть до amp sim. Ага. Я думаю, тебе стоит попробовать. Вы можете, и это также то, что вы можете делать в цифровом мире с усилителями sim только в том случае, если все, что мы только что сказали, не дает вам результатов, к которым вы стремитесь.
Попробуйте манипулировать диодом до того, как он попадет в усилитель, потому что это свобода.Это свобода, которая у вас есть за дверью. Вы можете поставить любой плагин перед симулятором усилителя. Так. Если вам не хватает какой-то сетки, например, ну, если вам просто кажется, что усилитель звучит слишком чисто, чтобы стерильно, до цифрового или чего-то еще, попробуйте клипер перед симулятором усилителя, попробуйте тонкий плагин овердрайва, попробуйте компрессор, попробуйте все, что хотите, перед симулятором усилителя.
И вдруг ваш симулятор усилителя может звучать более сурово. [00:48:00] У Dirtier может быть больше среднего диапазона, чего бы вы ни чувствовали.А это может добавить реализма или вы бы восприняли это как реальное? И это может избавить вас от ощущения, будто вы смотрите на чистый цифровой звук.
Малком: [00:48:13] Ага. Это суперсила усилителей Sims – это то, что вы можете сделать еще до того, как ударите его.
И мне это нравится. Хм, я, я имею в виду, технически это тоже верный рецидив, потому что вы могли бы сделать то же самое перед повторным преобразованием в один, но это всего лишь фактор удобства и скорость рабочего процесса. Вероятно, почему и Бенни, и я так любим эти продукты, заключается в том, что мы собираемся пройти через кучу различных вариантов и найти что-то, что отлично работает.
Если бы мы попытались проделать то же самое с настоящими усилителями, мы бы занимались этим весь день и, возможно, не имели бы инструмента для этой работы. Верно, потому что это означало бы, что нам нужна огромная библиотека настоящих усилителей, чтобы попытаться найти тот, который это делает. И [00:49:00] это ненастоящее, менее реалистичное ожидание от вашего снаряжения.
Гм, даже если у вас есть 10 ампер, что очень много для комнаты, занимающей много места, и сигнальные цепи, чтобы настроить их все, чтобы вы могли реалистично сравнить их там, все еще есть очень малая вероятность того, что у вас будет подходящий инструмент для работы.
Бенедикт: [00:49:18] Ага. Совершенно полностью. Эээ, это тоже то, что стоит упомянуть, и я думаю, что в основном весь смысл этого и все, эм, да, мы пытаемся донести то, что я думаю, что мы не смотрим на Малькольма, а я не просмотреть amp sims или kEMPERS.
Предполагается, что это то же самое, что и усилитель, это просто разные инструменты, у которых есть звук, и у нас всегда есть видение и тон, которых мы хотим достичь.Мы слушаем, какие звуки мы используем. И затем мы пытаемся заставить эту штуку издавать звук, который мы хотим, неважно, что это настоящее, фальшивое, искусственное или что-то еще, просто вы просто пытаетесь заставить его звучать так, как мы хотим.
И сразу ты. [00:50:00] Преодолей это. И если вы не пытаетесь имитировать реальную вещь, это просто еще один инструмент, который может работать так же хорошо. Так что, если в усилителе не хватает симулятора, просто найдите способ обойти это. Просто поставьте перед ним заглушку.Просто. Подправьте его немного по-другому. Эм, попробуйте поэкспериментировать с усилением, постановкой, поразите по-другому.
Сделайте что-нибудь, чтобы он работал так же, как с настоящим усилителем. Если вы подключитесь к настоящему усилителю и да, звук вам не сразу понравится, вы просто начнете настраивать его. Вы начинаете добавлять педаль, вы начинаете добавлять лампу овердрайва. Крикун, ты играй. Вы начинаете возиться с громкостью на своей гитаре или. Эм, вы возитесь с усилением и соотношением между усилением и основным выходом, и все, что вы делаете немедленно.
Если вы используете настоящий усилитель, сделайте то же самое с симуляторами усилителя и не ожидайте, что он будет таким же, как настоящий усилитель, просто посмотрите на него как на то, что он есть, и постарайтесь сделать так, чтобы он звучал как можно лучше. . И тогда вы обнаружите, что это просто другой способ добраться туда. И это в основном все.
Malcom: [00:50:59] Ага, [00:51:00] правда. Для меня это просто вопрос скорости, скорости и опций, понимаете?
Хм, я просто не мог получить бюджет для каждого проекта.Я работаю над тем, чтобы целыми днями стрелять из гитарных усилителей, из которых через 10 минут я могу стрелять. Прямо как десятки усилителей. И как это случилось недавно, Бен подумал: ну, а стоит ли нам сравнить пару? Я подумал, ну, я уже сделал это, пока он сидел и ждал, и выпустил пять разных усилителей.
Звучит здорово. Нам просто нужно немного подправить отсюда, и у нас все хорошо. Вроде это так круто. Итак,
Бенедикт: [00:51:31] верно. Да, полностью. Это и нет, это не что-то ленивое или просто более простой способ.Это действительно полезно для ваших проектов, потому что вы можете сделать это немедленно, пока у вас еще есть видение и вдохновение.
Как только у вас есть представление о том, что вы собираетесь делать, вы можете немедленно действовать в соответствии с этим. Но если у вас есть такая идея, и вам сначала нужно многое исправить, и вам нужно нагреть лампы на усилителе, и вы будете делать все то, что вам нужно, с настоящим усилителем. [00:52:00] Момент вдохновения может уйти.
Вы, возможно, даже не знаете, что вы собираетесь делать, и это нравится, поэтому я думаю, что это тоже вещь, и ваши песни, и ваша, вся пластинка выигрывает от простой возможности двигаться интуитивно и быстро.И так что да, это все еще, это благословение. Это просто благословение иметь эти инструменты, даже если больно признавать, что они так же хороши, как и действительно дорогие вещи, но это правда.
Они просто классные. Хм, да, я имею в виду, подытоживая, то, как мы, мы прошли через этот эпизод, немного сбивало с толку, потому что это настолько сложно описать и субъективно, но просто для того, чтобы привести это в порядок, снова . Итак, у нас есть все, что было до кемпера или amp sim.Так что у нас есть.
Кабель, используйте короткий кабель. Это номер один. Тогда, если вы используете свой интерфейс, это не такая уж большая проблема с кемпером. Если вы используете интерфейс, используйте, попробуйте использовать блок DI и выстрелите им в свой интерфейсный предусилитель, и тогда посмотрите, что вам больше нравится [00:53:00]. Получите усиление постановки. Верно? Итак, уровень, который вы отправляете в компьютер, попробуйте сделать так, может быть, посмотрите, откалиброван ли ваш усилитель определенным образом.
Может быть, они даже порекомендуют пройти определенный уровень или просто поэкспериментируют с ним.Вероятно, они подойдут. Да. Эм, просто поиграйтесь с этим. Эм, найдите золотую середину, найдите место, где у вас будет такая же динамика, при которой вы получаете такую же динамику при игре, которую вы ожидаете от усилителя, а затем попробуйте.
Манипулирование DI, может быть, если это то, что вы собираетесь делать, если бы вы хотели, если бы вы использовали скример с трубкой в реальной жизни, но у вас его нет, вы хотите сделать это в цифровом виде и найти трубку screamer, или просто используйте клипер или овердрайв, что-то в этом роде.И посмотрите, понравится ли вам это. Эм, попробуй встать в очередь к ди.
Если вам кажется, что он квадратный, слишком яркий или что-то еще, попробуйте поставить DI в очередь. Попробуйте отфильтровать его. Гм, до усилителя, потому что это уже заставляет отсутствующих реагировать по-другому. Если вы считаете, что он слишком громоздкий, тупой или [00:54:00] или что-то еще, попробуйте низкий крой. Эм, так что да, качество Di D, как звучит DI, а затем на самом усилителе, попробуйте поиграть с низкими частотами, которые для меня являются частью реализма, как я сказал, постарайтесь избавиться от шипение.
С правильным IRS или и, или IQ, но я бы всегда начинал также с положения IR или виртуального микрофона. Некоторые, некоторые плагины также дают вам возможность перемещать микрораунд, играть с этим. Верно. И пока вы делаете все это, перестаньте думать об этом как о реальной вещи, просто о себе, как о том, что есть на самом деле. И прекратите сравнивать, пока вы занимаетесь этим.
Просто постарайтесь добиться от этого наилучшего звука. А затем, когда вы закончите и сделаете все возможное, вы сможете сравнить, если хотите.Но просто используйте инструмент таким, какой он есть, и найдите в нем то, что в нем круто. Избавьтесь от того, что в этом не круто. И вы получите что-то полезное.
Абсолютно уверен.
Malcom: [00:54:53] Да, определенно. Это не то, что мы начали, это как заставить его звучать так же хорошо, как настоящие усилители, но дело даже не в этом [00:55:00]. Просто как сделать. Как добиться хорошего гитарного звука. Гм, и вы можете использовать эти инструменты или настоящий усилитель. Для нас это не имеет значения, но, ну, вы сможете справиться с работой и тем, и другим.
Гм, и этому навыку нужно научиться. Так что, если вы отлично справляетесь с получением хороших гитарных тонов с настоящими усилителями, то теперь вам нужно сосредоточиться на том, в чем вы не очень хороши, например, на получении гитарных тонов с помощью amp Sims. Это то, что я как бы рецидивировал, и КЕМПЕР понял. Так что теперь мне пора разобраться.
Бенедикт: [00:55:30] Да, полностью. И вы будете, потому что вы войдете в это с правильным мышлением, вы будете рассматривать это как другой инструмент.Вы будете играть с ним, пока не узнаете, что в нем крутого. И тогда вы заставите его работать. Как будто все дело в этом. А с Kemper, может быть, краткое изложение того, что вы бы сделали или что порекомендовали бы тем, кто использует Kemper.
Если их не устраивают звуки.
Малком: [00:55:51] Ага. Ага. Потому что я думаю, что мой рабочий процесс довольно проверенный и верный. Итак, сначала подключите короткий гитарный кабель прямо к моему активному DI в [00:56:00] моем корпусе или DI.Гм, если вы не отслеживаете DI, вы можете просто войти прямо, но все же использовать короткий кабель. И мы всегда рекомендуем брать ди.
Так что вы можете взять Di и затем перейти из DI в кемпер. И тогда вам нужно, чтобы программное обеспечение Kemper было установлено на вашем компьютере, потому что вы собираетесь выпускать усилители. Быстрая скорость. Итак, когда вы пойдете в кемпер, вы узнаете, какие профили вам нравятся.
У вас появятся некоторые фавориты, вы знаете, и вы скажете, хорошо, ну, это действительно не нравится, звучит здорово.Я знаю это. Так что у вас точно есть с чего начать. Гм, но я обычно спрашиваю клиента, что мы ремонтируем? Но вроде, хм. Fender из твида, ну ладно, тогда у меня есть подобие папки на крыльях.
Я установил все свои любимые тона крыльев. И я собираюсь начать там копаться. И пока они играют, мне нравится буквально стрелять по ним. Сделайте небольшие пометки в голове, какие из них мне понравились. А затем мы сужаем его до трех. Я такой, хорошо, давай попробуем это.Мы записали эту песню, эту, эту, эту.
[00:57:00] А потом выбираю одного. И вот тогда я впервые начну хвататься за ручки. Как будто это действительно так, мы всегда говорили об этом раньше, но разные стартуют как можно дальше от усилителя. Так что сначала игрок, не так ли? Мы говорили об этом, и о картинках, и о струнных, и тому подобном.
Теперь мы все это знаем. А еще есть гитара. Так что с гитарой кстати уже разобрались.Гм, и тогда это будет усилитель, а не ручки усилителя, это будет настоящий усилитель. Вот что я делаю, когда снимаю через разные профили в кемпере, по сути, снимаю разные усилители или разные настройки усилителей, ммм, в некоторых случаях, но это будет иметь большее значение, чем все, что я мог сделать с поворотными ручками.
И как только я получу это право. Мне действительно не нужно так сильно прикасаться к ручкам, вы знаете, я захожу туда, и, э, часто для меня есть что-то вроде ручки четкости внутри кемпера.Это немного скрыто под капотом, и это действительно открывает или подавляет многое [00:58:00]. И это помогает создать ощущение того реализма, к которому мы стремимся.
А потом, да, оттуда не так много. Иногда я хватаю педаль, иногда нет. Это действительно мой рабочий процесс, и он должен быть выполнен за пять-десять минут.
Бенедикт: [00:58:14] Супер круто, что я думаю, мне нужно сказать еще одну вещь сейчас, потому что то, что вы только что сказали с очередью, а вы этого не делаете, вы в основном стреляете из Хьюза и вас Я думаю, что не слишком возиться с ручками – это тоже отличная рекомендация.
И это может просто заставить меня задуматься, что может быть проблема, с которой люди сталкиваются, когда они используют симуляторы усилителей, потому что. С одной стороны, здорово иметь весь этот дополнительный контроль на компьютере, но с другой стороны, возможно, люди просто слишком выстраиваются в очередь и перерабатывают вещи только потому, что они не могут, когда они используют Sims amp.
Таким образом, они могут не найти правильную настройку, правильный ИК-порт и подходящую SIM-карту, а затем просто использовать это. Они могут найти то, что они могут взять. Что бы ни случилось раньше, или они могут выстрелить кучкой в паре, а потом возьмут что-то, что близко [00:59:00] к тому, к чему они стремятся.А потом они могут набрать IQ или действительно захотеть поднять много вещей или вырезать много вещей и по-настоящему вырезать все, что выходит из SIM-карты.
И это может на самом деле привести к тому странному результату, что у них вообще такая большая гитарная запись, я думаю, это что-то. Где необработанная запись должна быть довольно близка к тому, что вы хотите услышать на записи. Это не то же самое, что с барабанами, где у вас есть эти сырые барабаны, сделанные в современных постановках, они сильно обработаны и звучат совершенно иначе, когда это сделано, потому что это может случиться с барабанами.
С гитарами вы должны быть намного ближе. После записи не должно требоваться тонны острых ощущений, чтобы заставить его работать. И если он все же попробует другой профиль, попробуйте другой усилитель, попробуйте другой ИК-порт, но не пытайтесь добиться этого с помощью сигнала, потому что это не сработает. Это будет звучать странно и искусственно, и на самом деле это тоже может быть частью проблемы.
Malcom: [00:59:48] Ага, гитары. Не нравится GQ, если быть честным, они, понимаете, я имею в виду, что это происходит постоянно, конечно, но, если мне не нужно его использовать, я очень счастлив.И это то, к чему я стремлюсь. Я [01:00:00] обычно не прекращаю поиски усилителя внутри кемпера, пока не почувствую, что мне не нужно его менять. Как будто я стреляю из-за того, что мне не пришлось его менять.
И это вроде, хорошо, звучит здорово. Мы, мы в порядке. То, как они будут играть, будет иметь большее значение, чем если бы я добавил немного верха.
Бенедикт: [01:00:16] Совершенно верно. И последнее, о чем мы здесь вкратце упомянули, – это, возможно, проблема с шумом.Поэтому, если вы используете amp Sims или кемпер, вы, скорее всего, сидите перед экраном, мониторами или компьютером.
Итак, и я также видел это много в Интернете на форумах, где люди спрашивали о проблемах с шумом с усилителями Sims. И я чувствую, что отчасти это связано с тем, что они сидят перед своим оборудованием и думают, что это возможно. Это не идеальные кабели, дешевые кабели – это что-то. Так что просто попробуйте отвернуться со своей гитарой от всех электрических вещей вокруг вас, попробуйте увеличить расстояние, потому что шум в такой среде действительно может быть проблемой.
Итак, это только одна вещь, которую я хочу добавить сюда еще раз: если это ваша проблема, вы чувствуете, что получаете много шума с усилителями Sims. Возможно, когда вы [01:01:00] записываете, вы стоите в репетиционной комнате перед своим усилителем. А когда вы записываете с усилителем, sims просто сидит перед экраном вашего компьютера.
Так что это даст вам совсем другое. Уровень шума, пола, помех и всего, что уловит ваш пикап. Так что просто попробуйте повернуться на стуле и найти место, где у вас будет меньше всего шума, например, меньше всего шума, верно? Гм, да, это тоже рекомендуется.
Малком: [01:01:20] Ага. Если у вас есть звукосниматели с одной катушкой, их будет много,
Бенедикт: [01:01:25] вроде, мне нравятся эти звукосниматели P90.
У них есть один из моих любимых звукоснимателей на планете, но они такие супер шумные. Вы не можете использовать их где-либо рядом с чем-либо электрическим. Так что да. Гм, так я думаю, что это все. Я немного сбиваю с толку, но думаю все же ценный эпизод. Это просто сложная тема для объяснения, но я думаю, что в ней есть несколько действенных вещей, которые вы можете попробовать.
И мы просто хотим побудить вас использовать эти вещи и рассматривать не симуляторы усилителя кемпера, проблему, а просто то, как вы их используете. Просто примите это и просто попытайтесь [01:02:00] выяснить это, потому что вы не можете этого понять. Дело не в тех инструментах, которые у вас есть. Например, если у вас есть современные приложения, они все сделают.
Да,
Малком: [01:02:08] определенно
Бенедикт: [01:02:08] с вами.
